本发明涉及金黄色葡萄球菌的检测技术领域，尤其指一种金黄色葡萄球菌的快速检测方法。
背景技术：
金黄色葡萄球菌是是人类的一种重要病原菌，隶属于葡萄球菌属（Staphylococcus），有“嗜肉菌"的别称，是革兰氏阳性菌的代表，可引起许多严重感染。金黄色葡萄球菌在自然界中无处不在，空气、水、灰尘及人和动物的排泄物中都可找到。因此，食品受到污染的机会很多。美国疾病控制中心报告，由金黄色葡萄球菌引起的感染占第二位，仅次于大肠杆菌。金黄色葡萄球菌肠毒素是个世界性卫生难题，在美国由金黄色葡萄球菌肠毒素引起的食物中毒，占整个细菌性食物中毒的33%，加拿大则更多，占到45%，中国金黄色葡萄球菌引起的食物中毒事件也时有发生。
准确及时的检测手段是预防和控制病原微生物传播的关键。目前金黄色葡萄球菌的检测多采用传统的微生物培养的方法， 主要包括前增菌、选择性增菌、平板分离、生化试验和血清学鉴定等步骤，涉及的实验较多、操作较烦琐、检测周期较长(一般需要4～7d)、准备和收尾工作繁重，已无法满足现阶段食品中致病菌快速检测的现实需要。
技术实现要素：
为了解决上述技术问题，本发明提供一种金黄色葡萄球菌的快速检测方法。
一种金黄色葡萄球菌的快速检测方法，包括以下步骤：
1.培养基配制
1）增菌培养基配制：称取 26.5 g 增菌培养基，加入预热 42±1 ℃去离子水 1 L，充分溶解，备用；
2）选择性培养基配制：称取 7.5 g 选择培养基，加入预热 42±1 ℃去离子水 100 mL，充分溶解，备用；
2. 无菌操作取 25 g(mL)样品到均质袋中，并向其中加入 225 mL 预热后的增菌培养基，放入均质器中均质 2 min；42 ℃静止或者振荡培养 6 h，根据需要也可以延长至 24 h；取 0.1 mL 上述增菌液，加入含 1 mL 选择性培养基的 5 mL 玻璃管内，42±1 ℃继续培养 18-24 h；
3. 将培养物混合均匀，取 1 mL 到试管中沸水（100 ℃）加热 10 min，冷却至室温，用滴管滴加 3-4 滴至胶体金检测卡的样品孔，反应 5-10 min，判读结果，超过 30 min 显色无效。
进一步的，所述增菌培养基包括以下原料（按重量份数计）：酵母膏12～14g、大豆胨3～3.5g、琼脂13～16g、氯化钠17～19g、丙酮酸钠4～4.2g、甘氨酸0 .8～1 .1g、氯化锂0 .3～0 .5g、4-甲基伞型酮-β-D-葡萄糖苷5.5～6.2g、对硝基β-D-葡萄糖苷0.2～0.5g、对硝基酚-α-D-吡喃半乳糖1.2～1.5g。
进一步的，所述选择培养基包括以下原料：胰蛋白胨25g；葡萄糖液200ml；芋酸5g；假细锥甲素0 .5g；枸橼酸镁25g；丙酮酸钠8～12mg；亚碲酸钾0 .6g；琼脂0 .2g；阿波酮酸0 .1g；浓度300g/L的马铃薯水煮液200～300ml；N-乙酰基-D-葡萄糖胺5mg。
本发明的有益效果是：本发明提供了一种快速灵敏的检测样品中的金黄色葡萄球菌的方法，为金黄色葡萄球菌的快速定性检测提供了一种便捷有效地途径。缩短金黄色葡萄球菌检测时间，加快检测进程，缩短检测人员的劳动时间，降低劳动强度，节省水电及储存清洁等成本，提高检测效率，降低检测成本，便于现场检测，提高准确度。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步说明：
实施例一
一种金黄色葡萄球菌的快速检测方法，包括以下步骤：
1.培养基配制
1）增菌培养基配制：称取 26.5 g 增菌培养基，加入预热 42 ℃去离子水 1 L，充分溶解，备用；
2）选择性培养基配制：称取 7.5 g 选择培养基，加入预热 42 ℃去离子水 100 mL，充分溶解，备用；
2. 无菌操作取 25 g(mL)样品到均质袋中，并向其中加入 225 mL 预热后的增菌培养基，放入均质器中均质 2 min；42 ℃静止或者振荡培养 6 h，根据需要也可以延长至 24 h；取 0.1 mL 上述增菌液，加入含 1 mL 选择性培养基的 5 mL 玻璃管内，42 ℃继续培养 21 h；
3. 将培养物混合均匀，取 1 mL 到试管中沸水（100 ℃）加热 10 min，冷却至室温，用滴管滴加 3-4 滴至胶体金检测卡的样品孔，反应 5-10 min，判读结果，超过 30 min 显色无效。
其中，所述增菌培养基包括以下原料（按重量份数计）：酵母膏13g、大豆胨3.3g、琼脂15g、氯化钠18g、丙酮酸钠4.1g、甘氨酸1g、氯化锂0.4g、4-甲基伞型酮-β-D-葡萄糖苷6、对硝基β-D-葡萄糖苷0.3g、对硝基酚-α-D-吡喃半乳糖1.4g。
其中，所述选择培养基包括以下原料（按重量份数计）：胰蛋白胨25g；葡萄糖液200ml；芋酸5g；假细锥甲素0 .5g；枸橼酸镁25g；丙酮酸钠8mg；亚碲酸钾0 .6g；琼脂0 .2g；阿波酮酸0 .1g；浓度300g/L的马铃薯水煮液200ml；N-乙酰基-D-葡萄糖胺5mg。
实施例二
一种金黄色葡萄球菌的快速检测方法，包括以下步骤：
1.培养基配制
1）增菌培养基配制：称取 26.5 g 增菌培养基，加入预热 43 ℃去离子水 1 L，充分溶解，备用；
2）选择性培养基配制：称取 7.5 g 选择培养基，加入预热 43 ℃去离子水 100 mL，充分溶解，备用；
2. 无菌操作取 25 g(mL)样品到均质袋中，并向其中加入 225 mL 预热后的增菌培养基，放入均质器中均质 2 min；42 ℃静止或者振荡培养 6 h，根据需要也可以延长至 24 h；取 0.1 mL 上述增菌液，加入含 1 mL 选择性培养基的 5 mL 玻璃管内，43 ℃继续培养 18-24 h；
3. 将培养物混合均匀，取 1 mL 到试管中沸水（100 ℃）加热 10 min，冷却至室温，用滴管滴加 3-4 滴至胶体金检测卡的样品孔，反应 5-10 min，判读结果，超过 30 min 显色无效。
其中，所述增菌培养基包括以下原料（按重量份数计）：酵母膏14g、大豆胨3.5g、琼脂16g、氯化钠19g、丙酮酸钠4.2g、甘氨酸1 .1g、氯化锂0 .5g、4-甲基伞型酮-β-D-葡萄糖苷6.2g、对硝基β-D-葡萄糖苷0.5g、对硝基酚-α-D-吡喃半乳糖1.5g。
其中，所述选择培养基包括以下原料（按重量份数计）：胰蛋白胨25g；葡萄糖液200ml；芋酸5g；假细锥甲素0 .5g；枸橼酸镁25g；丙酮酸钠12mg；亚碲酸钾0 .6g；琼脂0 .2g；阿波酮酸0 .1g；浓度300g/L的马铃薯水煮液300ml；N-乙酰基-D-葡萄糖胺5mg。
实施例三
一种金黄色葡萄球菌的快速检测方法，包括以下步骤：
1.培养基配制
1）增菌培养基配制：称取 26.5 g 增菌培养基，加入预热41℃去离子水 1 L，充分溶解，备用；
2）选择性培养基配制：称取 7.5 g 选择培养基，加入预热41 ℃去离子水 100 mL，充分溶解，备用；
2. 无菌操作取 25 g(mL)样品到均质袋中，并向其中加入 225 mL 预热后的增菌培养基，放入均质器中均质 2 min；42 ℃静止或者振荡培养 6 h，根据需要也可以延长至 24 h；取 0.1 mL 上述增菌液，加入含 1 mL 选择性培养基的 5 mL 玻璃管内，41 ℃继续培养 18-24 h；
3. 将培养物混合均匀，取 1 mL 到试管中沸水（100 ℃）加热 10 min，冷却至室温，用滴管滴加 3-4 滴至胶体金检测卡的样品孔，反应 5-10 min，判读结果，超过 30 min 显色无效。
其中，所述增菌培养基包括以下原料（按重量份数计）：酵母膏12g、大豆胨3g、琼脂13、氯化钠17g、丙酮酸钠4g、甘氨酸0 .8g、氯化锂0 .3g、4-甲基伞型酮-β-D-葡萄糖苷5.5g、对硝基β-D-葡萄糖苷0.2g、对硝基酚-α-D-吡喃半乳糖1.2g。
其中，所述选择培养基包括以下原料（按重量份数计）：胰蛋白胨25g；葡萄糖液200ml；芋酸5g；假细锥甲素0 .5g；枸橼酸镁25g；丙酮酸钠10mg；亚碲酸钾0 .6g；琼脂0 .2g；阿波酮酸0 .1g；浓度300g/L的马铃薯水煮液250ml；N-乙酰基-D-葡萄糖胺5mg。
最后需要说明的是，具体实施方式是对本发明的进一步说明而非限制，对本领域普通技术人员来说，可以在不脱离本发明实质内容的情况下做进一步变换，而所有这些变换都应属于本发明所附权利要求的保护范围。