一种ASE‑HPLC法测定陈皮中橙皮苷含量的方法与流程

本发明属于化学检测领域，尤其是一种ase-hplc法测定陈皮中橙皮苷含量的方法。
背景技术：
：《中国药典》2015年版一部制备供试品方法：取本品粗粉约1g，精密称定，置索氏提取器中，加石油醚(60～90℃)80ml，加热回流2～3小时，弃去石油醚，药渣挥干，加甲醇80ml，再加热回流至提取液无色，放冷，滤过，滤液置100ml量瓶中，用少量甲醇分数次洗涤容器，洗液滤入同一量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。该方法回流时间较长，且对技术人员的专业水平要求较高。技术实现要素：针对上述不足，本发明旨在提供一种ase-hplc法测定陈皮中橙皮苷含量的方法，该方法提取时间短、且检测精度高。为了实现上述技术效果，本发明提供的技术方案是这样的：一种ase-hplc法测定陈皮中橙皮苷含量的方法，依次包括下述步骤：步骤1：采用ase法萃取陈皮粉末，并收集甲醇萃取液；步骤2：采用hplc法测定甲醇萃取液中橙皮苷的含量。优选地，步骤1所述的萃取包括先用石油醚萃取，再用甲醇萃取。优选地，所述的步骤1包括下述子步骤：步骤s1：将陈皮样品粉碎，取1g与1g硅藻土混合；步骤s2：将步骤1所得的混合物装于放有纤维滤膜的ase萃取池中，加硅藻土至与池口平行；步骤s3：先用石油醚萃取，弃去萃取液；再用甲醇作为萃取液萃取，萃取结束后，用甲醇将其定容至100ml，即可。优选地，步骤s3所述的石油醚的使用温度为60～90℃。优选地，步骤s3所述的使用石油醚萃取的参数为：温度为75℃，时间为3min，次数为1次，冲洗体积为60％，吹扫时间为60s；优选地，步骤s3所述的使用甲醇萃取的参数为：温度为100℃，时间为8min，次数为3次，冲洗体积为60％，吹扫时间为60s。优选地，步骤1所述的hplc法的检测参数为：色谱柱为ace,ultracoresuperc18；柱温为40℃；流速为0.3ml/min；流动相为甲醇-醋酸-水；检测波长为283nm。优选地，所述的色谱柱的规格为2.5μm，2.1*75mm。优选地，所述的流动相为体积比等于35:4:61的甲醇-醋酸-水。本发明与传统方法相比，具有以下优点：本发明参考药典方法，先用石油醚(60～90℃)除杂，再用甲醇提取，获得良好的实验结果。本发明采用3因素3水平正交实验方案l9(33)安排实验，考察了采用甲醇作为萃取溶剂时萃取温度、静态萃取时间、循环次数，3个因素对加速溶剂萃取陈皮中橙皮苷的影响，确定从陈皮中提取橙皮苷的最佳快速溶剂萃取工艺。附图说明图1为以橙皮苷对照品进样的绝对量(mg)-峰面积进行的线性回归图；图2为橙皮苷对照品的色谱图；图3为采用ase法所得的供试品溶液的色谱图；图4为采用药典方法所得的供试品溶液的色谱图。具体实施方式下面结合具体实施方式，对本发明的权利要求做进一步的详细说明，但不构成对本发明的任何限制，任何在本发明权利要求保护范围内所做的有限次修改，仍在本发明的权利要求保护范围内。实施例11、仪器设备及试剂1.1仪器：电子分析天平(xa205du)、ase350快速溶剂萃取仪(美国dionex公司)、agilent1290液相色谱仪1.2试剂：水：符合gb/t6682规定的一级水；甲醇(ch4o)：色谱纯(液相色谱用)。2、方法2.1对照品溶液的制备：取橙皮苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含0.4mg的溶液，即得。2.2供试品溶液的制备2.2.1《中国药典》2015年版一部制备供试品方法：取本品粗粉约1g，精密称定，置索氏提取器中，加石油醚(60～90℃)80ml，加热回流2～3小时，弃去石油醚，药渣挥干，加甲醇80ml，再加热回流至提取液无色，放冷，滤过，滤液置100ml量瓶中，用少量甲醇分数次洗涤容器，洗液滤入同一量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。2.2.2快速溶剂萃取法(ase)制备供试品方法：样品经粉碎机粉碎，取粗粉约1g，精密称定，与约1g硅藻土混合均匀，待用，移入到预先放好纤维滤膜的ase10ml萃取池中再加入适量硅藻土，轻轻振摇使之与池口在同一水平线上，拧紧萃取池上盖，放入快速萃取仪中进行萃取。先用石油醚(60～90℃)萃取，弃去萃取液；再用甲醇作为萃取液萃取，萃取结束后，把萃取液转移转移至100ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。2.3ase萃取条件所述的第一次萃取步骤的参数为：温度为75℃，时间为3min，次数为1次，冲洗体积为60％，吹扫时间为60s；所述的第二次萃取步骤的参数为：温度为100℃，时间为8min，次数为3次，冲洗体积为60％，吹扫时间为60s。2.4色谱条件与系统适用性试验a)仪器：agilent1290；b)色谱柱：ace,ultracoresuperc18，2.5μm，2.1*75mm；c)柱温：40℃；d)流速：0.3ml/min；e)流动相：：甲醇-醋酸-水(35:4:61)；f)检测波长：283nm；以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；理论板数按橙皮苷峰计算应不低于2000。2.5测定法照高效液相色谱法(通则0512)测定分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各1μl，注入液相色谱仪，测定，即得。2.6标准限值要求本品按干燥品计算，含橙皮苷(c28h34o15)不得少于3.5％。2.7计算(外标法)式中cr——对照品溶液浓度，单位为微克每升(mg/l)；ax——供试品的峰面积；ar——对照品峰面积。注意：使用前萃取池底部应拆卸清理干净，否则容易引起压力不稳；萃取池底部的滤纸应在密封圈内，否则引起渗漏；萃取池装样时松紧适中，太松容易导致提取液过多；开机前检查气瓶气压是否达到1mpa；使用结束后清理干净，萃取池要及时晾干(容易生锈)。3、结果3.1线性关系取橙皮苷对照品，精密称定，加甲醇制成每1ml约含0.4mg的溶液，即得，然后分别精密吸取该溶液0.2μl、0.5μl、0.8μl、1.0μl、1.5μl、2.0μl进入lc测定，并依照上述方法测定，结果详见表1。以进样绝对量(mg)-峰面积进行线性回归，求得回归方程：橙皮苷y＝4794.1314x+41.4331，r2＝1.0000,橙皮苷在0.0822～0.8215mg围内呈良好的线性关系，详见图1。表1线性实验结果进样绝对量(mg)第一针峰面积第二针峰面积平均峰面积0.0822421.79071437.20343429.497070.20541032.550291021.528691027.039490.32861622.848511629.015751625.932130.41082010.518432001.511602006.015020.61613003.706542998.187993000.947270.82153977.982183971.106453974.544323.2精密度和稳定性实验取橙皮苷对照品溶液(0.3286mg/ml)，连续进样6次，记录峰面积，峰面积rsd为0.7％，表明仪器精密度良好。取同一供试品溶液，室温下放置，分别于0，2，4，6，8，12h依法测定。结果橙皮苷峰面积的rsd为0.3％，表明供试品溶液在12h内稳定。所测得的色谱图详见图2至图4，其中图2为橙皮苷对照品的色谱图，图3为采用ase法所得的供试品溶液的色谱图，图4为采用药典方法所得的供试品溶液的色谱图。3.3重复性实验取相同批号(批号20150801)的样品1g，共9份，精密称定，按上述ase提取方法提取供试品溶液，进样量为1μl，以上述的色谱条件平行试验，测得样品中橙皮苷的含量见表2，rsd为1.9％，结果表明ase提取方法重复性良好。表2重复性实验结果3.4样品不同仪器提取结果及与药典方法结果比较(3批)表3不同ase仪的提取结果比较表4ase法与药典方法的提取结果比较4、讨论：4.1ase提取溶剂的选择：本发明参考药典方法，先用石油醚(60～90℃)除杂，再用甲醇提取，获得良好的实验结果。4.2ase提取条件的优化采用3因素3水平正交实验方案l9(33)安排实验，考察了采用甲醇作为萃取溶剂时萃取温度、静态萃取时间、循环次数，3个因素对加速溶剂萃取陈皮中橙皮苷的影响(见表5)。确定从陈皮中提取橙皮苷的最佳快速溶剂萃取工艺，结果见表6。表5因素水平表6正交实验极差分析结果由极差分析可以看出，提取温度对橙皮苷的含量影响最大，其次是静态萃取时间和提取次数。最终确定最佳提取工艺组合为提取温度100℃，提取时间8min，提取次数3次。以上所述的仅为本发明的较佳实施例，凡在本发明的精神和原则范围内所做的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的范围内。当前第1页12