本发明涉及一种高稳定性化学发光底物液，是单一试剂化学发光底物液。应用于化学发光检测领域。
背景技术：
：目前，临床检验用体外诊断检测试剂领域应用的最为广泛的检测方法，主要是化学发光免疫分析法。化学发光免疫分析法是临床免疫检验技术发展的较高诊断技术，它可以进行定量检测，与放射性免疫分析法和酶联免疫分析法相比，具有放射性免疫分析法和酶联免疫分析法的所有优点，同时克服了放射性免疫分析法和酶联免疫分析法的缺点。其中化学发光免疫分析法所用到的化学发光底物液是最重要的试剂，是限制化学发光检测的关键物质。化学发光底物液的灵敏度、发光值测定范围以及稳定性等显著影响化学发光免疫分析检测。市面上一般的化学发光底物液是有两种试剂组成：a液和b液，在使用之前等比例混合，混合后在10分钟之内使用，超出一定时间后发光值和发光梯度就开始下降，导致检测范围变窄，线性变差，灵敏度降低，不能满足检测需要。技术实现要素：鉴于一般化学发光底物液的问题：①配液麻烦：需要分别配置2种不同试剂a液和b液，②使用麻烦：使用时a液和b液需要等比例混合，③稳定性短：a液和b液等比混合好之后要在10分钟之内使用。本发明提出了一种试剂化学发光底物液，克服了一般化学发光底物液，配液麻烦、使用麻烦、稳定性短的问题带来的局限性，使配制更简便，保存和操作更简单，稳定性更长，便于检测应用。本发明涉及的化学发光底物液成分及浓度如下：二甲基甲酰胺0.1%-3.2%，鲁米诺0.3-1.2mol/l，过氧化氢1-4mol/l，增强剂4-（咪唑-1-基）苯酚0.25-2mol/l，苯甲酸钠0.1-0.3%，ph7.4-9.5的tris-hcl0.01mol/l缓冲体系。本发明优选的化学发光底物液成分包含：二甲基甲酰胺0.2%，鲁米诺0.63mol/l，过氧化氢2mol/l，4-（咪唑-1-基）苯酚1mol/l，苯甲酸钠0.1%，ph9.0的tris-hcl0.01mol/l缓冲体系。使用本发明的化学发光底物液，鉴于本发明提供的试剂配方及配制方案，配制时不必配置成传统的a液和b液，使用前将a液和b液等比例混合。本发明提供的方案成分简单，配制过程及操作简便，配制一种试剂即可，使用前也不需要与另外一种试剂再混合；低温冷藏，使用前恢复至室温。另外配方中的各试剂组分、原料均对人体无毒无害，对环境也无污染；适用于半自动化学发光仪，也适用于全自动化学发光检测系统。具体实施方式以下对本发明的实施举例进行说明：配制1000ml化学发光底物液，具体配方如下：二甲基甲酰胺2gtris-hcl0.01mol/lph9.0鲁米诺0.63mol/l过氧化氢2mol/l4-（咪唑-1-基）苯酚1mol/l苯甲酸钠1g先配制0.01mol/l的tris，浓hcl调节ph值至9.0，再称量二甲基甲酰胺2g配制二甲基甲酰胺有机溶剂溶解增强剂4-（咪唑-1-基）苯酚，之后依次加入其他组分；搅拌至各组分充分溶解，混合均匀，定容，即配制成本发明的化学发光底物液。实验步骤：（1）包被板准备：以ph7.4的pbs抗cea单抗包被液包被发光板，包被浓度为5ug/ml，包被量为150ul/孔，4℃包被12h，之后洗涤液洗板5次；封闭液封闭150ul/孔，室温封闭4-6h，甩干封闭液，然后将包被板在吸水纸上拍干，37℃烘干2h后备用。（2）抗cea单抗酶结合物制备：以碘酸钠法制备抗cea单抗-hrp酶结合物，酶标记物稀释液为10%小牛血清，0.02mol/ltris-hclph7.4的蛋白缓冲液，含防腐剂p-3000.1%。（3）校准品制备：配制0ng/ml、5ng/ml、10ng/ml、50ng/ml、100ng/ml、500ng/ml系列的cea校准品，校准品稀释液为10%牛血清白蛋白（bsa），0.01mol/ltris-hclph7.4的蛋白缓冲液，含防腐剂p-3000.1%，吐温200.1%。（4）cea校准品每孔加50ul，每个点做复孔，再加100ul酶结合物，37℃温浴1h，之后洗板液洗板5次，吸水纸上拍干残留液体。（5）每孔加入化学发光底物液100ul，避光反应5min后于化学发光仪检测其信号值。为了体现本发明所述的单组分化学发光底物液的优势，同时以进口的thermoscientificpiercea、b化学发光底物液和国产索莱宝a、b化学发光底物液为对照，进行灵敏度，测量范围，发光持续时间比较。加样设计如表一：表一试剂板条第1-2条板条第3-4条板条第5-6条校准品◆◆◆酶结合物◆◆◆thermoscientificpierce化学发光底物液◆索莱宝化学发光底物液◆本发明化学发光底物液 ◆检测结果如表二：表二校准品（ng/ml）thermoscientificpierce索莱宝本发明065811267252105988965100121052968401235123650260456160891243686100480654280123456987500208965512564772004563十分钟之后，对其信号值再次进行检测，结果如表三：表三校准品（ng/ml）thermoscientificpierce索莱宝本发明07121654762299658023983610508563562150253502406329545622658410046136514654844654850020658214002362086954综上所述，本发明涉及的单一组分化学发光底物液，配制简单，操作简便，使用前不需要额外混合其他物质，检测范围宽，线性好，灵敏度高；在使用过程中，能够保持良好的发光强度，稳定性好。此外，本发明提供的配方，原材料少，成本低，配制简便，对人员和环境均无毒无害。当前第1页12