UPLC‑QTOF‑MS法检测抗风湿类保健食品中非法添加物质的方法与流程

本发明涉及一种检测抗风湿类保健食品中非法添加物质的方法，尤其是plc-qtof-ms法检测抗风湿类保健食品中非法添加物质的方法，属于化学检测技术领域。

背景技术：

近年来，由于莲子价格的不断攀升，不少厂家为了节约成本会用芸豆馅料冒充莲蓉馅料。芸豆内除含有维生素、无机盐等营养成分外，还含有一种对人体有害的成分——血球凝集素，该成分经高温烹调后可被破坏。但是如果在芸豆加工过程中，烹调时间短或翻炒不均匀，致使芸豆不熟，可引起食物中毒。芸豆在消化吸收过程中会产生过多的气体，造成胀肚。故消化功能不良、有慢性消化道疾病的人应尽量少食。还有一些对豆类蛋白敏感人群，如误食豆制品，可能会引起过敏性皮炎或严重的会产生休克。这些不适宜食用芸豆类食品的人群若误食没有标示有芸豆成分的莲蓉月饼，可能会造成不可预计的严重后果。

芸豆的检测依据国家标准gb/t23814-2009莲蓉制品中芸豆成分定性pcr检测方法，该方法为普通pcr法，主要过程为通过特异性基因序列扩增后用凝胶成像的方式鉴别，此法步骤繁琐，干扰因素较多，不利于批量检测。

技术实现要素：

针对上述技术问题，本发明的目的是提供一种检测方法简单，检测结果可靠的抗风湿类保健食品中非法添加物质的检测方法。

为解决上述技术问题，本发明的技术方案是这样的：

一种uplc-qtof-ms法检测抗风湿类保健食品中非法添加物质的方法，依次包括下述步骤：

1)制备对照品溶液

取对照品氢化可的松、地塞米松、醋酸泼尼松、阿司匹林、氨基比林、布洛芬、双氯芬酸钠、吲哚美辛、对乙酰氨基酚、甲氧苄啶、吡罗昔康、萘普生、保泰松，分别加甲醇溶解并稀释制成每1ml中含5μg对照品的溶液，即得；

2)制备供试品溶液

a)固体制剂：取1g固体制剂加甲醇25ml超声10分钟，定容到50ml4000r/min离心5min，过滤，待用；

b)液体制剂：取10ml定容至50ml摇匀，4000r/min离心5min，过滤，待用；

3)分别取对照品溶液和供试品溶液各1μl注入uhplc-qtof-ms，进行液质联用分析，记录液相色谱图及一级质谱与二级质谱；

4)结果判断

供试品色谱中，不得检出与对照品保留时间一致的色谱峰；若检出保留时间一致的色谱峰，色谱峰的一级质谱及二级质谱均不得与对照品一致色谱峰。

进一步的，上述的一种uplc-qtof-ms法检测抗风湿类保健食品中非法添加物质的方法，所述的液质联用分析方法为：

1)正离子模式

乙腈为流动相a，0.1％甲酸-5mmol/l甲酸铵水溶液为流动相b，按照的a∶b的不同比例进行梯度洗脱,所述流动相梯度如下：0-0.5min，70％a、30％b；0.5-7min，70％-5％a、30％-95％b；7-8min，5％a、95％b，后运行时间为2min；

电喷雾离子，毛细管电压4.0kv，喷嘴电压0v，脱溶剂气温度200℃，脱溶剂气流速16l/min，鞘气温度325℃，鞘气流速12l/min，扫描方式采用一级质谱全扫描，采集频率3spectra/s、二级质谱全扫描2spectra/s，碰撞能量：0v、10v、20v；质量采集范围50-1000m/z；

2)负离子模式：乙腈为流动相a：5mmol/l乙酸铵水溶液为流动相b，所述流动相梯度如下：0-0.5min，95％a、5％b；0.5-10min，95％-5％a、5％-95％b；10-11min，5％a、95％b，后运行时间为2min；

电喷雾离子源，毛细管电压3.5kv，喷嘴电压0.5kv，脱溶剂气温度130℃，脱溶剂气流速16l/min，鞘气温度200℃，鞘气流速12l/min，扫描方式采用一级质谱全扫描3spectra/s、二级质谱全扫描2spectra/s，碰撞能量：0v，10v，20v；质量采集范围50-1050m/z。

进一步的，上述的一种uplc-qtof-ms法检测抗风湿类保健食品中非法添加物质的方法，所述的uplc色谱柱采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，1.7μm粒径，5.0×3.0mm，流速：0.3ml/min；柱温：45℃。

本发明与现有技术相比，本发明提供的方法检测速度快，检测结果准确可靠，可重复性强。

附图说明

图1是氢化可的松在碰撞能量10v时二级图谱；

图2是氢化可的松在碰撞能量20v时二级图谱；

图3是地塞米松在碰撞能量10v时二级图谱；

图4是地塞米松在碰撞能量20v时二级图谱；

图5是醋酸泼尼松在碰撞能量10v时二级图谱；

图6是醋酸泼尼松在碰撞能量20v时二级图谱；

图7是阿司匹林在碰撞能量10v时二级图谱；

图8是阿司匹林在碰撞能量20v时二级图谱；

图9是氨基比林在碰撞能量10v时二级图谱；

图10是氨基比林在碰撞能量20v时二级图谱；

图11是布洛芬在碰撞能量10v时二级图谱；

图12是布洛芬在碰撞能量20v时二级图谱；

图13是双氯芬酸钠在碰撞能量10v时二级图谱；

图14是双氯芬酸钠在碰撞能量20v时二级图谱；

图15是吲哚美辛在碰撞能量10v时二级图谱；

图16是吲哚美辛在碰撞能量20v时二级图谱；

图17是对乙酰氨基酚在碰撞能量10v时二级图谱；

图18是对乙酰氨基酚在碰撞能量20v时二级图谱；

图19是甲氧苄啶在碰撞能量10v时二级图谱；

图20是甲氧苄啶在碰撞能量20v时二级图谱；

图21是吡罗昔康在碰撞能量10v时二级图谱；

图22是吡罗昔康在碰撞能量20v时二级图谱；

图23是萘普生在碰撞能量10v时二级图谱；

图24是萘普生在碰撞能量20v时二级图谱；

图25是保泰松在碰撞能量10v时二级图谱；

图26是保泰松在碰撞能量20v时二级图谱。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明的权利要求书做进一步说明，但不构成对本发明的任何限制，任何对本发明做有限次修改可得的技术方案仍然属于本发明所要保护的范围。

实施例1

1范围

本方法适用于抗风湿类保健食品中非法添加物质的检验。

本方法片剂、胶囊剂样品中各药物的检出限为2.5mg/kg；口服液样品中各药物的检出限为0.25mg/kg。

2结构式、分子式、精确分子质量等

2.1氢化可的松(hydrocortisone)

2.1.1分子式：c21h30o5

2.1.2精确分子质量：362.2093

2.1.3cas号：50-23-7

2.1.4结构式：

2.1.5理化特性

在乙醇或丙酮中略溶，在三氯甲烷中微溶，在乙醚中几乎不溶，在水中不溶。

2.2地塞米松醋酸酯(dexamethasone21-acetate)

2.2.1分子式：c24h31fo6

2.2.2精确分子质量：434.2105

2.2.3cas号：1177-87-3

2.2.4结构式：

2.2.5理化特性

在甲醇、乙醇、丙酮或二氧六环中略溶，在三氯甲烷中微溶，在乙醚中极微溶解，在水中几乎不溶。

2.3醋酸泼尼松(prednisone21-acetate)

2.3.1分子式：c23h28o6

2.3.2精确分子质量：400.1886

2.3.3cas号：125-10-0

2.3.4结构式：

2.3.5理化特性

在三氯甲烷中易溶，在丙酮中略溶，在乙醇或乙酸乙酯中微溶，在水中不溶。

2.4阿司匹林(acetylsalicylicacid)

2.4.1分子式：c9h8o4

2.4.2精确分子质量：180.0423

2.4.3cas号：50-78-2

2.4.4结构式：

2.4.5理化特性

在乙醇中易溶，在三氯甲烷或乙醚中溶解，在水或无水乙醚中微溶；在氢氧化钠溶液或碳酸钠溶液中溶解，但同时分解。

2.5氨基比林(aminophenazone)

2.5.1分子式：c13h17n3o

2.5.2精确分子质量：231.1372

2.5.3cas号：58-15-1

2.5.4结构式：

2.5.5理化特性

本品在乙醇或氯仿中易溶，在水或乙醚中溶解。

2.6布洛芬(ibuprofen)

2.6.1分子式：c13h18o2

2.6.2精确分子质量：206.1307

2.6.3cas号：15687-27-1

2.6.4结构式：

2.6.5理化特性

在乙醇、丙酮、三氯甲烷或乙醚中易溶，在水中几乎不溶；在氢氧化钠或碳酸钠试液中易溶。

2.7双氯芬酸钠(diclofenac)

2.7.1分子式：c14h10cl2nnao2

2.7.2精确分子质量：316.9986

2.7.3cas号：15307-79-6

2.7.4结构式：

2.7.5理化特性

在乙醇中易溶,在水中略溶,在三氯甲烷中不溶。

2.8吲哚美辛(indometacin)

2.8.1分子式：c19h16clno4

2.8.2精确分子质量：357.0768

2.8.3cas号：53-86-1

2.8.4结构式：

2.8.5理化特性

在丙酮中溶解，在甲醇、乙醇、三氯甲烷或乙醚中略溶，在甲苯中极微溶解，在水中几乎不溶。

2.9对乙酰氨基酚(paracetanol)

2.9.1分子式：c8h9no2

2.9.2精确分子质量：151.0633

2.9.3cas号：103-90-2

2.9.4结构式：

2.9.5理化特性

在热水或乙酵中易溶，在丙酮中溶解，在水中略溶。

2.10甲氧苄啶(trimethoprim)

2.10.1分子式：c14h18n4o3

2.10.2精确分子质量：290.1379

2.10.3cas号：738-70-5

2.10.4结构式：

2.10.5理化特性

在三氯甲烷中略溶，在乙醇或丙酮中微溶，在水中几乎不溶；在冰醋酸中易溶。

2.11吡罗昔康(piroxicam)

2.11.1分子式：c15h13n3o4s

2.11.2精确分子质量：331.0627

2.11.3cas号：36322-90-4

2.11.4结构式：

2.11.5理化特性

在三氯甲烷中易溶，在丙酮中略溶，在乙醇或乙醚中微溶，在水中几乎不

溶；在酸中溶解，在碱中略溶。

2.12萘普生(naproxen)

2.12.1分子式：c14h14o3

2.12.2精确分子质量：230.0943

2.12.3cas号：22204-53-1

2.12.4结构式：

2.12.5理化特性

在甲醇、乙醇或三氯甲烷中溶解，在乙醚中略溶，在水中几乎不溶。

2.13保泰松(phenylbutazone)

2.13.1分子式：c19h20n2o2

2.13.2精确分子质量：308.1525

2.13.3cas号：50-33-9

2.13.4结构式：

2.13.5理化特性

在丙酮或氯仿中易溶，在乙醇或乙醚中溶解，在水中几乎不溶；在氢氧化

碱溶液中溶解。

3uplc-qtof-ms法(检验方法)

3.1试剂和材料

3.1.1甲醇，色谱纯；

3.1.2甲酸，质谱级；

3.1.3对照品:氢化可的松、地塞米松、醋酸泼尼松、阿司匹林、氨基比林、布洛芬、双氯芬酸钠、吲哚美辛、对乙酰氨基酚、甲氧苄啶、吡罗昔康、萘普生、保泰松；

3.1.4对照品溶液:取上表中对照品适量，加甲醇溶解并稀释制成每1ml中含5μg的溶液，即得，使用时可根据实际情况稀释至适当浓度。

3.2仪器与设备

3.2.1uhplc-qtof-ms

3.3.2色谱柱：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂:1.7μm粒径，5.0×3.0mm，流速：0.3ml/min。柱温：45℃。

3.3.2.1正离子模式：乙腈:0.1％甲酸-5mmol/l甲酸铵水溶液为流动相。电喷雾离子源(esi+)，毛细管电压4.0kv,喷嘴电压0v，脱溶剂气温度200℃，脱溶剂气流速16l/min,鞘气温度325℃,鞘气流速12l/min，扫描方式采用一级质谱全扫描，采集频率3spectra/s、二级质谱全扫描2spectra/s，碰撞能量：0v、10v、20v；质量采集范围50-1000m/z。

流动相梯度

3.3.2.2负离子模式：乙腈：5mmol/l乙酸铵水溶液为流动相。电喷雾离子源(esi-)，毛细管电压3.5kv,喷嘴电压0.5kv，脱溶剂气温度130℃，脱溶剂气流速16l/min,鞘气温度200℃,鞘气流速12l/min，扫描方式采用一级质谱全扫描3spectra/s、二级质谱全扫描2spectra/s，碰撞能量：0v，10v，20v；质量采集范围50-1050m/z。

3.3.2.3流动相梯度

3.3分析步骤

3.3.1固体制剂：取一次服用量(一般取1g)加甲醇25ml超声10分钟，定容到50ml4000r/min离心5min，过滤，待用。

3.3.2液体制剂：取10ml定容至50ml摇匀，4000r/min离心5min，过滤，待用。

3.3.3取对照品溶液和供试品溶液各1μl注入液相色谱仪，进行液质联用分析，记录液相色谱图及一级质谱与二级质谱。

3.4结果判断

结果判断供试品色谱中，应不得检出与对照品保留时间一致的色谱峰；若检出保留时间一致的色谱峰，色谱峰的一级质谱及二级质谱均不得与对照品一致，各个组分的二级质谱图见图1至图26。

以上所述的仅为本发明的较佳实施例，凡在本发明的精神和原则范围内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。