淫羊藿次苷类化合物、其制备方法,及其在促进人细胞产生γ-干扰素作用和在疾病治疗中 ...的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种淫羊藿次苷类化合物及其制备方法，该类化合物在促进人体细胞 产生γ-干扰素，显著提高人体免疫力的作用；以及基于此原理所涉及的在疾病治疗、保健 品、美容护肤品等方面的应用。
【背景技术】
[0002] 人体的免疫力是指机体抵抗寄主细胞外或寄主细胞内致病因子感染或入侵的抵 御能力，即维护人体内正常和稳定环境的能力。人类生存环境中，如空气、水、食物、及人类 生活所接触物品等，都含有各种各样有害健康的微生物，如细菌、病毒、支原体、衣原体、真 菌等病原体（寄主细胞外致病因子）。人体内也可能受环境变化影响，出现病毒或细菌在 寄主细胞内的潜伏，或基因变异所产生的癌细胞等（寄主细胞内致病因子）的感染或入侵。 当这些致病因子感染或侵入机体时，在正常情况下，人体将通过自身的免疫系统产生相应 的抗体或各种细胞因子（如干扰素等），将感染或侵入的致病因子吞噬和消灭。当人体的免 疫体系所产生的免疫力（抗体或细胞因子等）不足以对抗致病因子的进攻时，人就会生病。
[0003] 提高人体自身免疫力，对于保持身体健康，防止或减少疾病的发生具有重要意义。 通过药物增强人体免疫力是预防和治疗感染性疾病及癌症等的有效方法，即免疫治疗。发 现和发展增强人体免疫力的有效药物对于自身免疫力低下，特别是对患有自身免疫性疾病 的人群尤为重要。
[0004] 从总体上看，能够用于免疫治疗的药物很少。目前，临床上使用的增强人体免疫力 药物，主要是大分子的肽类或蛋白类药物，如胸腺肽、免疫球蛋白、干扰素等，这些药物都有 特定的适应症，有很大的局限性，并且易降解、半衰期较短、生物利用度差、大规模合成与 分离纯化难度大。
[0005] 国内外以天然产物为基础发展的提高人体免疫力的制剂，基本上属于保健品范 畴，实际效果很难保证。迄今为止，寻找具有良好增强免疫效果的小分子化合物的尝试均告 失败。尚无小分子化合物用于免疫治疗的报道。
[0006] 淫羊藿是一味传统中药材，现有技术中对其使用均为在中医理论指导下使用淫羊 藿植株煎汤、浸酒、熬膏，制丸散等。对于其中有效成分的分离并系统研宄较少，特别是其中 的淫羊藿次苷I和淫羊藿次苷C，由于其含量极低（它的同系物-淫羊藿苷含量较高），难 以进行有效的研宄，产业化应用更无从谈起。
【发明内容】
[0007] 本发明人长期致力于中药有效成分在免疫治疗方面的研宄。本发明人建立了基于 检测人外周血单个核细胞（PBMCs)产生γ-干扰素水平的免疫学试验模型。应用这个模 型，可以从包括传统中药、药用植物等在内的多种来源的化学成分中，筛选出具有促进（或 抑制）人外周血单个核细胞（PBMCs)产生γ-干扰素水平的化合物。由于人γ-干扰素是 人体的一种重要的抵抗疾病的免疫蛋白（细胞因子），它的产生水平，与人体的免疫力直接 相关。因此，该模型是筛选和发现具有提高人体免疫力功能药物的理想技术。
[0008] 在筛选过程中，本发明人非常惊讶地发现，淫羊藿中含量极低的两种成分一一淫 羊藿次苷I和淫羊藿次苷C，显示出了能够显著促进人外周血单个核细胞（PBMCs)产生 γ-干扰素水平的作用。而淫羊藿所含的其它天然化学成分，几乎没有任何相关的活性。这 个研宄结果表明，淫羊藿次苷I和淫羊藿次苷C能够直接促进人体细胞产生重要的免疫蛋 白一一 γ -干扰素，表明该类化合物在提高人体免疫力方面具有重要应用前景。
[0009] 在上述重大发现的基础上，本发明人以天然化合物，如淫羊藿苷、淫羊藿新苷Α、淫 羊藿次苷I或淫羊藿次苷C为基本原料，通过化学转化方法（半合成）得到其它的淫羊藿 次苷类化合物，部分淫羊藿次苷类化合物也可以通过全合成方法获得。经筛选模型检验证 明，这些物质也具备类似淫羊藿次苷I或淫羊藿次苷C的活性。
[0010] 因此，本发明的第一个目的，是提供一种淫羊藿次苷类化合物（如式I所示）。
[0011]
【主权项】
1. 一种如式I所示的淫羊藿次苷类化合物：
(Icariside derivatives) 式I中的R1,馬和R 3所代表的基团如下面各项所定义： (1) R1选自 H，OH, OCH 3, CH3COO, CH3, CF3, NH2, CH3NH, CH3CONH, CN，Br, Cl, F ; (2) R2选自 H，OH, OCH 3, CH3COO, NH2, CH3NH, (CH3) 2N，CH3CONH, CN ; (3) R3选自 H，OH, OCH 3, OC2H5, OC3H7, CH3COO, CH3, CF3, C1-C6-NH2 (其中 C1-C6为具有 1-6 个 C的烷基、环烷基、烯烃基、环烯烃基，尤其是环戊基氨基、环己基氨基；以及吗啡啉基，甲基 哌嗪基），NH2，CH 3NH，（CH3)2N, (CH3CH2)2N, CH3CONH, CN，Br, Cl, F，氨基酸酰基，氨基酸酰氨基 (R' -CH-C0NH-)，寡肽酰基，寡肽酰氨基等。
2. 权利要求1所述的式I的淫羊藿次苷类化合物，其中R i= 0H，0CH3;R 2= 0H，0CH3;R 3 =OH, OCH3, OC3H70
3. 权利要求1或2所述的式I的淫羊藿次苷类化合物，其中所述化合物是： (1) R1= OH, R2= OH, R3= OH ； (2) ?= OH, R2= OH, R3= 0CH3 ； (3) R1= OH, OCH 3, R2= OH, OCH 3, R3= OH, OCH 3, OC3H7; (4) ?= OCH 3, R2= OH, R3= OCH3; (5) ?= OH, R2= OCH3, R3= OCH3; (6) ?= OH,，R2= OH, R3= OC 3H7。
4. 一种制备权利要求1-3任意一种式I的淫羊藿次苷类化合物的方法，其特征在于： 以淫羊藿次苷I、淫羊藿次苷C等天然产物衍生化得到式I所示的淫羊藿类化合物的方法。
5. -种淫羊藿次苷I或淫羊藿次苷C的制备方法，其特征在于通过例如酶转化技术，将 淫羊藿中含量丰富的成分淫羊藿苷转化成淫羊藿次苷I。
6. 权利要求5所述的淫羊藿次苷I的制备方法，其特征在于以淫羊藿苷为原料，溶于磷 酸盐缓冲溶液中，加入固定化鼠李糖苷酶反应并重结晶。
7. 权利要求5所述的淫羊藿次苷C的制备方法，其特征在于以淫羊藿新苷A为原料， 加入固定化鼠李糖苷酶反应将淫羊藿新苷A分子中的3-0-鼠李糖基除去，得到淫羊藿次苷 Co
8. -种药物组合物，其含有式I淫羊藿次苷类化合物中的至少一种物质，例如淫羊藿 次苷I、淫羊藿次苷C以及药学上可接受的载体和/或辅剂。
9. 一种保健品组合物，其含有式I淫羊藿次苷类化合物中的至少一种物质，例如淫羊 藿次苷I、淫羊藿次苷C以及保健领域可接受的载体和/或辅剂。
10. -种美容护肤品组合物，其含有式I淫羊藿次苷类化合物中的至少一种物质，例如 淫羊藿次苷I、淫羊藿次苷C以及美容护肤领域可接受的载体和/或辅剂。
11. 权利要求8-10的组合物，其可以是片剂、丸剂、胶囊、注射剂、悬浮剂、乳剂、外用涂 抹剂、面膜。
12. 权利要求1-3、8-10任意一种物质或组合物用于制备药物的用途，该药物用 于治疗任何与人体免疫力有关的疾病，特别是能够通过促进人体细胞产生γ-干扰素 (interferon-gamma，IFN-γ)，提高人体的免疫力相关的疾病的用途。
13. 权利要求1-3、8-10任意一种物质或组合物用于制备药物的用途，该药物用于治疗 任何与人体内THl型的免疫应答（诱导细胞免疫应答）相关的疾病的用途。
14. 权利要求12或13的制药用途，其中用于治疗的疾病为肺结核、流感、乙肝和丙肝等 感染性疾病，以及肿瘤。
15. -种用于筛选具有增强人体免疫效果物质的实验模型。该模型系应用不同的外源 抗原刺激人外周血单个核细胞（PBMCs)，产生细胞因子IFN-γ，将待测药物加入到外源抗 原与人外周血单个核细胞（PBMCs)的混合体系中，测定对IFN-γ产生水平的影响，以筛选 具有提高人体免疫力或抑制人体免疫力的小分子化合物。
【专利摘要】一种如式I所示的淫羊藿次苷类化合物(icariside derivatives)，为中药淫羊藿的天然化学成分，或基于这些天然产物的化学修饰产物或全合成产物。它们具有促进人体细胞产生γ-干扰素(interferon-gamma，IFN-γ，一种具有抵抗疾病功能的细胞因子)的功能，能够显著提高人体的免疫力。实验显示淫羊藿次苷类化合物在防治包括肺结核、流感、乙肝和丙肝等感染性疾病，及肿瘤的免疫治疗方面具有重要应用前景；也可用于制备与提高人体免疫力相关的保健药品、饮品、美容护肤品等。淫羊藿次苷属于传统中药的有效成分及其结构修饰产物，毒副作用小，使用安全。式I淫羊藿次苷类化合物(Icariside derivatives)。
【IPC分类】A61P31-06, C12P17-14, A61K8-49, A61K31-7048, A61Q19-00, A61P37-04, C07H17-07, A61P31-16, A61P35-00, C07H1-08, A23L1-30, A61P31-20
【公开号】CN104825479
【申请号】CN201510264195
【发明人】古练权, 吴长有, 周金林, 卢宇靖, 欧田苗, 黄宝华, 林丽薇
【申请人】佛山市金骏康健康科技有限公司
【公开日】2015年8月12日
【申请日】2015年5月20日