本发明为化学检测领域，具体涉及一种检测方法，更具体地是指一种香醋总酚检测方法。
背景技术：
：抗氧化食品，即在日常的摄取量时有益于人体内对活性氧的抗氧化防御系统的维持，对各种因素引起的防御系统的低下进行补充的食品。《26种市售食醋抗氧化性的比较》一文报道，相比其他品类的食醋，香醋具有更高的抗氧化能力。因此，香醋是一种抗氧化食品，具有研究价值。总酚是食醋中重要的抗氧化物质之一，作为一种自由基清除剂而存在。常见的食醋中总酚检测方法是folin-ciocalteu比色法，关键参数包括fc浓度、fc添加量、na2co3浓度、na2co3添加量和反应时间。检测成本的关键是fc的浓度，但低fc浓度检测方法的加标回收率偏低。利用正交试验设计，降低检测成本和提高加标回收率，得到一种适用于香醋总酚检测的方法，是本发明的主要目的。技术实现要素：为了解决以上问题，本发明提供一种节约检测成本，减少fc添加量，提高加标回收率的检测方法。为了实现以上目的，本发明的技术方案为：一种香醋总酚检测方法，其特征在于：包括步骤：(1)选择标准参考物质没食子酸；(2)设计正交试验为5因素、4水平，5个因素分别为fc的浓度，fc的添加量，na2co3的浓度，na2co3的添加量和反应时间，分别记为a、b、c、d、e；(3)绘制正交表为l16，共16个试验组合，每一列都有4个水平，每一行都有5个因素，任一行的试验组合都不相同。(4)16个试验分别进行6个水平的标准曲线制备；(5)依照所得的标准曲线，再次选择香醋和含有200μg/ml的香醋两个标准样品进行16组试验；计算其检测到的实际总酚含量，通过和理论总酚含量进行比较，得到加标回收率。(6)由所得的总酚数据，可以得到5个因素各自的最佳因素水平a0、b0、c0、d0、e0。(7)将所得最佳组合及正交试验的16组试验，分别进行加标回收率的比较，验证最佳试验组合是否具有最佳的加标回收率效果。进一步地，步骤(4)中，6个水平的标准品分别是0μg/ml、100μg/ml、200μg/ml、400μg/ml、500μg/ml；进一步地，步骤(4)中实验过程为：向10ml容量瓶中，加入0.2ml待测标准品，加入aml的bmfc，轻轻混匀，静置5min，加入c％ml的dmlna2co3,用去离子水定容至10ml，轻轻混匀，避光静置emin，在765nm下检测吸光度。本发明的有益效果为：检测方法具有高加标回收率和低成本的优点，减少了fc添加量，检测过程简洁、准确。具体实施方式(1)选择folin-ciocalteu比色法的标准参考物质没食子酸，ar级别。(2)本发明的正交试验设计是5因素、4水平，涵盖folin-ciocalteu比色法的所有因素及其水平的主要变化范围。(3)本发明的正交试验的正交表为l16，如下表，共16个试验组合，其特征在于是“均匀分散、整齐可比”，每一列都有4个水平，每一行都有5个因素，任一行的试验组合都不相同。表1列号fc(m)fc(ml)na2co3(％)na2co3(ml)time(min)试验号abcde0111111021222203133330414444052123406221430723412082432109313421032431113312412342131341423144231415432411644132(4)16个试验分别进行6个水平的标准曲线制备。6个水平的标准品分别是0μg/ml、100μg/ml、200μg/ml、400μg/ml、500μg/ml，a、b、c、d、e分别是正交试验设计中的5个因素所对应的不同水平。向10ml容量瓶中，加入0.2ml待测标准品，加入aml的bmfc，轻轻混匀，静置5min，加入c％ml的dmlna2co3,用去离子水定容至10ml，轻轻混匀，避光静置emin，在765nm下检测吸光度。(5)依照(3)所得的标准曲线，再次选择香醋和含有200μg/ml的香醋两个标准样品进行16组试验，向10ml容量瓶中，加入0.2ml的待测标准品，加入aml的bmfc，轻轻混匀，静置5min，加入c％ml的dmlna2co3,用去离子水定容至10ml，轻轻混匀，避光静置emin，在765nm下检测吸光度。计算两组数据的差值，结合标准曲线，得到的实际总酚含量，通过和理论总酚含量200μg/ml进行比较，得到加标回收率。(6)由(4)所得的总酚数据，运用r值和x值的统计分析，获得5个因素对总酚检测的影响，得到5个因素各自的最佳因素水平a0、b0、c0、d0、e0。(7)6个水平的标准品分别是0μg/ml、100μg/ml、200μg/ml、400μg/ml、500μg/ml，向10ml容量瓶中，加入0.2ml待测标准品，加入a0ml的b0mfc，轻轻混匀，静置5min，加入c0％ml的d0mlna2co3，用去离子水定容至10ml，轻轻混匀，避光静置e0min，在765nm下检测吸光度。向10ml容量瓶中，加入0.2ml香醋和含有200μg/ml的香醋两个待测标准品，加入a0ml的b0mfc，轻轻混匀，静置5min，加入c0％ml的d0mlna2co3，用去离子水定容至10ml，轻轻混匀，避光静置e0min，在765nm下检测吸光度。计算两组数据的差值，结合标准曲线，得到的实际总酚含量，通过和理论总酚含量200μg/ml进行比较，得到加标回收率。(8)将(5)所得最佳组合及正交试验的16组试验，分别进行加标回收率的比较，试证理论上的最佳试验组合是否具有最佳的加标回收率效果。实施例1：向10ml容量瓶中，加入0.2ml待测样品，加入0.8ml的0.1mfc，轻轻混匀，静置5min，加入2ml的15％na2co3,用去离子水定容至10ml，轻轻混匀，避光静置120min，在765nm下检测吸光度。本方法的fc浓度为0.1m，加标回收率为101.05％。实施例2：向10ml容量瓶中，加入0.2ml待测样品，加入1.5ml的1mfc，轻轻混匀，静置5min，加入2ml的12.5％na2co3,用去离子水定容至10ml，轻轻混匀，避光静置60min，在765nm下检测吸光度。本方法的fc浓度为1m，加标回收率为97.99％。实施例3：向10ml容量瓶中，加入0.2ml待测样品，加入5ml的0.2mfc，轻轻混匀，静置5min，加入4ml的7.5％na2co3,用去离子水定容至10ml，轻轻混匀，避光静置60min，在765nm下检测吸光度。本方法的fc浓度为0.2m，加标回收率为82.74％。上述实施例仅仅是为清楚地说明本发明所作的举例，而并非是对本发明的实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。而这些属于本发明的精神所引伸出的显而易见的变化或变动仍处于本发明的保护范围之中。当前第1页12