本发明涉及一种壮药材藤苦参中活性成分检测方法，具体的说是一种测定藤苦参中活性成分总强心苷含量的方法，属于医药
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：壮药藤苦参(radixstreptocaulonis)为萝藦科植物马连鞍streptocaulonjuventas(lour.)merr.的干燥根，壮语称“勾咩”，该药材广泛分布于我国广西、云南等省及印度、越南、缅甸、老挝、柬埔寨和马来西亚等地；别名古羊藤、老鸦咀、毛青才、南苦参、奶藤、马达、红马连鞍、虎阴藤、老鸦嘴。其木质根被用于治疗感冒发烧，肠炎，痢疾，胃痛，跌打肿痛，毒蛇咬伤等症。藤苦参属广西特色、大宗、壮瑶药材，为国家部颁标准民族医药产品及知名壮成药外感风痧颗粒(片)的主方药，也是傣药经方雅叫哈顿散中的主治药之一。文献报道从藤苦参根乙醇提取物中分离出19个化合物，其中有9个为三萜皂苷元，8个强心苷类成分，还有其它成分。这19个化合物为：α-香树脂醇乙酸酯、羽扇豆醇乙酸酯、11-乙氧基-3-乙酰基-12-乌苏烯-3-醇、11-酮-α-香树脂醇乙酸酯、α-香树脂醇、羽扇豆醇、24-亚甲基环木波罗烷醇、环木菠罗-23-烯-3β,25-二醇、β-古甾醇、杠柳苷元洋地黄毒糖苷、藤苦参毒苷元、环木波罗烷-3,24,25-三醇、烟酸、洋地黄毒苷元、16-o-乙酰基羟基洋地黄毒苷元、杠柳苷元、16-o-乙酰基羟基杠柳苷元、杠柳苷元葡萄糖苷、藤苦参毒苷a。根据文献研究表明藤苦参素(16-o-acetglgitoxgenin)在体外可诱导肿瘤细胞凋亡，具有较好的抗肿瘤活性。藤苦参收载于《广西中药材标准》(1990年版)、《广西壮药材质量标准汇编(第一卷)》等地方标准中，但原有质量标准中仅有简单的显微鉴别，而没有活性成分含量的检测方法，难以全面准确控制药材的质量。总强心苷为藤苦参的活性成分之一，建立一种快速、准确、重现性好的检测藤苦参中活性成分-总强心苷的方法，以便更好地对该药材进行质量监控具有重要意义。技术实现要素：本发明目的在于提供一种测定中药材藤苦参中活性成分之一总强心苷含量的方法，该方法简单、稳定、重现性好，可用于该药材的质量控制。本发明的目的是这样实现的：该测定方法利用碱性苦味酸溶液与藤苦参中总强心苷类成份发生显色反应后，采用紫外分光光度法测定显色样品的吸光度，从而测定总强心苷的含量，具体步骤如下：(1)对照品溶液的制备及标准曲线的绘制：精密称取地高辛对照品10mg，置于25ml容量瓶中用60％乙醇溶解后定容至刻度制成标准溶液。用移液管移取标准液0，0.1，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0ml，分别置于具塞试管中，加入60％乙醇稀释至1ml，分别加入碱性苦味酸溶液(a液：2％苦味酸溶液：b液：15％naoh，使用前按a:b＝90:10混合)4ml。摇匀，室温放置20min，在波长415nm测吸光度。以吸光度a纵坐标，浓度c为横坐标，作标准曲线。结果得回归方程y＝14.968x+0.008，r＝0.9969。(2)供试品溶液的制备：精密称取藤苦参粗粉2g，置于100ml锥形瓶，加入70％乙醇40ml，超声提取2次，每次40分钟，提取后补重，过滤合并滤液，挥干溶剂，加入60％乙醇溶解，定容至50ml，在从50ml容量瓶中取5ml样品溶液，放入25ml容量瓶中，稀释至刻度，即得供试品溶液。(3)样品检测：用移液管精密移取样品溶液1.0ml，置于具塞试管中，加入碱性苦味酸溶液(a液：2％苦味酸溶液：b液：15％naoh，使用前按a:b＝90:10混合)4ml。摇匀，室温下放置20min，在波长415nm测吸光度，计算强心苷的含量。本发明具有以下优点和积极效果：1、本发明所述方法简单、准确、重现性和稳定性好，可为全面评价和控制壮药材藤苦参的质量提供理论基础和科学依据。2、本发明方法采用比色法，利用紫外分光光度法测定藤苦参中总强心苷的含量，以地高辛(digoxin)为对照品，碱性苦味酸溶液为显色剂，415nm的波长下检测，在0～0.08mg/ml范围内对照品含量与吸光度呈良好的线性关系；回归方程为y＝14.968x+0.008(r＝0.9969)；精密度rsd＝0.1％；平均加样回收率为95.51％，rsd为2.16％(n＝6)；藤苦参中总强心苷含量为2.07mg/g。3、强心苷类成份为藤苦参的主要活性成分，本发明所述测定藤苦参中总强心苷含量的方法，为藤苦参药材广泛临床应用及产业化提供理论依据。附图说明图1是本发明对照品及供试品uv光谱图(附图标记说明：1-供试品溶液2-对照品溶液)图2是本发明标准曲线图具体实施方式以下结合附图和具体实施方式对本发明作以进一步的阐述，以便本领域的技术人员更了解本发明，但并不以此限制本发明。材料与仪器材料藤苦参购买于南宁市景昌中药饮片有限公司，生产批号为20160401。地高辛对照品购买于中国药品生物制品检定所，生产批号为100015-200709，所用试剂均为分析纯。仪器分析天平(me104e)、725型紫外可见分光光度计(上海舜宇恒平科学仪器有限公司)。具体步骤如下：对照品溶液的制备：精密称取地高辛对照品10mg，置于25ml容量瓶中用60％乙醇溶解后定容至刻度制成标准溶液。供试品溶液的制备：精密称取藤苦参粗粉2g，置于100ml锥形瓶，加入70％乙醇40ml，超声提取2次，每次40分钟，提取后补重，过滤合并滤液，挥干溶剂，加入60％乙醇溶解，定容至50ml，在从50ml容量瓶中取5ml样品溶液，放入25ml容量瓶中，稀释至刻度即得供试品溶液。测定波长的选择：分别精密量取上述对照品溶液、供试品溶液1ml置于具塞试管中，加入碱性苦味酸溶液(a液：2％苦味酸溶液：b液：15％naoh，使用前按a:b＝90:10混合)4ml。摇匀，室温下放置20min，以不加样品溶液同法操作下的碱性苦味酸溶液为空白，进行光谱扫描，结果见图1。表明最大吸收波长为415nm，故选择测定波长为415nm。方法学考查线性关系：用移液管移取标准液0，0.1，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0ml，分别置于具塞试管中，加入60％乙醇稀释至1ml，分别加入碱性苦味酸溶液(a液：2％苦味酸溶液：b液：15％naoh，使用前按a:b＝90:10混合)4ml。摇匀，室温放置20min，在波长415nm测吸光度。以吸光度a纵坐标，浓度c为横坐标，作标准曲线。结果得回归方程y＝14.968x+0.008，r＝0.9969。标准曲线见图2。精密度实验精密量取对照品溶液0.5ml，稀释至1ml，加入碱性苦味酸溶液(a液：2％苦味酸溶液：b液：15％naoh，使用前按a:b＝90:10混合)4ml。摇匀，显色20min，在波长415nm，重复测定6次a值。结果见表1，吸光度的rsd为0.1％，说明仪器精密度良好。表一精密度试验结果稳定性实验精密量取样品溶液1ml，加入碱性苦味酸溶液(a液：2％苦味酸溶液：b液：15％naoh，使用前按a:b＝90:10混合)4ml。摇匀，显色20min，在波长494nm，每隔10min测定一次吸光度。吸光度的rsd为3.29％，说明显色后室温放置20-40min内，其吸光度较稳定，结果见表二。表二稳定性试验结果重复性实验精密量取6份样品溶液1ml，加入碱性苦味酸溶液(a液：2％苦味酸溶液：b液：15％naoh，使用前按a:b＝90:10混合)4ml。摇匀，放置20min，在波长415nm下测定吸光度。结果吸光度的rsd为2.4％，结果见表三，表明此方法的重复性良好。表三重复性试验结果加样回收实验精密量取已知含量的藤苦参样品5份，分别加入一定量的地高辛对照品，加入碱性苦味酸溶液(a液：2％苦味酸溶液：b液：15％naoh，使用前按a:b＝90:10混合)4ml。摇匀，放置20min,在波长415nm测吸光度，计算回收率，平均回收率为95.51％，rsd为2.16％，结果见表四。表四加样回收实验结果含量的测定用移液管精密移取样品溶液1.0ml，置于具塞试管中，加入碱性苦味酸溶液(a液：2％苦味酸溶液：b液：15％naoh，使用前按a:b＝90:10混合)4ml。摇匀，室温下放置20min，在波长415nm测吸光度，计算强心苷的含量，结果见表五。表五六批样品总强心苷含量样品吸光度(a)强心苷含量(g/mg)10.1062.04620,1092.10930.1072.06740.1082.08450.1052.02760.1072.065平均值2.067综上，本发明所建立的比色法测定壮药材藤苦参中总强心苷含量的方法，具有操作简便、精密度好、重复性高的特点，可全面、更有效地控制该药材的质量。当前第1页12