基于介孔颗粒的荧光适配体检测microRNA方法与流程

文档序号:11913383阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种microRNA纳米检测系统,其特征在于,所述microRNA纳米检测系统以介孔聚多巴胺纳米颗粒为载体,以荧光素标记的核酸适配体为探针,探针装载进入介孔孔道发生荧光猝灭;microRNA识别孔内探针形成的双链核酸复合体脱离颗粒形成荧光恢复;以DNA限制性内切酶I(DNase I)的剪切功能实现信号放大功能,检测microRNA的浓度范围为10pM-100nM。

2.如权利要求1所述的microRNA纳米检测系统,其特征在于,所述介孔聚多巴胺纳米载体颗粒粒径为50nm~100nm,介孔孔径为4nm~40nm。

3.一种如权利要求1所述microRNA纳米检测系统的纳米载体建立方法,其特征在于,所述纳米载体建立方法包括以下步骤:

步骤一,在烧瓶中加入180mg~540mg嵌段共聚物F127、180mg~540mg均三甲苯、50mL~70mL无水乙醇、50mL~100mL去离子水,搅拌10min~60min后加入60mg~120mg三羟甲基氨基甲烷盐酸盐、40mg~100mg多巴胺盐酸盐,室温搅拌20小时~30小时;

步骤二:取反应原液与丙酮混匀,反应原液与丙酮的体积比5:2~5,11000rpm离心10min~20min,弃上清;加入20mL无水乙醇和10mL丙酮,超声20min~60min,11000rpm离心5min~20min,重复两次;最后收集沉淀即为介孔聚多巴胺纳米载体,将其分散于无水乙醇中保存。

4.一种如权利要求3所述纳米载体建立方法建立的纳米载体。

5.一种利用如权利要求4所述纳米载体的检测microRNA的方法,其特征在于,所述检测microRNA的方法包括以下步骤:

步骤一,荧光适配体的装载,在1mL检测缓冲液中加入10~120μg介孔聚多巴胺纳米颗粒和50nM羟基荧光素标记的核酸适配体,混匀30min,作为检测体系;

步骤二,microRNA样品检测,在检测体系中加入含有待检测microRNA的样品和10U~100U的DNA限制性内切酶I,37℃混匀20min~200min;将待荧光分析的溶液加入到石英比色皿中,利用荧光分光光度计检测荧光强度,激发光波长为480nm,发射光波长为523nm,以荧光强度的增加表示microRNA的量。

6.如权利要求5所述的检测microRNA的方法,其特征在于,所述步骤一中检测缓冲液溶剂为去离子水,其溶液组分及含量为:

三羟甲基氨基甲烷盐酸盐,20毫摩尔每升;

氯化钠,140毫摩尔每升;

氯化钾,5毫摩尔每升;

氯化钙,1毫摩尔每升;

氯化镁,1毫摩尔每升;

pH为7.6。

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