基于薄层层析的法薏苡仁的鉴别方法与流程

本发明涉及中药质量检测技术领域，特别是涉及一种基于薄层层析的法薏苡仁的鉴别方法。

背景技术

薄层色谱法(tlc)是一种微量、快速、简便的分离分析方法。系将适宜的固定相涂布于玻璃板、塑料或铝基片上，成一均匀薄层。待点样、展开后，根据比移值(rf)与适宜的对照物按同法所得的色谱图的比移值作对比，用以进行药品的鉴别、杂质检查或含量测定的方法。该方法是快速分离和定性分析少量物质的一种很重要的实验技术，也用于跟踪反应进程。具有展开时间短、分离能力强、灵敏度高等特点。

薏苡仁，为禾本科植物薏苡coixlacryma-jobil.var.mayuen(roman.)stapf的干燥成熟种仁。作为中药材，薏苡仁具有利水渗透湿、健脾止泻、除痹、排脓、解毒散结的作用。薏苡仁传统的炮制方法为炒制，一般有清炒、麸炒、土炒等，炮制后所得薏苡仁产品，例如法薏苡仁等，其中的甘油三油酸酯的含量会有所上升、有利于药效的提升，其他化学成分的种类及含量也可能会相应变得复杂。而化学成分群的变化，对薏苡仁产品的鉴别带来困扰。传统的采用薄层色谱法对法薏苡仁进行鉴别时，会出现展开效果差，例如斑点模糊、斑点拖尾严重、甚至检测不出斑点的缺陷。为了获得良好的展开效果，在薄层层析分析时候，通常会采用多次展开，或者采用展开剂对展开缸提前进行预饱和处理。但是，上述处理方法所得薄层色谱图效果依然不是特别好，并且操作繁琐，鉴别效率低。

技术实现要素：

基于此，本发明的主要目的是提供一种展开效果好、鉴别效率高的基于薄层层析的法薏苡仁的鉴别方法。

本发明的目的是通过以下技术方案实现的：

一种基于薄层层析的法薏苡仁的鉴别方法，所述的鉴别方法包括：

取待测法薏苡仁，制备供试品溶液；

取法薏苡仁对照药材，制备对照品溶液；

薄层层析：取所述的供试品溶液、对照品溶液，分别点于同一薄层板上，以体积比为(75～82):(15～20):1的石油醚、乙醚、冰醋酸的混合物为展开剂进行展开，晾干薄层板、喷显色剂、加热显色，紫外光灯下检视。

在其中一个实施例中，所述的展开剂为体积比为(80～82)：(15～18):1的石油醚、乙醚、冰醋酸的混合物。

在其中一个实施例中，所述的展开剂为体积比为82:18:1的石油醚、乙醚、冰醋酸的混合物。

在其中一个实施例中，所述的薄层板采用羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶g薄层板；所述的显色剂为硫酸与乙醇的混合物，所述混合物中硫酸的体积占8％～12％。

在其中一个实施例中，所述的显色剂为硫酸与乙醇的混合物，所述混合物中硫酸的体积占10％。

在其中一个实施例中，所述的制备供试品溶液，包括如下步骤：

取待测法薏苡仁，制成粉末，加入温度为60℃～90℃的石油醚，超声处理，过滤，所得滤液即为供试品溶液；

所述的制备对照品溶液，包括如下步骤：

取法薏苡仁对照药材，制成粉末，加入温度为60℃～90℃的石油醚，超声处理，过滤，所得滤液即为对照品溶液。

在其中一个实施例中，所述的加热显色的温度为103～106℃。

在其中一个实施例中，所述的紫光灯波长为365nm。

在其中一个实施例中，所述的法薏苡仁包括通过如下制备方法的法薏苡仁饮片：

(1)取干净薏苡仁，水煮；

(2)捞出步骤(1)所得薏苡仁，沥水，加入食用油，拌匀；

(3)将步骤(2)所得薏苡仁蒸至熟透心，取出晾干、光晒；

(4)砂炒步骤(3)所得薏苡仁至爆米花状，去砂，即可。

在其中一个实施例中，步骤(1)中，所述水煮的时间为10～20min；步骤(2)中，所述食用油为花生油、茶籽油中的至少一种；每100kg步骤(1)所得薏苡仁加入所述食用油2.5～2.8kg；或/和，所述食用油选自花生油、茶籽油、蓖麻油中的至少一种。

与现有技术相比，本发明具备如下有益效果：

本发明基于对法薏苡仁的长期研究，在采用薄层色谱法对其进行鉴别时，挑选体积比为(75～82):(15～20):1的石油醚、乙醚、冰醋酸的混合物为展开剂进行展开，采用该特定配方的展开剂，展开效果好，无需重复进行展开操作或者对展开缸进行预饱和，简化鉴别路程，鉴别效率高。

本发明采用特定配方的展开剂的条件下，配合采用甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶g薄层板以及显色剂，能够缩短展开、显色的时间。

附图说明

图1为实施例1的薄层色谱图；

图2为实施例2的薄层色谱图；

图3为实施例3的薄层色谱图。

具体实施方式

为了便于理解本发明，下面将对本发明进行更全面的描述。但是，本发明可以以许多不同的形式来实现，并不限于本文所描述的实施例。相反地，提供这些实施例的目的是使对本发明的公开内容的理解更加透彻全面。

除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本发明的技术领域的技术人员通常理解的含义相同。本文中在本发明的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的，不是旨在于限制本发明。本文所使用的术语“和/或”包括一个或多个相关的所列项目的任意的和所有的组合。

本发明的法薏苡仁包括如下方法制备的薏苡仁法制饮片：(1)取干净薏苡仁，水煮；(2)沥去步骤(1)所得薏苡仁表面的水分，加入食用油，拌匀；(3)将步骤(2)所得薏苡仁蒸至熟透心，取出晾干、光晒；(4)砂炒步骤(3)所得薏苡仁至爆米花状，去砂，即可。

具体地，下述实施例所涉薏苡仁法制饮片，包括样品y1至样品y9；其中：

所述的样品y1、y4、y7是通过如下制备方法获得的：(1)取薏苡仁，过20目～50目筛孔，去除小粒和碎片等，获得干净薏苡仁，每千克薏苡仁加水3l进行水煮；所述水煮的时间为10min；(2)沥去步骤(1)所得薏苡仁表面的水分，加入食用油，拌匀；所述食用油为花生油；每100kg步骤(1)所得薏苡仁加入所述食用油2.5kg；(3)将步骤(2)所得薏苡仁蒸至熟透心，取出晾干、光晒；所述晾干是将蒸至熟透心的薏苡仁取出后置于通风干燥处晾至表面出现光泽、色泽透亮；所述光晒是将晾干后的薏苡仁置于太阳下晒至手握具有硬度；(4)砂炒步骤(3)所得薏苡仁至爆米花状，去砂，即可；所述砂炒的条件包括：温度为140℃、时间为5min。

所述的样品y2、y5、y8是通过如下制备方法获得的：与样品y1的制备方法基本相同，变化之处仅在于，步骤(1)中，水煮的时间为15min。

所述的样品y3、y6、y9是通过如下制备方法获得的：与样品y1的制备方法基本相同，变化之处仅在于，步骤(1)中，水煮的时间为20min。

经此炮制工艺制备得到的薏苡仁法制饮片，其所含化学成分群发生变化，其中的甘油三油酸酯的含量至少能达到1.5％。

实施例1

本实施例提供一种基于薄层层析的薏苡仁法制饮片的鉴别方法。

本实施例的薏苡仁法制饮片，如上所述的样品y1、样品y2、样品y3。

本实施例的鉴别方法包括：

(1)供试品溶液制备：取薏苡仁法制饮片，制成粉末，取1g粉末，加石油醚(60～90℃)10ml，超声处理30分钟，滤过，取滤液，作为供试品溶液。

相应制备样品y1的供试品溶液、样品y2的供试品溶液、样品y3的供试品溶液。

(2)对照品溶液制备：另取薏苡仁对照药材(中国食品药品检定研究院，批号：121254-201504)，制成粉末，取1g粉末，加石油醚(60～90℃)10ml，超声处理30分钟，滤过，取滤液，作为对照品溶液。

(3)照薄层色谱法试验(中国药典2015版四部通则0502)：

1)吸取上述供试品溶液、对照品溶液各2μl，分别点于同一羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶g薄层板上；

2)以石油醚(60～90℃)-乙醚-冰醋酸(82:18:1)为展开剂，展开，取出，晾干；

3)喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，365nm紫外光灯下检视。

本实施例鉴别结果见图1，图1中，1、2、3分别对应的是样品y1、样品y2、样品y3的薄层色谱图，10是薏苡仁对照药材薄层色谱图，根据图1可看出，斑点展开效果特别好，没有拖尾，清晰，可以很好地用于法薏苡仁的鉴别。并且，本实施例获得这样的展开效果所需的步骤2)中的展开时间为10min，步骤3)所需的加热显色时间为120s。

实施例2

本实施例提供一种基于薄层层析的薏苡仁法制饮片的鉴别方法。

本实施例的薏苡仁法制饮片，如上所述的样品y4、样品y5、样品y6。

本实施例的鉴别方法包括：

(1)供试品溶液制备：同实施例1；

(2)对照品溶液制备：同实施例1；

(3)照薄层色谱法试验(中国药典2015版四部通则0502)：

1)吸取上述供试品溶液、对照品溶液各2μl，分别点于同一羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶g薄层板上；

2)以石油醚(60～90℃)-乙醚-冰醋酸(80:15:1)为展开剂，展开，取出，晾干；

3)喷以8％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，365nm紫外光灯下检视。

本实施例鉴别结果见图2，图2中，4、5、6分别对应的是样品y4、样品y5、样品y6的薄层色谱图，10是薏苡仁对照药材薄层色谱图，根据图2可看出，斑点展开效果较好，没有拖尾，清晰。并且，本实施例获得这样的展开效果所需的步骤2)中的展开时间为12min，步骤3)所需的加热显色时间为150s。

实施例3

本实施例提供一种基于薄层层析的薏苡仁法制饮片的鉴别方法。

本实施例的薏苡仁法制饮片，如上所述的样品y7、样品y8、样品y9。

本实施例的鉴别方法包括：

(1)供试品溶液制备：同实施例1；

(2)对照品溶液制备：同实施例1；

(3)照薄层色谱法试验(中国药典2015版四部通则0502)：

1)吸取上述供试品溶液、对照品溶液各2μl，分别点于同一羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶g薄层板上；

2)以石油醚(60～90℃)-乙醚-冰醋酸(75:20:1)为展开剂，展开，取出，晾干；

3)喷以12％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，365nm紫外光灯下检视。

本实施例鉴别结果见图3，图3中，7、8、9分别对应的是样品y7、样品y8、样品y9的薄层色谱图，10是薏苡仁对照药材薄层色谱图，根据图3可看出，斑点展开好，没有拖尾，清晰。并且，本实施例获得这样的展开效果所需的步骤2)中的展开时间为15min，步骤3)所需的加热显色时间为160s。

实施例4

本实施例是实施例3的变化例，提供一种基于薄层层析的薏苡仁法制饮片的鉴别方法。

本实施例的薏苡仁法制饮片，如上所述的样品y7、样品y8、样品y9。

本实施例的鉴别方法包括：

(1)供试品溶液制备：同实施例3；

(2)对照品溶液制备：同实施例3；

(3)照薄层色谱法试验(中国药典2015版四部通则0502)：

1)吸取上述供试品溶液、对照品溶液各2μl，分别点于同一羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶g薄层板上；

2)以石油醚(60～90℃)-乙醚-冰醋酸(82:15:1)为展开剂，展开，取出，晾干；

3)喷以8％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，365nm紫外光灯下检视。

本实施例鉴别结果同实施例3。

对比例1

本对比例是实施例1的对比例，与实施例1相比，主要差别包括采用的展开剂为10:3:0.1的石油醚、乙醚、冰醋酸的混合物，并且重复展开操作的次数为3次。

本对比例的结果是：虽然展开多次，但表征待测法薏苡仁化学成分的斑点依然没有展开，无法形成可供辨析的薄层色谱。

对比例2

本对比例是实施例1的对比例，与实施例1相比，主要差别包括：步骤1)中采用无黏合剂的硅胶g薄层板；步骤3)采用20％硫酸乙醇溶液

本对比例的结果是：斑点展开效果特别好，没有拖尾，清晰，可以很好地用于法薏苡仁的鉴别。并且，本对比例获得这样的展开效果所需的步骤2)中的展开时间为18min，步骤3)所需的加热显色时间为180s。

根据以上各例的结果描述可知，实施例1至4均能很好的分离法薏苡仁的成分，形成清晰的斑点。在长期鉴别实践中，实施例1形成的分离效果最好，实施例2较好，实施例3、4稍次之。这说明，展开剂的配方存在优选方案。另外，在此基础上如果搭配合适的层析板及显色剂，还能够加速展开、显色的时间。

综上所述，本发明基于对法薏苡仁的长期研究，在采用薄层色谱法对其进行鉴别时，挑选体积比为(75～82):(15～20):1的石油醚、乙醚、冰醋酸的混合物为展开剂进行展开，采用该特定配方的展开剂，展开效果好，无需重复进行展开操作或者对展开缸进行预饱和，简化鉴别路程，鉴别效率高。

以上所述实施例的各技术特征可以进行任意的组合，为使描述简洁，未对上述实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述，然而，只要这些技术特征的组合不存在矛盾，都应当认为是本说明书记载的范围。

以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。