一种检测肺炎支原体的试剂盒的制作方法

本发明涉及一种体外诊断试剂领域，尤其是一种检测肺炎支原体的试剂盒。

背景技术：

肺炎支原体(mycoplasmapneumoniae,mp)是儿童社区获得性肺炎的重要病原之一，mp感染大概占儿童社区获得性肺炎感染的10％-30％，多发生在家庭、社区、学校和野营区等人口密集的公众场所。mp感染具有季节性，多发在秋季，主要通过飞沫传播，大多数mp感染具有局限性，是否出现临床感染症状取决于粘附在宿主呼吸道表面的mp能否被清除，但是仍然有3％-13％引起临床症状，其主要症状是干咳，体温在37.7±1.0℃，并可持续1-3周，可伴有咽痛和肌肉酸痛，缺乏特异性的临床特征，而且大约每3-7年会暴发流行1次。因此，早期、快速、准确诊断mp和耐药性mp对指导临床用药、疾病转归及预后起到至关重要的作用。

目前实验室诊断mp感染的方法分为三类：分离培养及鉴定、分子生物学诊断和血清学诊断。分离培养法是诊断mp感染的金标准，但是培养条件要求高，培养周期长(10-14d)，一般用于科研和临床回顾性分析，对mp早期诊断意义不大，现在已经很少运用于临床诊断；分子生物学包括：巢式pcr、实时定量pcr、环介导等温扩增反应(lamp)技术、依赖核酸序列的扩增技术(nasba)、实时荧光核酸恒温扩增检测技术(sat)和复合pcr等技术，分子生物学技术灵敏度和特异性高，适用于早期的临床诊断，但是，除了分子生物学本身的假阳性率高和标本易污染等缺点外，研究发现在健康人群中mp携带率高(0.1％-13.5％)，并且感染后dna可在呼吸道存活时间长(7周-7个月时间)，因此，即使运用分子生物学方法检测到mpdna阳性也不能诊断mp感染需结合临床进行判断。此外还受不同标本类型、采样部位、采样人和实验室采用实验方法等因素影响，目前还没有统一标准，给实验室诊断方法的评估带来一定困难；血清学方法是我国诊断mp感染常用方法，实验方法包括补体结合实验(cft)、明胶颗粒凝集试验(pa)和elisa等方法。cft整体敏感度较差，检测抗体的特异性不高，而且易出现交叉反应，造成假阳性，目前临床上已经很少使用。pa实验和elisa的灵敏度和特异性都明显优于cft，被一些国家广泛应用于临床，并且与分子生物学结果有较好的一致性，但是，商品化的血清学方法检测mp感染都是手工法，操作比较繁琐和耗时长，其敏感度还受实验室条件和实验人员的技术等影响。本实验使用的标本类型是末梢全血或者血清，成本低，对儿童的创伤更少，标本更容易采集，从医学的心理学角度来说比抽血测定mp更容易被患儿的家属接受。

技术实现要素：

本发明所要解决的技术问题是提供一种肺炎支原体片段、包含其的试剂盒及试剂盒的使用方法,本发明能够运用在全自动生化仪，具有高灵敏度高、检测速度快、结果稳定、线性范围广、重复好且易于标准化和标本采集容易且标本用量少等优点，能够为临床肺炎支原体感染诊断提供一种早期、快速、灵敏度高和特异性好的新方法，从医学的心理学角度来说比抽血测定mp更容易被患儿的家属接受。

本发明解决上述技术问题的技术方案如下：一种检测肺炎支原体的试剂盒，所述试剂盒包括r1试剂和r2试剂，所述r1试剂包括第一缓冲物、第一稳定剂、第一保护剂第一防腐剂、增浊剂和水，所述r2试剂包括肺炎支原体抗原、聚苯乙烯胶乳微球、第二缓冲物、第二稳定剂、第二保护剂、第二防腐剂和水。

本发明的有益效果是：缓冲物能够使溶液的ph值维持在稳定范围，保证溶液中物质能够有稳定的酸碱环境，稳定剂能保持试剂内的电荷平衡，保护剂是能够保护胶乳颗粒表面的抗体的试剂，肺炎支原体与聚苯乙烯胶乳微球和加进来的样本内抗体结合，其分光光度值和样本所含抗体浓度成正比，从而显示样本所含抗原浓度，增浊剂能够增加溶液浊度，增加测试反应的灵敏度、缩短了反应时间，利于后续分光光度的检测，防腐剂在不影响后续反应的同时能够起到杀菌防腐作用，在上述试剂的反应体系中，肺炎支原体抗原-聚苯乙烯胶乳微球混合物与样本中抗体发生抗原抗体反应，在增浊剂的作用下，迅速形成免疫复合物微球，使反应体系出现浊度，这种浊度能够被仪器检测，并且用吸光度表示，在一定线性范围内，其吸光度值与样本中肺炎支原体抗体浓度成正比，从而检测出样本中肺炎支原体抗体的浓度。

在上述技术方案的基础上，本发明还可以做如下改进：

进一步，所述肺炎支原体的抗原包含seqidno:1、seqidno:2和seqidno:3中至少一个片段。

采用上述进一步方案的有益效果是提供肺炎支原体抗原片段，能够与血液中抗体相结合，通过分光光度值的变化跟血液抗体浓度成正比从而检测出抗体浓度。

进一步，所述肺炎支原体的抗原包含肺炎支原体细胞膜成分。

采用上述进一步方案的有益效果是提供肺炎支原体抗原，能够与血液中抗体相结合，通过分光光度值的变化跟血液抗体浓度成正比从而检测出抗体浓度。

进一步，所述肺炎支原体的抗原包含seqidno:1、seqidno:2和seqidno:3所示氨基酸序列经过一个或多个氨基酸残基的突变、插入或缺失形成具有肺炎支原抗原性的蛋白片段。

采用上述进一步方案的有益效果是提供肺炎支原体抗原片段，能够与血液中抗体相结合，通过分光光度值的变化跟血液抗体浓度成正比从而检测出抗体浓度。

进一步，所述第一缓冲物为hepes、tris—hcl、mops、pbs、甘氨酸、绷砂中的任一种，所述第一缓冲物在所述r1试剂中浓度范围为25-500mmol/l；所述第二缓冲物为pbs、绷砂、甘氨酸、hepes、goods、mops、mes中的任一种，所述第二缓冲物在所述r2试剂中浓度范围为25-50mmol/l，所述稳定剂l选自kcl、nacl、cacl中的任一种，所述第一稳定剂在所述r1试剂中的质量浓度为0.5％-10％；所述第二稳定剂包括离子稳定剂和非离子稳定剂，所述离子稳定剂为nacl、kcl、na2c03、na2s04、k2s04,中的任一种，所述非离子稳定剂为tween20或tergitolnp9，所述离子稳定剂在所述r2试剂中的浓度为20-25mol/l，所述非离子稳定剂在所述r2试剂中的质量浓度均为0.01-1％，所述第一保护剂为牛血清白蛋白，所述第一保护剂在所述r1试剂的质量浓度为0.1-10％；所述第二保护剂为牛血清白蛋白，所述第二保护剂在所述r2试剂的质量浓度均为0.1-1％。

采用上述进一步方案的有益效果是合适的缓冲物质的选择，具有更佳的缓冲效果能够使溶液ph值保持稳定，有利于物质的保存和反应，合适的稳定剂能够保持溶液电荷的稳定，r2中采用离子稳定剂和悬浮稳定剂结合使用，使试剂的电荷平衡状态，提高了肺炎支原体胶乳增强免疫比浊试剂盒的稳定性，使得肺炎支原体胶乳增强免疫比浊试剂盒的稳定性可达18个月，合适的保护剂的选择能够保护溶液中的胶乳颗粒表面的抗体，有利于后续反应。

进一步，所述聚苯乙烯乳胶微球的表面官能团为氨基、羧基或环氧基，所述聚苯乙烯乳胶微球的粒径为100-600nm，所述聚苯乙烯胶乳微球和所述支原体通过共价交联方式连接，所述聚苯乙烯乳胶微球在所述r2试剂中的质量浓度为0.01％-1％，所述肺炎支原体在所述r2试剂中的质量浓度为0.001％-0.1％。

采用上述进一步方案的有益效果是表面官能团决定聚苯乙烯乳胶微球的性质，使肺炎支原体和抗体很好的结合，采用直径为100-600nm的聚苯乙烯胶乳颗粒，具有较大的颗粒，增加了血液中肺炎支原体抗体和肺炎支原体抗原反应时的浊度，从而增加测试反应的灵敏度、缩短了反应时间。

进一步，所述第一防腐剂为叠氮钠、硫柳求、proclin300中的任一种；所述第二防腐剂为叠氮钠、硫柳求、proclin300中的任一种，所述第一防腐剂在所述r1试剂中的质量浓度为0.01％-1％，所述第二防腐剂在所述r2试剂中的质量浓度为0.01％-1％，所述增浊剂为peg8000、peg4000、peg2000、葡聚糖中的任一种，所述增浊剂在所述r1试剂中的质量浓度为0.01-1％。

采用上述进一步方案的有益效果是合适的增浊剂能够增加溶液浊度，增加测试反应的灵敏度、缩短了反应时间，利于后续分光光度的检测，合适的防腐剂在不影响后续反应的同时能够起到杀菌防腐作用。

进一步，所述r1试剂的制备方法为称取对应量的第一缓冲物、第一稳定剂、增浊剂、第一防腐剂、第一保护剂之后搅拌混合均匀再用水定容，即得所述r1试剂；

所述r2试剂的制备方法包括，

肺炎支原体及聚苯乙烯胶乳微球的预处理：称量所述第二缓冲物加入对应量的水配制成ph值范围为5-9.6的缓冲液，用所述缓冲液将肺炎支原体稀释,得到肺炎支原体稀释液；将所述聚苯乙烯胶乳微球用蒸馏水离心3次，去掉上清，得到洗涤后聚苯乙烯胶乳微球；将所述洗涤后聚苯乙烯胶乳微球用所述缓冲液稀释得到聚苯乙烯胶乳微球稀释液,加入活化物质,在室温下搅拌反应,反应结束后进行二次离心去上清,得到活化后聚苯乙烯胶乳微球，用缓冲液重悬浮；

肺炎支原体-聚苯乙烯胶乳微球混合物的制备：将所述活化后聚苯乙烯胶乳微球加入到所述所述肺炎支原体抗原稀释液中，室温下二次搅拌反应，再加入终止物终止反应得到肺炎支原体抗原-聚苯乙烯胶乳微球混合液，将得到的所述肺炎支原体抗原-聚苯乙烯胶乳微球混合液三次离心，去掉上清得到肺炎支原体抗原-聚苯乙烯胶乳微球混合物；

r2试剂的制备：用所述缓冲液洗涤所述肺炎支原体抗原-聚苯乙烯胶乳微球混合物，进行四次离心3次，去掉上清，最后加入对应量的第二缓冲物、第二防腐剂、第二稳定剂、第二保护剂和水搅拌混合均匀即得所述r2试剂。

采用上述进一步方案的有益效果是合理的步骤能够发挥每种物质在溶液中的作用，能够显著提高实验的准确性。

进一步，所述肺炎支原体及聚苯乙烯胶乳微球的预处理所述肺炎支原体抗原稀释液的肺炎支原体浓度为2mg/ml，所述离心速率为15000rpm，所述离心时间为10min，所述聚苯乙烯胶乳微球稀释液中所述聚苯乙烯胶乳微球质量浓度为1％，所述活化物质为edc，所述活化物质在所述聚苯乙烯胶乳微球稀释液中的浓度为10mg/ml，所述搅拌反应时间为30min；所述肺炎支原体抗原-聚苯乙烯胶乳微球混合物的制备所述二次搅拌反应时间为2h，所述终止物为牛血清蛋白，所述终止物在所述肺炎支原体抗原-聚苯乙烯胶乳微球混合液中的浓度为25g/l。

采用上述进一步方案的有益效果是合适的实验参数能够使每种物质合适的浓度能够增加各种物质的适配性，合理的离心时间和离心速率能够在分离物质的同时节省能源，edc能够对聚苯乙烯胶乳微球起到很好的活化作用。

进一步，所述活化物质还包括nhs，所述nhs在所述肺炎支原体-聚苯乙烯胶乳微球混合液中的浓度为0.01g/l。

采用上述进一步方案的有益效果是加入nhs，能够对聚苯乙烯胶乳微球起到更好的活化作用，进一步增强聚苯乙烯胶乳微球的活性。

附图说明

图1为本发明标准曲线示意图；

图2为本发明标准曲线示意图；

图3为本发明标准曲线示意图

图4为本发明标准曲线示意图；

图5为本发明标准曲线示意图。

具体实施方式

以下结合附图对本发明的原理和特征进行描述，所举实例只用于解释本发明，并非用于限定本发明的范围。

如图1所示，本发明实施例1标准曲线示意图；

图2为本发明实施例2标准曲线示意图；

图3是本发明实施例3标准曲线示意图；

图4是本发明实施例4标准曲线示意图；

图5是本发明实施例5标准曲线示意图。

肺炎支原体和聚苯乙烯胶乳微球通过化学键相连，如二步偶联。

实施例1

肺炎支原体p1乳胶增强免疫比浊法检测试剂盒的制备和检测

(1)试剂r1的制备：

称取23.83ghepes、9gnacl、15gpeg8000、0.5g叠氮钠、5g牛血清白蛋白，调节ph至7.4,定溶1l即得试剂r1。

(2)试剂r2的制备：

第一步：用0.02m/l的mes缓冲液将人肺炎支原体细胞膜成分(肺炎支原体由中国医学科学院惠赠，通过处理得到细胞膜成分)稀释至浓度为2mg/ml的肺炎支原体细胞膜成分稀释液；聚苯乙烯胶乳微球(136nm)用蒸馏水洗涤3次，去上清。

第二步：再用ph为5.3、浓度为0.02m/l的mes缓冲液将上述洗涤过的聚苯乙烯胶乳微球稀释到质量浓度为1％。向1l上述胶乳稀释液中加入o.o1g的edc,在室温下搅拌反应30min,反应结束后15000rpm的转速离心15分钟去上清，用0.02m/l的mes缓冲液重悬浮，重复2次，除去未反应的edc,然后加入步骤一得到的人肺炎支原体细胞膜成分稀释液，室温下搅拌反应2h后，再加入50g牛血清白蛋白终止反应，将得到的反应液于15000rpm的转速下用pbs缓冲液离心15分钟去上清，用pbs缓冲液重悬浮，重复2次，再加入5g牛血清白蛋白、0.5g叠氮钠、9gnacl和80g庶糖，搅拌混合均匀即得试剂r2。

(3)检测

上述实施例制备的试剂，上述r2用pbs再稀释4倍，用蒸馏水把标准品(浓度：4mg/ml默赛飞公司)稀释成6个不同浓度，分别为0.5mg/ml，1mg/ml,2mg/ml，3mg/ml，4mg/ml。测定仪器为酶标仪；测定条件：主波长：490nm,副波长：630nm；分析类型：两点终点法；测定方法：校准品10ul,再加入120ul的试剂r1混匀,37℃恒温2min,，然后加入40ul试剂r2混匀,37℃孵育2分后读取吸光度a，进行多点定标，并用样条函数进行计算。

样本通过其吸光度变化，与标准曲线进行对比即可得到样本中mp抗体浓度。

实施例2

肺炎支原体p116乳胶增强免疫比浊法检测试剂盒的制备和检测

(1)试剂r1的制备：

称取23.83ghepes、9gnacl、15gpeg8000、0.5g叠氮钠、5g牛血清白蛋白，调节ph至7.4,定溶1l即得试剂r1。

(2)试剂r2的制备：

第一步：用0.02m/l的mes缓冲液将人肺炎支原体抗原p116稀释至浓度为2mg/ml的肺炎支原体抗原p116稀释液；聚苯乙烯胶乳微球用蒸馏水洗涤。

第二步：再用ph为6.0浓度为0.02m/l的mes缓冲液将上述洗涤过的聚苯乙烯胶乳微球稀释到质量浓度为1％。向1l上述胶乳稀释液中加入o.o1g的edc,在室温下搅拌反应30min,反应结束后15000rpm的转速离心15分钟去上清，用0.02m/l的mes缓冲液重悬浮，重复2次，除去未反应的edc,然后加入步骤一得到的人肺炎支原体抗原p116稀释液，室温下搅拌反应2h后，再加入50g牛血清白蛋白终止反应，将得到的反应液于15000rpm的转速下用pbs缓冲液离心15分钟去上清，用pbs缓冲液重悬浮，重复2次，再加入5g牛血清白蛋白、0.5g叠氮钠、9gnacl和80g庶糖，搅拌混合均匀即得试剂r2。

(3)检测

上述实施例制备的试剂，上述r2用pbs再稀释4倍，用蒸馏水把标准品(浓度：4mg/ml默赛飞公司)稀释成6个不同浓度，分别为0.5mg/ml，1mg/ml,2mg/ml，3mg/ml，4mg/ml。测定仪器为酶标仪；测定条件：主波长：490nm,副波长：630nm；分析类型：两点终点法；测定方法：校准品10ul,再加入120ul的试剂r1混匀,37℃恒温2min,，然后加入40ul试剂r2混匀,37℃孵育2分后读取吸光度a，进行多点定标，并用样条函数进行计算。

样本通过其吸光度变化，与标准曲线进行对比即可得到样本中mp抗体浓度。

实施例3

肺炎支原体p30乳胶增强免疫比浊法检测试剂盒的制备和检测

(1)试剂r1的制备：

称取23.83ghepes、9gnacl、15gpeg8000、0.5g叠氮钠、5g牛血清白蛋白，调节ph至7.4,定溶1l即得试剂r1。

(2)试剂r2的制备：

第一步：用0.02m/l的mes缓冲液将人肺炎支原体抗原p30稀释至浓度为2mg/ml的肺炎支原体抗原p30稀释液；聚苯乙烯胶乳微球(136nm)用蒸馏水洗涤。

第二步：再用ph为5.0、浓度为0.02m/l的mes缓冲液将上述洗涤过的聚苯乙烯胶乳微球稀释到质量浓度为1％。向1l上述胶乳稀释液中加入o.o1g的edc,在室温下搅拌反应30min,反应结束后15000rpm的转速离心15分钟去上清，用0.02m/l的mes缓冲液重悬浮，重复2次，除去未反应的edc,然后加入步骤一得到的人肺炎支原体抗原p30稀释液，室温下搅拌反应2h后，再加入50g牛血清白蛋白终止反应，将得到的反应液于15000rpm的转速下用pbs缓冲液离心15分钟去上清，用pbs缓冲液重悬浮，重复2次，再加入5g牛血清白蛋白、0.5g叠氮钠、9gnacl和80g庶糖，搅拌混合均匀即得试剂r2。

(3)检测

上述实施例制备的试剂，上述r2用pbs再稀释4倍，用蒸馏水把标准品(浓度：4mg/ml默赛飞公司)稀释成6个不同浓度，分别为0.5mg/ml，1mg/ml,2mg/ml，3mg/ml，4mg/ml。测定仪器为酶标仪；测定条件：主波长：490nm,副波长：630nm；分析类型：两点终点法；测定方法：校准品10ul,再加入120ul的试剂r1混匀,37℃恒温2min,，然后加入40ul试剂r2混匀,37℃孵育2分后读取吸光度a，进行多点定标，并用样条函数进行计算。

样本通过其吸光度变化，与标准曲线进行对比即可得到样本中mp抗体浓度。

实施例4

肺炎支原体组合原体(p1+p30+p116)乳胶增强免疫比浊法检测试剂盒的制备和检测

(1)试剂r1的制备：

称取23.83ghepes、9gnacl、15gpeg8000、0.5g叠氮钠、5g牛血清白蛋白，调节ph至7.4,定溶1l即得试剂r1。

(2)试剂r2的制备：

第一步：用0.02m/l的mes缓冲液将肺炎支原体组合原体(p1+p30+p116)稀释至浓度为2mg/ml的肺炎支原体组合抗原(p1+p30+p116)稀释液；聚苯乙烯胶乳微球(136nm)用蒸馏水洗涤。

第二步：再用ph为6.0、浓度为0.02m/l的mes缓冲液将上述洗涤过的聚苯乙烯胶乳微球稀释到质量浓度为1％。向1l上述胶乳稀释液中加入o.o1g的edc,在室温下搅拌反应30min,反应结束后15000rpm的转速离心15分钟去上清，用0.02m/l的mes缓冲液重悬浮，重复2次，除去未反应的edc,然后加入步骤一得到的人肺炎支原体组合抗原(p1+p30+p116)稀释液，室温下搅拌反应2h后，再加入50g牛血清白蛋白终止反应，将得到的反应液于15000rpm的转速下用pbs缓冲液离心15分钟去上清，用pbs缓冲液重悬浮，重复2次，再加入5g牛血清白蛋白、0.5g叠氮钠、9gnacl和80g庶糖，搅拌混合均匀即得试剂r2。

(3)检测

上述实施例制备的试剂，上述r2用pbs再稀释4倍，用蒸馏水把标准品(浓度：4mg/ml默赛飞公司)稀释成6个不同浓度，分别为0.5mg/ml，1mg/ml,2mg/ml，3mg/ml，4mg/ml。测定仪器为酶标仪；测定条件：主波长：490nm,副波长：630nm；分析类型：两点终点法；测定方法：校准品10ul,再加入120ul的试剂r1混匀,37℃恒温2min,，然后加入40ul试剂r2混匀,37℃孵育2分后读取吸光度a，进行多点定标，并用样条函数进行计算。

样本通过其吸光度变化，与标准曲线进行对比即可得到样本中mp抗体浓度。

实施例5

一种肺炎支原体乳胶增强免疫比浊法检测试剂盒，包含如下制备步骤：

(1)试剂r1的制备：

称取23.83ghepes、9gnacl、15gpeg8000、0.5g叠氮钠、5g牛血清白蛋白，调节ph至7.4,定溶1l即得试剂r1。

(2)试剂r2的制备：

第一步：用0.02m/l的mes缓冲液将肺炎支原体p1稀释至浓度为2mg/ml的肺炎支原体p1稀释液；聚苯乙烯胶乳微球(197nm)用蒸馏水洗涤。

第二步：再用ph为5.3、浓度为0.02m/l的mes缓冲液将上述洗涤过的聚苯乙烯胶乳微球稀释到质量浓度为1％。向1l上述胶乳稀释液中加入o.o1g的edc,在室温下搅拌反应30min,反应结束后12000rpm的转速离心12分钟去上清，用0.02m/l的mes缓冲液重悬浮，重复2次，除去未反应的edc,然后加入步骤一得到的人肺炎支原体p1稀释液，室温下搅拌反应2h后，再加入50g牛血清白蛋白终止反应，将得到的反应液于12000rpm的转速下用pbs缓冲液离心12分钟去上清，用pbs缓冲液重悬浮，重复2次，再加入5g牛血清白蛋白、0.5g叠氮钠、9gnacl和80g庶糖，搅拌混合均匀即得试剂r2。

(3)检测

上述实施例制备的试剂，上述r2用pbs再稀释4倍，用蒸馏水把标准品(浓度：4mg/ml默赛飞公司)稀释成6个不同浓度，分别为0.5mg/ml，1mg/ml,2mg/ml，3mg/ml，4mg/ml。测定仪器:贝克曼au5800；测定条件：主波长：490nm,副波长：630nm；分析类型：两点终点法；测定方法：校准品10ul,再加入120ul的试剂r1混匀,37℃恒温2min,，然后加入40ul试剂r2混匀,37℃孵育2分后读取吸光度a，进行多点定标，并用样条函数进行计算。

对比例1

试剂：本专利实例5中制备的试剂盒和购买富士瑞必欧株式会社公司生产的肺炎支原体抗体检测试剂盒(被动凝集法)。

标本：20份阴性样本和20份阳性样本均由深圳市龙华区中心医院检验科提供。

实验方法：本专利试剂盒按照实施例5中的操作方法测定20份阴性样本和20份阳性样本；肺炎支原体抗体检测试剂盒(被动凝集法)按照试剂说明书操作测定20份阴性样本和20份阳性样本。结果判断按照试剂说明书。

实验结果：见表1

表1.本专利制备试剂盒与肺炎支原体抗体检测试剂盒(被动凝集法)比对结果

第一缓冲物为hepes、tris—hcl、mops、pbs、甘氨酸、绷砂中的任一种；第二缓冲物为pbs、绷砂、甘氨酸、hepes、goods、mops、mes中的任一种；稳定剂l选自kcl、nacl、cacl中的任一种；第二稳定剂包括离子稳定剂和非离子稳定剂，离子稳定剂为nacl、kcl、na2c03、na2s04、k2s04,中的任一种，非离子稳定剂为tween20或tergitolnp9，聚苯乙烯乳胶微球的表面官能团为氨基、羧基或环氧基，聚苯乙烯乳胶微球的粒径为100-600nm，第一防腐剂为叠氮钠、硫柳求、proclin300中的任一种；第二防腐剂为叠氮钠、硫柳求、proclin300中的任一种，所述增浊剂为peg8000、peg4000、peg2000、葡聚糖中的任一种均能实现上述实施例中的检测。

seqidno:1为肺炎支原体p1抗原

seqidno:2为肺炎支原体p116抗原

seqidno:3为肺炎支原体p30抗原。

seqidno:1

seqidno:2

seqidno:3

以上所述仅为本发明的较佳实施例，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

序列表

<110>廖朝晖

<120>一种检测肺炎支原体的试剂盒

<160>3

<170>siposequencelisting1.0

<210>1

<211>1635

<212>prt

<213>肺炎支原体(mycoplasmapneumoniae)

<400>1

methisglnthrlyslysthralaleuserlysserthrtrpileleu

151015

ileleuthralathralaserleualathrglyleuthrvalvalgly

202530

hisphethrserthrthrthrthrleulysargglnglnphesertyr

354045

thrargproaspgluvalalaleuarghisthrasnalaileasnpro

505560

argleuthrprotrpthrtyrargasnthrserpheserserleupro

65707580

leuthrglygluasnproglyalatrpalaleuvalargaspasnser

859095

alalysglyilethralaglyserglyserglnglnthrthrtyrasp

100105110

prothrargthrglualaalaleuthralaserthrthrphealaleu

115120125

argargtyraspleualaglyargalaleutyraspleuasppheser

130135140

lysleuasnproglnthrprothrargaspglnthrglyglnilethr

145150155160

pheasnpropheglyglypheglyleuserglyalaalaproglngln

165170175

trpasngluvallysasnlysvalprovalgluvalalaglnasppro

180185190

serasnprotyrargphealavalleuleuvalproargservalval

195200205

tyrtyrgluglnleuglnargglyleualaleuproasnglnglyser

210215220

serserglyseraspserthrasnglnthrglyalametpheglyleu

225230235240

lysvallysaspalathrvalaspserserlysglnserthrgluser

245250255

leulysglyglugluserserserserserthrthrserserthrser

260265270

thrthrglnargglyglyserserasngluasnlysvallysalaleu

275280285

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