一种快速检测皮肤干细胞衰老的试剂盒的制作方法

本实用新型涉及免疫检测技术领域，具体为一种快速检测皮肤干细胞衰老的试剂盒。

背景技术：

皮肤是人体最大的器官，它覆于身体表面，由表皮、真皮、皮下组织及附属器组成。在抵御微生物入侵、紫外线辐射以及防止水分的丢失、调节体温和维持人的外貌等方面起着十分重要的作用。皮肤有极强的修复和再生能力，这与皮肤干细胞的存在具有直接的关系。但是现有的皮肤干细胞试剂盒，只能单一的进行存放，在干细胞检测时，需要单独拿起滴液管和反应杯进行另外操作，使用非常麻烦，影响检测的速度。针对上述问题，急需设计一种新型的快速检测皮肤干细胞衰老的试剂盒。

技术实现要素：

本实用新型的目的在于提供一种快速检测皮肤干细胞衰老的试剂盒，以解决上述背景技术中提出能单一的进行存放，在干细胞检测时，需要单独拿起滴液管和反应杯进行另外操作，使用非常麻烦，影响检测速度的问题。

为实现上述目的，本实用新型提供如下技术方案：一种快速检测皮肤干细胞衰老的试剂盒，包括试剂盒本体、夹紧装置、测试板和反应杯，所述试剂盒本体通过活动转轴与防尘盖相互连接，且防尘盖上设置有观察口，所述试剂盒本体的内壁上分别固定有固定杆和安装卡槽，所述夹紧装置位于固定杆上，且夹紧装置中安装有滴液管，同时其表面设置有挤压槽，所述测试板位于试剂盒本体的底部，且其外侧固定有拉动把手，所述反应杯位于测试板预留的固定槽中，且测试板的两侧固定有滑动块，所述试剂盒本体的下方安装有防护垫块。

优选的，所述夹紧装置包括有前夹紧板、弹簧、后夹紧板、固定接头和固定插孔，前夹紧板通过弹簧与后夹紧板相互连接，前夹紧板与后夹紧板之间安装有滴液管，后夹紧板与固定接头为一体的结构，固定接头通过其内侧预留的固定插孔与固定杆相互连接。

优选的，所述夹紧装置等间距分布在固定杆上。

优选的，所述反应杯的水平位置与夹紧装置上下对应，且反应杯与固定槽为可拆卸式安装结构。

优选的，所述滑动块对称设置在测试板的两侧，且滑动块与安装卡槽卡槽连接。

优选的，所述固定槽为5×3排列结构。

与现有技术相比，本实用新型的有益效果是：该快速检测皮肤干细胞衰老的试剂盒，即可进行试剂的存放，又可通过夹紧装置对滴液管进行挤压滴液，滴液直接落至测试板上的反应杯中，无需单独拿起滴液管和反应杯进行另外操作，同时活动的测试板可进行不同位置反应杯的移动，一次性可进行多次检测，使用非常方便，大大加快了检测的速度，且提高了检测的精准度，不用的时候防尘盖进行防尘防护，防护垫块提高了整体的稳定性。

附图说明

图1为本实用新型整体结构示意图；

图2为本实用新型测试板俯视结构示意图；

图3为本实用新型夹紧装置结构示意图。

图中：1、试剂盒本体，2、活动转轴，3、防尘盖，4、观察口，5、固定杆，6、安装卡槽，7、夹紧装置，701、前夹紧板，702、弹簧，703、后夹紧板，704、固定接头，705、固定插孔，8、挤压槽，9、滴液管，10、测试板，11、反应杯，12、拉动把手，13、防护垫块，14、滑动块，15、固定槽。

具体实施方式

下面将结合本实用新型实施例中的附图，对本实用新型实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本实用新型一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本实用新型中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本实用新型保护的范围。

请参阅图1-3，本实用新型提供一种技术方案：一种快速检测皮肤干细胞衰老的试剂盒，包括试剂盒本体1、活动转轴2、防尘盖3、观察口4、固定杆5、安装卡槽6、夹紧装置7、前夹紧板701、弹簧702、后夹紧板703、固定接头704、固定插孔705、挤压槽8、滴液管9、测试板10、反应杯11、拉动把手12、防护垫块13、滑动块14和固定槽15，试剂盒本体1通过活动转轴2与防尘盖3相互连接，且防尘盖3上设置有观察口4，试剂盒本体1的内壁上分别固定有固定杆5和安装卡槽6，夹紧装置7位于固定杆5上，且夹紧装置7中安装有滴液管9，同时其表面设置有挤压槽8，夹紧装置7包括有前夹紧板701、弹簧702、后夹紧板703、固定接头704和固定插孔705，前夹紧板701通过弹簧702与后夹紧板703相互连接，前夹紧板701与后夹紧板703之间安装有滴液管9，后夹紧板703与固定接头704为一体的结构，固定接头704通过其内侧预留的固定插孔705与固定杆5相互连接，实现对滴液管9的安装和挤压，夹紧装置7等间距分布在固定杆5上，一次性可进行多次滴液，测试板10位于试剂盒本体1的底部，且其外侧固定有拉动把手12，反应杯11位于测试板10预留的固定槽15中，固定槽15为5×3排列结构，便于后续的多次反应检测，反应杯11的水平位置与夹紧装置7上下对应，且反应杯11与固定槽15为可拆卸式安装结构，方便进行反应杯11的更换和清洗，且测试板10的两侧固定有滑动块14，滑动块14对称设置在测试板10的两侧，且滑动块14与安装卡槽6卡槽连接，便于调节反应杯11的位置，试剂盒本体1的下方安装有防护垫块13。

工作原理：首先打开防尘盖3，将滴液管9放在夹紧装置7中，当需要进行干细胞的检测时，用手挤压夹紧装置7外侧的挤压槽8，此时滴液管9受挤压力进行滴液，滴液直接落至测试板10上的反应杯11中，由于固定杆5上等间距分布有夹紧装置7，因此可一次性进行多个滴液管9的滴液操作，而测试板10外侧的滑动块14与安装卡槽6卡槽连接，可操作拉动把手12向外拉动测试板10从而实现反应杯11位置的调节，重复上述操作将滴液管9中的滴液滴入不同位置的反应杯11中，最后完全拿出测试板10，将不同的反应液滴入反应杯11中即可实现一次性多次检测，使用非常方便，大大加快了检测的速度，且提高了检测的精准度，这就是该快速检测皮肤干细胞衰老的试剂盒的工作原理。

实验方法：

皮肤干细胞的分离培养：皮肤组织碘伏浸泡5～10min，酒精脱碘。紫外线灭菌工作台上利用无菌外科手术器械去除皮下组织。将剩余组织修剪出1cm×1cm大小的皮片，Dispase酶4℃避光消化12～14h后分离表皮和真皮层，尽可能的剪碎表皮，0.125%的胰蛋白酶（内含0.04%EDTA）37℃消化10～15min。 加入完全培养液终止消化，仔细吹打。200目筛网过滤。滤液通过离心机（1 300r/min离心5min），弃去上清液，收集细胞。倒置相差显微镜下观察细胞，计数后决定重悬细胞的培养基量，加入适当 K- SFM培养基并且缓慢吹打细胞制成单细胞悬液，恒温箱孵育过夜，24h后换液。置于37℃、5%CO2培养箱中继续培养，以后每2～3d换液，当细胞生长融合到70%时传代。

皮肤干细胞鉴定：β1整合素和CK19免疫荧光染色法鉴定：将2代 ESCs培育24h，用 PBS洗涤细胞3次后，4%多聚甲醛固定40min，PBS清洗3次；加入0.3%Triton进行通透化处理；正常山羊血清封闭30min后，倾倒。免洗，加入稀释后的一抗，4℃过夜。隔日使用 PBS清洗后加入异硫氰酸荧光素（FITC）标记二抗，避光孵育30min。使用倒置荧光显微镜拍照记录。

CCK-8检测 ESCs增殖：分离成人的 ESCs，选择生长状态良好的ESCs；胰酶消化，离心后，弃去上清，制作细胞悬液，接种于96孔板中，每孔接种5×103个细胞，分别于1、2、3、4、5、6、7d相应时间点取出一个培养板，相应制作空白对照组，每孔加入 CCK-8溶液1 0μ l，培养3h后，在酶标仪上测定吸光度（A）值，根据A450nm值绘制细胞增殖曲线。

尽管已经示出和描述了本实用新型的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本实用新型的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本实用新型的范围由所附权利要求及其等同物限定。