谷胱甘肽含量的分析方法与流程

本发明涉及药物分析技术领域，具体地涉及一种谷胱甘肽含量的分析方法。

背景技术：

谷胱甘肽(glutathionegsh)是由谷氨酸、半胱氨酸和甘氨酸结合，含有巯基的的三肽，具有抗氧化作用和整合解毒作用。半胱氨酸上的巯基为谷胱甘肽活性基团(故谷胱甘肽常简写为g-sh)，易与某些药物(如扑热息痛)、毒素(如自由基、碘乙酸、芥子气，铅、汞、砷等重金属)等结合，而具有整合解毒作用。故谷胱甘肽(尤其是肝细胞内的谷胱甘肽)能参与生物转化作用，从而把机体内有害的毒物转化为无害的物质，排泄出体外。谷胱甘肽还能帮助保持正常的免疫系统的功能。

然而，目前关于谷胱甘肽含量的分析检测方法未见报道。

技术实现要素：

本发明的目的在于提供一种能够准确的检测出谷胱甘肽的含量、重现性好、灵敏度高谷胱甘肽含量的分析方法。

根据本发明的一个方面，提供一种谷胱甘肽含量的分析方法：

所述方法是利用结合紫外检测器的高效液相色谱法进行，其分析方法中，色谱柱为亲水性色谱柱，流动相由流动相a和流动相b组成，采用缓冲盐溶液作为所述流动相a，所述缓冲盐溶液为用磷酸调节ph的磷酸盐溶液或醋酸盐溶液，采用有机溶剂作为所述流动相b，所述有机溶剂为甲醇、乙腈、乙醇中的至少一种，洗脱方式为等度洗脱。利用本发明的方法可以准确的检测出谷胱甘肽的含量，重现性好且灵敏度高。

作为本发明的进一步改进，缓冲盐溶液为磷酸氢二铵、磷酸二氢钾和磷酸氢二钾中的至少一种。

作为本发明的进一步改进，紫外检测器的检测波长为220±2nm。

作为本发明的进一步改进，高效液相色谱法的柱温为20-30℃。若温度过高或过低，分离的效果不理想。

作为本发明的进一步改进，高效液相色谱法的流速为0.8-1.2ml/min，若流速过快或过慢，分离的效果不理想。

作为本发明的进一步改进，流动相a中盐相的浓度为0.01-0.03mol/l，所述流动相a中盐相的ph值为2.0-4.0，使谷胱甘肽能具有良好的峰型，重现性好。

作为本发明的进一步改进，流动相a和流动相b的体积比为(90-96)：(4-10)。

作为本发明的进一步改进，该方法包括以下步骤：

(1)供试品溶液的制备：取谷胱甘肽适量，加水溶解并稀释制成每1ml中约含谷胱甘肽0.2mg的溶液；

(2)色谱条件：采用亲水性色谱柱，所述流动相a中盐相的浓度为0.01-0.03mol/l，用磷酸调节其ph值为2.0-4.0，所述流动相a和流动相b的体积比为(90-96)：(4-10)；所述紫外检测器的检测波长为220±2nm，所述高效液相色谱法的柱温为20-30℃，流速为0.8-1.2ml/min，等度洗脱；

(3)取所述供试品溶液10μl，按照上述色谱条件，注入液相色谱仪，记录色谱图。

作为本发明的进一步改进，上述方法包括下列之一：

a.所述色谱条件为：采用250*4.6mm,5μm的vertexaq-c18亲水性色谱柱，所述流动相a采用浓度为0.01mol/l并用磷酸调节ph至2.0的磷酸二氢钾溶液，所述流动相a和流动相b的体积比为90：10，柱温为30℃，检测波长为220nm，流速为0.8ml/min，等度洗脱；

b.所述色谱条件为：采用250*4.6mm,5μm的ymc-packods-aqc18亲水性色谱柱，所述流动相a采用浓度为0.02mol/l并用磷酸调节ph至3.0的磷酸二氢钾溶液，所述流动相a和流动相b的体积比为93：7，柱温为25℃，检测波长为220nm，流速为1.0ml/min，等度洗脱；

c.所述色谱条件为：采用250*4.6mm,5μm的dbc18亲水性色谱柱，所述流动相a采用浓度为0.03mol/l并用磷酸调节ph至4.0的磷酸二氢钾溶液，所述流动相a和流动相b的体积比为96：4，柱温为20℃，检测波长为220nm，流速为1.2ml/min，等度洗脱。

本发明具有以下优点和效果：利用本发明所述的对于谷胱甘肽含量的分析能够准确的检测出谷胱甘肽的含量，重现性好且灵敏度更高。

附图说明

图1是本发明谷胱甘肽含量的分析方法的空白溶液图谱；

图2是本发明实施例一中谷胱甘肽的高效液相色谱图；

图3是本发明实施例二中谷胱甘肽的高效液相色谱图；

图4是本发明实施例三中谷胱甘肽的高效液相色谱图。

具体实施方式

下面结合各实施方式对本发明进行详细说明，但应当说明的是，这些实施方式并非对本发明的限制，本领域普通技术人员根据这些实施方式所作的功能、方法、或者结构上的等效变换或替代，均属于本发明的保护范围之内。

本发明公开了一种谷胱甘肽含量的分析方法，包括以下步骤：

(1)供试品溶液的制备：取谷胱甘肽适量，加水溶解并稀释制成每1ml中约含谷胱甘肽0.2mg的溶液；

(2)色谱条件：采用亲水性色谱柱，所述流动相a中盐相的浓度为0.01-0.03mol/l，用磷酸调节其ph值为2.0-4.0，所述流动相a和流动相b的体积比为(90-96)：(4-10)；所述紫外检测器的检测波长为220±2nm，所述高效液相色谱法的柱温为20-30℃，流速为0.8-1.2ml/min，等度洗脱；

(3)取所述供试品溶液10μl，按照上述色谱条件，注入液相色谱仪，记录色谱图。

实施例一

本实施例公开了本发明一种谷胱甘肽含量的分析方法的一种实施例。

本实施例的具体步骤为：

供试品溶液的制备(临用新制)：取谷胱甘肽适量，加水溶解并稀释制成每1ml中约含谷胱甘肽0.2mg的溶液。

同法制备对照品溶液(临用新制)。

色谱条件为：采用250*4.6mm,5μm的vertexaq-c18亲水性色谱柱，所述流动相a采用浓度为0.01mol/l并用磷酸调节ph至2.0的磷酸二氢钾溶液，所述流动相a和流动相b的体积比为90：10，柱温为30℃，检测波长为220nm，流速为0.8ml/min，等度洗脱。

取上述供试品溶液10μl，按照上述色谱条件，注入液相色谱仪，记录色谱图。按外标法计算含量。

图1是本发明谷胱甘肽含量的分析方法的空白溶液图谱，本实施例的系统适用性测定结果如图2所示：谷胱甘肽理论板数为8700。

实施例二

本实施例公开了本发明一种谷胱甘肽含量的分析方法的另一种实施例。本实施例的具体步骤为：

供试品溶液的制备(临用新制)：取谷胱甘肽适量，加水溶解并稀释制成每1ml中约含谷胱甘肽0.2mg的溶液。

同法制备对照品溶液(临用新制)。

色谱条件为：采用250*4.6mm,5μm的ymc-packods-aqc18亲水性色谱柱，所述流动相a采用浓度为0.02mol/l并用磷酸调节ph至3.0的磷酸二氢钾溶液，所述流动相a和流动相b的体积比为93：7，柱温为25℃，检测波长为220nm，流速为1.0ml/min，等度洗脱。

取上述供试品溶液10μl，按照上述色谱条件，注入液相色谱仪，记录色谱图。按外标法计算含量。

如图3所示，系统适用性测定结果：谷胱甘肽理论板数为8500。

实施例三

本实施例公开了本发明一种谷胱甘肽含量的分析方法的另一种实施例。本实施例的具体步骤为：

供试品溶液的制备(临用新制)：取谷胱甘肽适量，加水溶解并稀释制成每1ml中约含谷胱甘肽0.2mg的溶液。

同法制备对照品溶液(临用新制)。

色谱条件为：采用250*4.6mm,5μm的dbc18亲水性色谱柱，所述流动相a采用浓度为0.03mol/l并用磷酸调节ph至4.0的磷酸二氢钾溶液，所述流动相a和流动相b的体积比为96：4，柱温为20℃，检测波长为220nm，流速为1.2ml/min，等度洗脱。

取上述供试品溶液10μl，按照上述色谱条件，注入液相色谱仪，记录色谱图。按外标法计算含量。

如图4所示，系统适用性测定结果：谷胱甘肽理论板数为8500。

本发明所揭示的分析方法操作简单，能够准确的检测出谷胱甘肽的含量，重现性好且灵敏度更高。

上文所列出的一系列的详细说明仅仅是针对本发明的可行性实施方式的具体说明，它们并非用以限制本发明的保护范围，凡未脱离本发明技艺精神所作的等效实施方式或变更均应包含在本发明的保护范围之内。

对于本领域技术人员而言，显然本发明不限于上述示范性实施例的细节，而且在不背离本发明的精神或基本特征的情况下，能够以其他的具体形式实现本发明。因此，无论从哪一点来看，均应将实施例看作是示范性的，而且是非限制性的，本发明的范围由所附权利要求而不是上述说明限定，因此旨在将落在权利要求的等同要件的含义和范围内的所有变化囊括在本发明内。

此外，应当理解，虽然本说明书按照实施方式加以描述，但并非每个实施方式仅包含一个独立的技术方案，说明书的这种叙述方式仅仅是为清楚起见，本领域技术人员应当将说明书作为一个整体，各实施例中的技术方案也可以经适当组合，形成本领域技术人员可以理解的其他实施方式。