一种参倍固肠胶囊中没食子酸含量测定方法与流程

本发明涉及药品成分检测技术领域，具体涉及一种参倍固肠胶囊中没食子酸含量测定方法。

背景技术：

参倍固肠胶囊是一种用于肝脾不和，泻痢腹痛，慢性非特异性溃疡性结肠炎的中成药，其成份主要包括有五倍子、肉豆蔻（煨）、诃子肉（煨）、乌梅、木香、苍术、茯苓、鹿角霜、红参等；其中五倍子和诃子肉中富含有没食子酸；没食子酸是一种有机酸，具有抗菌、抗病毒、抗肿瘤的作用；因此参倍固肠胶囊中，没食子酸的含量对药效起着较大的影响；目前虽然有各种检测植物中没食子酸含量的测定方法，但由于参倍固肠胶囊中的其他中药成份容易对没食子酸的检测造成较大的干扰，导致难以快速准确地测出参倍固肠胶囊中没食子酸的含量的问题。

技术实现要素：

本发明的目的在于提供一种参倍固肠胶囊中没食子酸含量测定方法，解决由因参倍固肠胶囊中的其他中药成份对没食子酸的检测造成较大的干扰，导致难以快速、准确地测出参倍固肠胶囊中没食子酸的含量的问题。

为解决上述的技术问题，本发明采用以下技术方案：一种参倍固肠胶囊中没食子酸含量测定方法，包括有以下步骤：

1）以甲醇溶液为溶剂制备对照品溶液：

2）取本品装量差异项下的内容物研细得到待测样；

3）以甲醇为溶剂制备供试品溶液；

4）采用高效液相色谱法测定没食子酸含量；

色谱检测条件为：hplc色谱柱为agilentc18，十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相为2%甲醇-乙腈-水-磷酸-三乙胺（3：97：0.1：0.1）；检测波长为220nm；进样量20ul；

进一步的，步骤1）中制备对照品溶液的具体操作为：

步骤s1：精密称取没食子酸对照品12.5mg，置于50ml容量瓶中，加50%甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，得到浓度为250ug/ml的中间溶液；

步骤s2：精密量取2ml中间溶液，置于25ml容量瓶中，加50%甲醇稀释至刻度，摇匀，即可得到浓度为20ug/ml的对照品溶液；

进一步的，步骤3）中制备供试品溶液的具体操作为：

步骤a1：精密称取0.2g待测样，置于50ml容量瓶中，加50%甲醇40ml，超声处理15min，放冷，加50%甲醇稀释至刻度，摇匀，过滤后得滤液；

步骤a2：精密量取1ml滤液，置于10ml容量瓶中，加50%甲醇稀释至刻度，摇匀，即可得到供试品；

进一步的，步骤a1中，超声赫兹为40khz；超声结束后放冷至20℃～30℃；

进一步的，步骤1）中色谱检测的柱温为20℃～40℃；

进一步的，步骤1）中色谱柱理论板数按没食子酸峰计算≥3000；

更进一步的技术方案是步骤1）中色谱检测的洗脱方式为等度洗脱。

与现有技术相比，本发明的有益效果是：

1、本发明能够在具有较多干扰成份的参倍固肠胶囊中准确地测定没食子酸的含量；

2、通过选择合适的检测条件，使得该hplc测定参倍固肠胶囊中没食子酸含量的分离度、准确性、重现性、稳定性等都满足标准要求；

3、加大了供试品溶液制备的中间转移量，操作更方便，准确度更高；

4、减少了对照品溶液与供试品溶液的进样量，有效防止色谱柱过载，峰型更好。

附图说明

图1为对照品溶液色谱图。

图2为供试品溶液色谱图。

图3为没食子酸标准曲线图。

具体实施方式

为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。

实施例1：一种参倍固肠胶囊中没食子酸含量测定方法，包括有以下步骤：

1）以50%甲醇溶液为溶剂制备对照品溶液；

2）取本品装量差异项下的内容物研细得到待测样；

3）以50%甲醇为溶剂制备供试品溶液；

4）采用高效液相色谱法测定对照品溶液和供试样品溶液中的没食子酸含量；

色谱检测条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相为2%甲醇-乙腈-水-磷酸-三乙胺（3：97：0.1：0.1）；检测波长为216nm；进样量10ul。

其中，选择2%甲醇-乙腈-水-磷酸-三乙胺（3：97：0.1：0.1）作为流动相，能够提高分离效率，减少了参倍固肠胶囊中其他中药成份对含量测定的干扰。

步骤1）中制备对照品溶液的具体操作为：

步骤1）中制备对照品溶液的具体操作为：取没食子酸对照品适量，精密称定，加50%甲醇使溶成1ml含0.02mg的溶液，即得对照品溶液。

甲醇来源为：美国天地进口，批号：ms1922-801；没食子酸对照品来源为：中国食品药品检定研究院，批号：110831-201204。

进一步的，步骤3）中制备供试品溶液的具体操作为：

步骤3）中制备供试品溶液的具体操作为：

步骤a1：精密称取0.2g待测样，置于100ml具塞锥形瓶中，加50%甲醇50ml，超声处理15min，放冷，再称定重量，用50%甲醇补足减失的重量，摇匀，弃初滤液，取续滤液；

步骤a2：精密量取5ml续滤液，置于50ml容量瓶中，加50%甲醇稀释至刻度，摇匀，即可得到供试品。

其中超声处理能够加速介质质点运动，空化作用，超声波的振动匀化使样品介质内各点受到的作用一致，使整个样品萃取更均匀。

超声波提取时不需要加热，避免了常规煎煮法、回流法长时间加热对有效成分的不良影响。超声波提取提高了药物有效成分的提取率,有利于资源的充分利用,提高了经济效益。溶剂用量少,节约了溶剂。超声波提取是一个物理过程,在整个浸提过程中无化学反应发生,不影响大多数药物有效成分的生理活性。提取物有效成分含量高,有利干进一步精制。

进一步的，步骤a1中，超声赫兹为50khz；超声结束后放冷至25℃～35℃。

进一步的，步骤1）中色谱检测的柱温为25℃～35℃。

进一步的，步骤1）中色谱柱理论板数按没食子酸峰计算≥2500。

更进一步的技术方案是步骤1）中色谱检测的洗脱方式为等度洗脱。

检测结果如图1和图2所示。其中，对照品溶液所测得谱图中的峰面积为3338.63452，峰高116.30012，峰宽0.4339；供试品溶液所测得谱图中的峰面积为3329.25610，峰高115.39370，峰宽0.4397；塔板数3509。

本方法验证结果如下：

（1）线性考察

精密吸取没食子酸对照品溶液（0.023797mg/ml）2、6、10、14、18、22μl进样，记录色谱，以峰面积为横坐标，以进样量（μg）为纵坐标作图，计算回归方程为：a=7543182.92c-5794.78(r=0.9999)，回归方程拟合过原点的直线方程为：a=7528876.953c；将一供试品溶液进样分析，所得峰面积分别代入上两式计算，相对偏差为0.29%，故可认为标准曲线过原点，回归方程截距为零。由此含量测定可采用外标一点法计算。在0.0476μg～0.5235μg之间线性关系良好。

表1没食子酸线性关系考察

（2）精密度试验

取对照品溶液0.023797mg/ml，重复进样6次，记录色谱，结果见表2及精密度图谱，rsd为0.19%，说明有良好的精密度。

表2精密度试验

（3）重复性试验

取一样品按正文所述制备6份供试品溶液，分别进样，记录色谱，计算，结果见表3，重复性图谱，rsd为0.58%，说明有良好的重复性。

表3重复性试验

（4）回收率试验

采用加样回收，精密吸取已测定含量的样品0.1g（61.82mg/g），再加入没食子酸对照品适量，按正文所述色谱条件测定，计算回收率，结果见表4，回收率图谱，没食子酸的回收率为100.35%，rsd为0.96%，说明本法有良好的回收率。

表4回收率试验

（5）专属性

取参倍固肠胶囊及阴性样品按供试品溶液制备方法制备样品溶液及阴性样品溶液，按上述色谱条件，分别取对照品溶液、样品溶液、阴性样品溶液液入液相色谱仪，样品溶液色谱在对照品溶液色谱相应位置有相应的色谱峰，且阴性无干扰。

（6）耐用性

样品提取溶剂的选择：取装量差异项下的内容物，取5份，每份约0.2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，分别精密加入20%甲醇、30%甲醇、40%甲醇、50%甲醇、60%甲醇各50ml，称定重量，超声处理15分钟，放冷，再称定重量，分别用20%甲醇、30%甲醇、40%甲醇、50%甲醇、60%甲醇补足减失重量，摇匀，滤过，分别精密吸取1ml置10ml量瓶中，加50%甲醇至刻度，摇匀，用0.45μm的微孔滤膜滤过，取滤液作为供试品溶液。分别取上述溶液各10μl注入液相色谱仪，计算，结果见表5，说明本品采用50%甲醇作为提取溶剂，含量提取更完全。

表5提取溶剂的选择

样品提取时间影响：取装量差异项下的内容物，研细，取3份，每份约0.2g，精密称定，分别置具塞锥形瓶中，精密加入50%甲醇50ml，分别超声提取10、15、30分钟，取出，放冷，用50%甲醇补足减失重量，摇匀，滤过，分别精密吸取1ml置10ml量瓶中，加50%甲醇至刻度，摇匀，用0.45μm的微孔滤膜滤过，取滤液作为供试品溶液。分别取10μl续滤液注入液相色谱仪，计算含量，结果见表7，超声提取15分钟就完全提取没食子酸，故选择提取时间为15分钟。

表6提取时间影响

样品稳定性试验：取参倍固肠胶囊，按供试品溶液制备方法制备，按上述色谱条件测定没食子酸峰面积，结果见表7。

表7样品稳定性试验

（7）十批含量测定：结果见表8。

根据10批样品测定值，暂定本品每粒含五倍子、诃子肉以没食子酸（c7h6o5）计，不少于14.0mg。

尽管这里参照本发明的多个解释性实施例对本发明进行了描述，但是，应该理解，本领域技术人员可以设计出很多其他的修改和实施方式，这些修改和实施方式将落在本申请公开的原则范围和精神之内。更具体地说，在本申请公开和权利要求的范围内，可以对主题组合布局的组成部件和/或布局进行多种变型和改进。除了对组成部件和/或布局进行的变形和改进外，对于本领域技术人员来说，其他的用途也将是明显的。