本发明涉及马来酸含量的测定方法,特别涉及一种利用核磁共振测定马来酸含量的方法。
背景技术:
目前,马来酸的含量测定方法主要是高效液相色谱法(参考gb25546-2010),高效液相法一般对纯度的表征有两种方式,一种是外标法,利用买来的标准品作为标准,制作浓度和面积的曲线,然后利用信号在线性范围内,浓度与面积成比例,来获取马来酸的浓度,另一种是归一化法,归一化法本身对于纯度检测由于不同物质在同一波长uv下吸收强度不一致,如果有一个大的杂质吸收很弱,那么对于结果的影响巨大。且归一化法,得到的纯度并没有对无机盐和水分,无紫外的溶剂进行表征,势必影响结果的准确性。
此外高效液相法在测定马来酸纯度时还存在,马来酸结构简单,只有一个烯键是发色基团,本身uv吸收就很弱,这也是高效液相色谱法的短板所在。
技术实现要素:
本发明的目的是提供一种利用核磁共振测定马来酸含量的方法。主要解决高效液相色谱法存在的耗时长的技术问题。
本发明的技术方案为:一种利用核磁共振测定马来酸含量的方法,包括以下步骤:首先配制摩尔浓度等于1:1的马来酸和对苯二甲酸二甲酯的氘带dmso溶液,经超声处理后进入核磁共振谱仪,谱图检测完成后,进行傅立叶转换,相位调整,对谱图进行定标和积分,得到马来酸的积分数au,再根据公式计算得到马来酸含量:
wt%:马来酸的含量
wu:马来酸的称量重量
ws:对苯二甲酸二甲酯的称量重量
nu:马来酸的氢数
ns:对苯二甲酸二甲酯的氢数
au:马来酸的积分数
as:对苯二甲酸二甲酯的积分数
mu:马来酸的分子量
ms:对苯二甲酸二甲酯的分子量。
本发明的有益效果:在医药,农业,食品中通常作为合成所需的关键原料。在购买原料后,工艺对投料量有当量要求,那么原料的纯度则至关重要,而通常使用的高效液相色谱法,一则需要标准品进行标化,二则需要先制作浓度曲线才能开始测试。加上走系统适用型,空白溶液,整个流程耗时4-6小时,而本方法,直接取样进行检测即可,30min即可拿到结果。在药物研发阶段,马来酸是一种较常用的核磁氢谱定量所使用的内标物。如果用于后期gmp生产,方便研发生产一体化,则需要根据ich要求对其进行全标,包括高效液相色谱法提供的纯度,减去含水量,炽灼残渣提供的无机盐。一般耗时需要48-54小时。而利用此方法同样可以节省大量时间,提高整体研发效率。
附图说明
图1为本发明核磁共振图谱。
具体实施方式
所需仪器:brukerascend400mhz等效仪器或以上;十万分之一天平等效仪器或以上。
试剂:氘带dmso,纯度大于99.5%;氘带水,纯度大于99.5%。
所需实验参数:
探头bbo400s1bbf-h-d-05zsp
脉冲程序zg30
采样点数65536
溶剂dmso
扫场次数16
空扫次数2
谱宽7211.539hz
采样时间4.5438294sec
增益63.25
温度299.0k
弛豫时间10.00000000sec
核1h
脉宽9.73usec
脉冲功率14.42000008w
f2–处理参数
线宽0.30hz
准确称量22mg待测马来酸(wu)和38mg对苯二甲酸二甲酯标准品(ws)各三份于1.5ml离心管中,用1mldmos-d6溶解,并加以超声15min,转移至核磁管,送入核磁谱仪进行检测,谱图检测完成后,进行傅立叶转换,相位调整,对谱图进行定标,将2.5ppm左右的5重峰定位为2.50ppm,对8.08±0.1ppm的峰进行积分,是为内标物中的芳香区4个氢,积分为4.0000(as),然后对6.28±0.1ppm位置的氢进行积分,得到au。根据以下公式进行计算:
wt%:马来酸的含量
wu:马来酸的称量重量
ws:对苯二甲酸二甲酯的称量重量
nu:马来酸的氢数
ns:对苯二甲酸二甲酯的氢数
au:马来酸的积分数
as:对苯二甲酸二甲酯的积分数
mu:马来酸的分子量
ms:对苯二甲酸二甲酯的分子量。
马来酸的核磁共振图谱见图1。