本发明属于医药成分分析技术领域，涉及一种人参皂苷f5成分指纹图谱的检测方法，具体涉及一种采用反相超高效液相色谱－elsd法检测人参皂苷f5成分指纹图谱的方法。
背景技术：
人参皂苷(ginsenoside)是一种固醇类化合物，也称为三萜皂苷。其主要存在于人参属药材中。人参皂苷被视为是人参中的活性成分，因而成为研究的目标，因为人参皂苷影响了多重的代谢通路，所以其效能也是复杂的。人参皂苷成分种类众多，多种人参皂苷成分各自具有其不同的效能，需要对其进行分析检测。
人参皂苷f5作为一种人参皂苷成分，其分子式为：c41h70o13，分子量为770.99，cas号为189513-26-6，其结构如图：
现在对人参皂苷f5的检测分析方法未见报道，因此有必要研究对人参皂苷f5操作简便、高效的检测方法。
技术实现要素：
鉴于以上所述现有技术的缺点，本发明的目的在于提供一种人参皂苷f5成分指纹图谱的检测方法，用于解决现有技术中缺乏检测人参皂苷f5成分指纹图谱的检测方法的问题。
为实现上述目的及其他相关目的，本发明第一方面提供一种人参皂苷f5成分指纹图谱的检测方法，包括以下步骤：
1)取人参皂苷f5标样，加入甲醇溶解并定容，获得标准溶液；
2)采用高效液相色谱法测定标准溶液，获得标准溶液的液相色谱图，根据相对保留时间，从标准溶液的液相色谱图中指认出人参皂苷f5成分的特征峰，从而获得人参皂苷f5成分的指纹图谱。
优选地，步骤1)中，所述人参皂苷f5标样为由上海诗丹德标准技术服务有限公司生产的人参皂苷f5标样标准物质。
优选地，步骤1)中，所述标准溶液选自单一浓度的人参皂苷f5成分溶液。
优选地，步骤1)中，所述标准溶液中，所述人参皂苷f5成分的浓度为1-2mg/ml。更优选地，所述标准溶液中，所述人参皂苷f5成分的浓度为1.03mg/ml。
优选地，步骤2)中，所述高效液相色谱法为反相高效液相色谱法。
优选地，步骤2)中，所述高效液相色谱法中，采用的色谱仪为超高效液相色谱仪。所述超高效液相色谱仪具体为安捷伦公司生产的1290型超高效液相色谱仪。
优选地，步骤2)中，所述高效液相色谱法中，采用色谱柱为以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相的c18色谱柱。更优选地，所述色谱柱为以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相的sb-c18色谱柱(2.1×50mm)。所述sb-c18色谱柱由安捷伦公司生产。
优选地，步骤2)中，所述高效液相色谱法中，采用的检测器为蒸发光散射检测器(elsd)。
更优选地，所述elsd检测器的雾化温度为60-70℃，气体流速为1.5-1.7l/min。
进一步优选地，所述elsd检测器的雾化温度为65℃，气体流速为1.6l/min。
优选地，步骤2)中，所述高效液相色谱法中，柱温为25-30℃，进样量为1-10μl。更优选地，所述高效液相色谱法中，柱温为30℃，进样量为1μl。
优选地，步骤2)中，所述高效液相色谱法中，流动相的流速为0.1-0.3ml/min。更优选地，所述高效液相色谱法中，流动相的流速为0.2ml/min。
优选地，步骤2)中，所述高效液相色谱法中，流动相为乙腈-0.05-0.15％醋酸水溶液，其中，a相为乙腈，b相为0.05-0.15％醋酸水溶液，分析时间为15min，梯度洗脱。
更优选地，所述高效液相色谱法中，流动相为乙腈-0.1％醋酸水溶液，其中，a相为乙腈，b相为0.1％醋酸水溶液，分析时间为15min，梯度洗脱。
所述0.05-0.15％醋酸水溶液为体积百分比为0.05-0.15％的醋酸水溶液。所述0.1％醋酸水溶液为体积百分比为0.1％的醋酸水溶液。
更优选地，所述梯度洗脱的具体程序为：
0-7min，a相：b相体积比为20：80-95：5；
7-12min，a相：b相体积比为95：5-95：5；
12-15min，a相：b相体积比为95：5-20：80。
本发明第二方面提供一种人参皂苷f5成分指纹图谱的检测方法在人参皂苷f5成分定性检测中的应用。
本发明第三方面提供一种人参皂苷f5成分的定性检测方法，包括以下步骤：
a)与人参皂苷f5成分指纹图谱的检测方法的步骤1)相同，获得标准溶液；
b)取含人参皂苷f5的样品，加入甲醇溶解并定容，获得供试品溶液；
c)采用高效液相色谱法分别测定标准溶液和供试品溶液，将获得的供试品溶液的液相色谱图，与标准溶液的液相色谱图进行比较，根据相对保留时间指认出共有特征峰，从而确定供试品溶液中人参皂苷f5成分。
优选地，步骤b)中，所述含人参皂苷f5的样品为常规的含人参皂苷f5的人参属药材。
优选地，步骤b)中，所述含人参皂苷f5的样品加入的质量mg与甲醇加入的体积ml之比为100:100-105:100。更优选地，所述含人参皂苷f5的样品加入的质量mg与甲醇加入的体积ml之比为103:100。
优选地，步骤c)中，所述高效液相色谱法为反相高效液相色谱法。
优选地，步骤c)中，所述高效液相色谱法中，采用的色谱仪为超高效液相色谱仪。所述超高效液相色谱仪具体为安捷伦公司生产的1290型超高效液相色谱仪。
优选地，步骤c)中，所述高效液相色谱法中，采用色谱柱为以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相的c18色谱柱。更优选地，所述色谱柱为以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相的sb-c18色谱柱(2.1×50mm)。
优选地，步骤c)中，所述高效液相色谱法中，采用的检测器为蒸发光散射检测器(elsd)。
更优选地，所述elsd检测器的雾化温度为60-70℃，气体流速为1.5-1.7l/min。
进一步优选地，所述elsd检测器的雾化温度为65℃，气体流速为1.6l/min。
优选地，步骤c)中，所述高效液相色谱法中，柱温为25-30℃，进样量为1-10μl。更优选地，所述高效液相色谱法中，柱温为30℃，进样量为1μl。
优选地，步骤c)中，所述高效液相色谱法中，流动相的流速为0.1-0.3ml/min。更优选地，所述高效液相色谱法中，流动相的流速为0.2ml/min。
优选地，步骤c)中，所述高效液相色谱法中，流动相为乙腈-0.1％醋酸水溶液，其中，a相为乙腈，b相为0.1％醋酸水溶液，分析时间为15min，梯度洗脱。
更优选地，所述0.1％醋酸水溶液为体积百分比为0.1％的醋酸水溶液。
更优选地，所述梯度洗脱的具体程序为：
0-7min，a相：b相体积比为20：80-95：5；
7-12min，a相：b相体积比为95：5-95：5；
12-15min，a相：b相体积比为95：5-20：80。
如上所述，本发明提供的一种人参皂苷f5成分指纹图谱的检测方法，采用反相高效液相色谱法对人参皂苷f5成分进行检测，从而获得人参皂苷f5成分的指纹图谱。该方法操作简便，检测效率高，其测定的人参皂苷f5成分的目标峰峰形尖锐，响应值高，重现性好，从而能够对人参皂苷f5成分进行定性检测。
附图说明
图1显示为本发明的一种人参皂苷f5成分测定的液相色谱图。
具体实施方式
下面结合具体实施例进一步阐述本发明，应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的保护范围。
以下通过特定的具体实例说明本发明的实施方式，本领域技术人员可由本说明书所揭露的内容轻易地了解本发明的其他优点与功效。本发明还可以通过另外不同的具体实施方式加以实施或应用，本说明书中的各项细节也可以基于不同观点与应用，在没有背离本发明的精神下进行各种修饰或改变。
实施例1
1、实验部分
1.1样品前处理
标准溶液的制备：称取人参皂苷f5标样，加入甲醇溶解并定容，配制标准溶液。标准溶液选自单一浓度的人参皂苷f5成分溶液。标准溶液中，人参皂苷f5成分的浓度为1-2mg/ml。
1.2色谱条件
所述高效液相色谱法为反相高效液相色谱法，采用的色谱仪为超高效液相色谱仪。色谱柱为以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相的c18色谱柱。检测器为蒸发光散射检测器(elsd)，所述elsd检测器的雾化温度为60-70℃，气体流速为1.5-1.7l/min。所述高效液相色谱法中，柱温为25-30℃，进样量为1-10μl。所述高效液相色谱法中，流动相的流速为0.1-0.3ml/min。
所述高效液相色谱法中，流动相为乙腈-0.05-0.15％醋酸水溶液，其中，a相为乙腈，b相为0.05-0.15％醋酸水溶液，分析时间为15min，梯度洗脱。所述梯度洗脱的具体程序为：0-7min，a相：b相体积比为20：80-95：5；7-12min，a相：b相体积比为95：5-95：5；12-15min，a相：b相体积比为95：5-20：80。
2、测定
移取1.1中单一浓度的人参皂苷f5成分的标准溶液，采用超高效液相色谱仪进样后进行反相法分析，获得标准溶液的液相色谱图，根据相对保留时间，从标准溶液的液相色谱图中指认出人参皂苷f5成分的特征峰，从而获得人参皂苷f5成分的指纹图谱。
实施例2
1、实验部分
1.1样品前处理
标准溶液的制备：称取人参皂苷f5标样，加入甲醇溶解并定容，配制标准溶液。标准溶液为单一浓度的人参皂苷f5成分溶液。标准溶液中，人参皂苷f5成分的浓度为1.03mg/ml。
1.2色谱条件
所述高效液相色谱法为反相高效液相色谱法，采用的色谱仪为1290型超高效液相色谱仪。色谱柱为以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相的sb-c18色谱柱(2.1×50mm)。检测器为蒸发光散射检测器(elsd)，所述elsd检测器的雾化温度为65℃，气体流速为1.6/min。所述高效液相色谱法中，柱温为30℃，进样量为1μl。所述高效液相色谱法中，流动相的流速为0.2ml/min。
所述高效液相色谱法中，流动相为乙腈-0.1％醋酸水溶液，其中，a相为乙腈，b相为0.1％醋酸水溶液，分析时间为15min，梯度洗脱。所述梯度洗脱的具体程序为：0-7min，a相：b相体积比为20：80-95：5；7-12min，a相：b相体积比为95：5-95：5；12-15min，a相：b相体积比为95：5-20：80。
2、测定
移取1.1中单一浓度的人参皂苷f5成分的标准溶液，采用超高效液相色谱仪进样后进行反相法分析，获得标准溶液的液相色谱图，根据相对保留时间，从标准溶液的液相色谱图中指认出人参皂苷f5成分的特征峰，从而获得人参皂苷f5成分的指纹图谱。人参皂苷f5成分的指纹图谱见图1。
实施例3
1、实验部分
1.1样品前处理
标准溶液的制备：称取人参皂苷f5标样，加入甲醇溶解并定容，配制标准溶液。标准溶液选自单一浓度的人参皂苷f5成分溶液。标准溶液中，人参皂苷f5成分的浓度为1-2mg/ml。
供试品溶液的制备：称取人参皂苷f5的样品，加入甲醇溶解并定容，配制供试品溶液。含人参皂苷f5的样品加入的质量mg与甲醇加入的体积ml之比为100:100-105:100。
1.2色谱条件
所述高效液相色谱法为反相高效液相色谱法，采用的色谱仪为超高效液相色谱仪。色谱柱为以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相的c18色谱柱。检测器为蒸发光散射检测器(elsd)，所述elsd检测器的雾化温度为60-70℃，气体流速为1.5-1.7l/min。所述高效液相色谱法中，柱温为25-30℃，进样量为1-10μl。所述高效液相色谱法中，流动相的流速为0.1-0.3ml/min。
所述高效液相色谱法中，流动相为乙腈-0.05-0.15％醋酸水溶液，其中，a相为乙腈，b相为0.05-0.15％醋酸水溶液，分析时间为15min，梯度洗脱。所述梯度洗脱的具体程序为：0-7min，a相：b相体积比为20：80-95：5；7-12min，a相：b相体积比为95：5-95：5；12-15min，a相：b相体积比为95：5-20：80。
2、测定
移取1.1中单一浓度的人参皂苷f5成分的标准溶液，同时移取单一浓度的供试品溶液，采用超高效液相色谱仪进样后进行反相法分析，分别获得标准溶液和供试品溶液的液相色谱图，将获得的供试品溶液的液相色谱图，与标准溶液的液相色谱图进行比较，根据相对保留时间指认出共有特征峰，从而确定供试品溶液中人参皂苷f5成分。
实施例4
1、实验部分
1.1样品前处理
标准溶液的制备：称取人参皂苷f5标样，加入甲醇溶解并定容，配制标准溶液。标准溶液为单一浓度的人参皂苷f5成分溶液。标准溶液中，人参皂苷f5成分的浓度为1.03mg/ml。
供试品溶液的制备：称取10.3mg人参皂苷f5的样品，加入10ml甲醇溶解并定容，配制供试品溶液。
1.2色谱条件
所述高效液相色谱法为反相高效液相色谱法，采用的色谱仪为超高效液相色谱仪。色谱柱为以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相的sb-c18色谱柱(2.1×50mm)。检测器为蒸发光散射检测器(elsd)，所述elsd检测器的雾化温度为65℃，气体流速为1.6/min。所述高效液相色谱法中，柱温为30℃，进样量为1μl。所述高效液相色谱法中，流动相的流速为0.2ml/min。
所述高效液相色谱法中，流动相为乙腈-0.1％醋酸水溶液，其中，a相为乙腈，b相为0.1％醋酸水溶液，分析时间为15min，梯度洗脱。所述梯度洗脱的具体程序为：0-7min，a相：b相体积比为20：80-95：5；7-12min，a相：b相体积比为95：5-95：5；12-15min，a相：b相体积比为95：5-20：80。
2、测定
移取1.1中单一浓度的人参皂苷f5成分的标准溶液，同时移取单一浓度的供试品溶液，采用超高效液相色谱仪进样后进行反相法分析，分别获得标准溶液和供试品溶液的液相色谱图，将获得的供试品溶液的液相色谱图，与标准溶液的液相色谱图进行比较，根据相对保留时间指认出共有特征峰，从而确定供试品溶液中人参皂苷f5成分。
综上所述，本发明提供的一种人参皂苷f5成分的检测方法，操作简便，检测效率高，目标峰峰形尖锐，响应值高，灵敏度高、重现性好。所以，本发明有效克服了现有技术中的种种缺点而具高度产业利用价值。
上述实施例仅例示性说明本发明的原理及其功效，而非用于限制本发明。任何熟悉此技术的人士皆可在不违背本发明的精神及范畴下，对上述实施例进行修饰或改变。因此，举凡所属技术领域中具有通常知识者在未脱离本发明所揭示的精神与技术思想下所完成的一切等效修饰或改变，仍应由本发明的权利要求所涵盖。