一种利用HPLC快速测定塞来昔布胶囊溶出度的方法与流程

本发明属于药物分析领域，特别涉及一种利用hplc快速测定塞来昔布胶囊溶出度的方法。

背景技术：

塞来昔布为cox-2抑制剂，是新一代非甾体类抗炎药，可以选择性的抑制cox-2，对cox-1无明显的抑制作用，具有显著抗炎解热镇痛的疗效，但不会发生消化道损伤，是一种优良的抗炎镇痛药物，作为bcsii类药物(低溶解性-高渗透性药物)，通过相关溶解度测试实验可以确定，塞来昔布在较高ph条件下的溶解性较好，因此选择ph12的缓冲盐作为溶出介质。

药物制剂质量标准中，溶出度作为一个评判产品质量是否符合规定的重要检测项，其样品的溶剂通常不是常规高效液相色谱法常用溶剂，对仪器和色谱柱的损伤均较大。

翻阅相关文献资料，塞来昔布胶囊溶出度检测方法采用的是常规八烷基硅烷键合硅胶为固定相的色谱柱，其ph耐受范围为2.0-8.0，但是，其溶出介质(样品的溶剂)为ph12缓冲盐，大大超出该色谱柱的ph耐受范围，造成色谱柱固定相大量、快速流失，导致一根色谱柱只能检测1-2批制剂产品的溶出度，极大的增加了检测成本。

另外，文献收载的方法塞来昔布峰的出峰时间为6分钟左右，运行时间为8分钟，极大的增大了检测周期。

为此，本发明提出一种利用hplc快速测定塞来昔布胶囊溶出度的方法。

技术实现要素：

为了解决现有技术存在的问题，本发明提供了一种利用hplc快速测定塞来昔布胶囊溶出度的方法，检测灵敏度高、专属性强、精密度高、准确性强、操作方便，且该方法大大提高了检测时效性，能够减少试剂的使用量，更节能环保，同时，样品前处理方法能够大大降低色谱柱的损坏率，降低检测成本。

为了实现上述目的，本发明是通过如下的技术方案来实现：一种利用hplc快速测定塞来昔布胶囊溶出度的方法，所述测定方法步骤如下：

步骤一：色谱条件；色谱柱以杂化硅胶为固定相，以有机相与缓冲液的混合溶剂为流动相等度洗脱，柱温25℃-35℃，流速为0.8-1.2ml/min，检测波长为252nm±5nm；

步骤二：对照品溶液的配制；取塞来昔布对照品约20mg，精密称定，置100ml量瓶中，加溶出介质适量，超声溶解并稀释至刻度，摇匀。(平行配置两份)；

步骤三：供试品溶液的配制；取本品6粒，照溶出度与释放度测定法第二法(中国药典2015年版四部通则)，以1000ml的1.0％十二烷基硫酸钠的0.04m磷酸三钠溶液为溶出介质，转速50rpm，依法操作，运行45分钟时，从每个溶出杯中抽取1.5ml的供试品溶液，经4.5μm的水系滤膜过滤后，取续滤液作为供试品溶液；

步骤四：样品前处理；抽取稀释剂1-3μl，抽取样品溶液2-6μl，抽取稀释剂1-3μl，完成进样。

作为本发明的一种优选实施方式，所述步骤一中流动相为有机相与缓冲液的混合溶剂等度洗脱，有机相比例为55％-70％，所述缓冲液选自三乙胺缓冲液，所述三乙胺缓冲液的浓度范围为0.1％-1％，优选0.5％，所述三乙胺缓冲液的ph值为6.0-8.0，所述流动相的流速为0.8-1.2ml/min。

作为本发明的一种优选实施方式，所述有机相选自甲醇或乙腈中的至少一种。

作为本发明的一种优选实施方式，所述步骤一中柱温优选30℃，检测波长优选252nm。

作为本发明的一种优选实施方式，所述步骤四中的稀释剂为醋酸缓冲液，所述醋酸缓冲液的浓度0.5％-1.5％，优选1.0％，所述醋酸缓冲液的ph值为6.5-7.5。

本发明的有益效果为：

本发明的一种利用hplc快速测定塞来昔布胶囊溶出度的方法检测灵敏度高、专属性强、精密度高、准确性强、操作方便，且该方法大大提高了检测时效性，能够减少试剂的使用量，更节能环保，同时，样品前处理方法能够大大降低色谱柱的损坏率，降低检测成本。

附图说明

图1为一种利用hplc快速测定塞来昔布胶囊溶出度的方法的步骤流程图；

图2为按照实施例1条件检测的空白溶液的hplc图；

图3为按照实施例1条件检测的第一针对照品溶液的hplc图；

图4为按照实施例1条件检测的最后一针对照品溶液的hplc图；

图5为按照实施例2条件检测的第一针对照品溶液的hplc图；

图6为按照实施例2条件检测的最后一针对照品溶液的hplc图；

图7为按照实施例3条件检测的第一针对照品溶液的hplc图；

图8为按照实施例3条件检测的最后一针对照品溶液的hplc图；

图9为按照对比实施例1条件检测的第一针对照品溶液的hplc图；

图10为按照对比实施例1条件检测的最后一针对照品溶液的hplc图；

具体实施方式

为使本发明实现的技术手段、创作特征、达成目的与功效易于明白了解，下面结合具体实施方式，进一步阐述本发明。

请参阅图1-10，本发明提供一种技术方案：一种利用hplc快速测定塞来昔布胶囊溶出度的方法；

实施例1

仪器：agilent1260高效液相色谱仪，紫外检测器

色谱柱：以杂化硅胶颗粒为固定相的色谱柱(250×4.6mm，5μm)

流动相：0.5％三乙胺缓冲液(ph7.0)-乙腈(35：65)

流速：1.0ml/min

波长：256nm

柱温：30℃

稀释剂：1.0％醋酸缓冲液

供试品溶液：取本品6粒，照溶出度与释放度测定法第二法(中国药典2015年版四部通则)，以1000ml的1.0％十二烷基硫酸钠的0.04m磷酸三钠溶液为溶出介质，转速50rpm，依法操作，运行45分钟时，从每个溶出杯中抽取1.5ml的供试品溶液，经4.5μm的水系滤膜过滤后，取续滤液作为供试品溶液。

对照品溶液：精密称取取塞来昔布对照品20.13mg、20.46mg，分别置100ml量瓶中，加溶出介质适量，超声溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液1和2。

样品溶液的前处理：抽取稀释剂1.5μl，抽取样品3μl，抽取稀释剂1.5μl，完成进样。

结论：该方法的回收率为99.7％，整批溶出度检测耗时112分钟。序列(整个序列共计23针)中第一针对照品溶液和结尾最后一针对照品溶液中主峰的理论塔板数分别为5903.90、5923.99，柱效无变化，证明该方法对色谱柱基本无损伤。

实施例2

仪器：agilent1260高效液相色谱仪，紫外检测器

色谱柱：以杂化硅胶颗粒为固定相的色谱柱(250×4.6mm，5μm)

流动相：0.5％三乙胺缓冲液(ph7.0)-乙腈(45：55)

流速：1.0ml/min

波长：256nm

柱温：30℃

稀释剂：1.0％醋酸缓冲液

供试品溶液：取本品6粒，照溶出度与释放度测定法第二法(中国药典2015年版四部通则)，以1000ml的1.0％十二烷基硫酸钠的0.04m磷酸三钠溶液为溶出介质，转速50rpm，依法操作，运行45分钟时，从每个溶出杯中抽取1.5ml的供试品溶液，经4.5μm的水系滤膜过滤后，取续滤液作为供试品溶液。

对照品溶液：精密称取取塞来昔布对照品20.13mg、20.46mg，分别置100ml量瓶中，加溶出介质适量，超声溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液1和2。

样品溶液的前处理：抽取稀释剂1.5μl，抽取样品3μl，抽取稀释剂1.5μl，完成进样。

结论：整批溶出度检测耗时144分钟。序列(整个序列共计23针)中第一针对照品溶液和结尾最后一针对照品溶液中主峰的理论塔板数分别为7596.15、7589.30，柱效无变化，证明该方法对色谱柱基本无损伤。

实施例3

仪器：agilent1260高效液相色谱仪，紫外检测器

色谱柱：以杂化硅胶颗粒为固定相的色谱柱(250×4.6mm，5μm)

流动相：0.5％三乙胺缓冲液(ph7.0)-乙腈(35：65)

流速：1.0ml/min

波长：256nm

柱温：30℃

稀释剂：1.2％醋酸缓冲液

供试品溶液：取本品6粒，照溶出度与释放度测定法第二法(中国药典2015年版四部通则)，以1000ml的1.0％十二烷基硫酸钠的0.04m磷酸三钠溶液为溶出介质，转速50rpm，依法操作，运行45分钟时，从每个溶出杯中抽取1.5ml的供试品溶液，经4.5μm的水系滤膜过滤后，取续滤液作为供试品溶液。

对照品溶液：精密称取塞来昔布对照品20.13mg、20.46mg，分别置100ml量瓶中，加溶出介质适量，超声溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液1和2。

样品溶液的前处理：抽取稀释剂1.5μl，抽取样品3μl，抽取稀释剂1.5μl，完成进样。

结论：整批溶出度检测耗时112分钟。序列(整个序列共计23针)中第一针对照品溶液和结尾最后一针对照品溶液中主峰的理论塔板数分别为5926.48、5900.20，柱效无变化，证明该方法对色谱柱基本无损伤。

对比实施例1

仪器：agilent1260高效液相色谱仪，紫外检测器

色谱柱：以八烷基硅烷键合硅胶为固定相的色谱柱(250×4.6mm，5μm)

流动相：0.5％三乙胺缓冲液(ph7.0±0.1)-乙腈(45：55)

流速：1.0ml/min

波长：256nm

柱温：30℃

供试品溶液：取本品6粒，照溶出度与释放度测定法第二法(中国药典2015年版四部通则)，以1000ml的1.0％十二烷基硫酸钠的0.04m磷酸三钠溶液为溶出介质，转速50rpm，依法操作，运行45分钟时，从每个溶出杯中抽取1.5ml的供试品溶液，经4.5μm的水系滤膜过滤后，取续滤液作为供试品溶液。

对照品溶液：精密称取取塞来昔布对照品20.13mg、20.46mg，分别置100ml量瓶中，加溶出介质适量，超声溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液1和2。

取上述待测溶液各10μl，注如液相色谱仪色谱图见附图9-10。

结论：整批溶出度检测耗时160分钟。经测定供试品溶液经过色谱柱时色谱柱内环境ph为11.5，而八烷基硅烷键合硅胶为固定相的色谱柱耐受ph范围是2-8，强碱条件对硅胶基质的固定相有溶解作用，造成色谱柱固定相快速流失，从序列中第一针对照品溶液和结尾最后一针对照品溶液中主峰的峰形(整个序列共计23针)，可以明显看到。

以上显示和描述了本发明的基本原理和主要特征和本发明的优点，对于本领域技术人员而言，显然本发明不限于上述示范性实施例的细节，而且在不背离本发明的精神或基本特征的情况下，能够以其他的具体形式实现本发明。因此，无论从哪一点来看，均应将实施例看作是示范性的，而且是非限制性的，本发明的范围由所附权利要求而不是上述说明限定，因此旨在将落在权利要求的等同要件的含义和范围内的所有变化囊括在本发明内。不应将权利要求中的任何附图标记视为限制所涉及的权利要求。

此外，应当理解，虽然本说明书按照实施方式加以描述，但并非每个实施方式仅包含一个独立的技术方案，说明书的这种叙述方式仅仅是为清楚起见，本领域技术人员应当将说明书作为一个整体，各实施例中的技术方案也可以经适当组合，形成本领域技术人员可以理解的其他实施方式。