测定2‑氯甲基‑3‑甲基‑4‑(3‑甲氧丙氧基)吡啶盐酸盐中有机杂质的方法与流程

技术特征：

1.一种测定2-氯甲基-3-甲基-4-(3-甲氧丙氧基)吡啶盐酸盐中有机杂质的方法，其特征在于，所述方法为HPLC方法，所述HPLC方法采用以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱，采用二极管阵列检测器或紫外检测器，按以下方式进行梯度洗脱：

设洗脱时间为t，

0min＜t≤10min、30min＜t≤40min时，流动相为第一洗脱液，所述第一洗脱液由pH5.5～6.5缓冲溶液与甲醇组成，按体积百分数计，所述pH5.5～6.5缓冲溶液为48％～52％，其余为甲醇；

10min＜t≤30min时，流动相为第二洗脱液，所述第二洗脱液由pH5.5～6.5缓冲溶液与乙腈组成，按体积百分数计，所述pH5.5～6.5缓冲溶液为58％～62％，其余为乙腈。

2.根据权利要求1所述的测定2-氯甲基-3-甲基-4-(3-甲氧丙氧基)吡啶盐酸盐中有机杂质的方法，其特征在于，所述pH5.5～6.5缓冲溶液采用pH6.0缓冲溶液。

3.根据权利要求2所述的测定2-氯甲基-3-甲基-4-(3-甲氧丙氧基)吡啶盐酸盐中有机杂质的方法，其特征在于，0min＜t≤10min、30min＜t≤40min时，所述流动相为第一洗脱液，所述第一洗脱液由pH6.0缓冲溶液与甲醇组成，按体积百分数计，所述pH6.0缓冲溶液为50％，其余为甲醇；

10min＜t≤30min时，所述流动相为第二洗脱液，所述第二洗脱液由pH6.0缓冲溶液与乙腈组成，按体积百分数计，所述pH6.0缓冲溶液为60％，其余为乙腈。

4.根据权利要求1所述的测定2-氯甲基-3-甲基-4-(3-甲氧丙氧基)吡啶盐酸盐中有机杂质的方法，其特征在于，所述pH5.5～6.5缓冲溶液的浓度范围为0.002mo1/L～0.05mol/L；和/或，检测波长为254nm～300nm；和/或，所述流动相的流速为0.8mL/min～1.2mL/min；和/或，柱温为25℃～40℃。

5.根据权利要求4所述的测定2-氯甲基-3-甲基-4-(3-甲氧丙氧基)吡啶盐酸盐中有机杂质的方法，其特征在于，所述pH5.5～6.5缓冲溶液的浓度范围为0.005mo1/L～0.015mol/L；和/或，所述检测波长为264nm；和/或，所述流动相的流速为1.0mL/min；和/或，柱温为30℃。

6.根据权利要求1～5中任一项所述的测定2-氯甲基-3-甲基-4-(3-甲氧丙氧基)吡啶盐酸盐中有机杂质的方法，其特征在于，所述pH5.5～6.5缓冲溶液为pH5.5～6.5磷酸盐缓冲溶液。

7.根据权利要求1～5中任一项所述的测定2-氯甲基-3-甲基-4-(3-甲氧丙氧基)吡啶盐酸盐中有机杂质的方法，其特征在于，所述色谱柱为YMC Triart-C18柱。

8.根据权利要求1～5中任一项所述的测定2-氯甲基-3-甲基-4-(3-甲氧丙氧基)吡啶盐酸盐中有机杂质的方法，其特征在于，所述HPLC方法具体包括以下步骤：

(1)有机杂质标准曲线的建立：分别称取杂质A对照品、杂质B对照品、杂质C对照品、杂质D对照品和2-氯甲基-3-甲基-4-(3-甲氧丙氧基)吡啶盐酸盐对照品适量，用甲醇溶解并稀释，配制成一系列不同浓度的混合对照品溶液，其中含杂质A、杂质B、杂质D和2-氯甲基-3-甲基-4-(3-甲氧丙氧基)吡啶盐酸盐的浓度均在4μg/ml～0.5μg/ml范围内，含杂质C的浓度在2μg/ml～0.25μg/ml范围内，在所述HPLC方法的色谱条件下进行测定，记录色谱图，以各组分峰面积对其浓度作图，得到各组分的标准曲线；

(2)待测样品中有机杂质含量的测定：将2-氯甲基-3-甲基-4-(3-甲氧丙氧基)吡啶盐酸盐待测样品用甲醇溶解并稀释，制成浓度为1mg/ml的供试品溶液，采用所述HPLC方法，在所述步骤(1)相同的色谱条件下进行测定，记录色谱图，供试品溶液中已知杂质A～D的浓度根据所述步骤(1)中对应杂质的标准曲线求得，供试品溶液中未知杂质的浓度根据所述步骤(1)中2-氯甲基-3-甲基-4-(3-甲氧丙氧基)吡啶盐酸盐的标准曲线求得，再利用供试品溶液中各杂质浓度除以供试品溶液的浓度，得到待测样品中各杂质的含量。

9.根据权利要求1～5中任一项所述的测定2-氯甲基-3-甲基-4-(3-甲氧丙氧基)吡啶盐酸盐中有机杂质的方法，其特征在于，所述有机杂质包括杂质A、杂质B、杂质C和杂质D，所述杂质A为：所述杂质B为：所述杂质C为：所述杂质D为：

10.根据权利要求1～5中任一项所述的测定2-氯甲基-3-甲基-4-(3-甲氧丙氧基)吡啶盐酸盐中有机杂质的方法，其特征在于，所述HPLC方法中，杂质A、杂质B、杂质C、杂质D和2-氯甲基-3-甲基-4-(3-甲氧丙氧基)吡啶盐酸盐均完全分离，各相邻峰之间的分离度均大于1.5；杂质A、杂质B或杂质D在供试品中的质量百分比为0.05％时，信噪比均不低于10，即杂质A、杂质B或杂质D的定量限均达到0.05％；杂质C在供试品中的质量百分比为0.025％时，信噪比不低于10，即杂质C的定量限达到0.025％。