本发明涉及水体污染检测技术领域，尤其是涉及一种三刺鱼cyp1家族基因在制备水体污染检测生物标记物中的应用、检测生物标记物及其检测方法。
背景技术：
近年来，随着工农业领域的迅猛发展，水体污染的状况变得越来越严峻。水体的安全直接关系着人民的生活健康和水产品的生产安全，因此，对水体进行污染物安全检测具有重要的意义。然而，水体中的污染物各有不同，有的为单一污染物，也有的为多种污染物的混合污染。目前的水体检测方法还大多局限于常规的化学检测手段，这类的化学检测手段往往只能对单一的或部分的有毒有害物质进行检测，其检测范围有限。但是由于现有化学污染物成分的复杂性，现有的常规手段存在漏检某类污染物的可能性，存在着较高的漏检风险。
利用生物体的生物学效应对水体进行检测，由于能够更为直观的得到水体的污染程度，近些年越来越受到人们的重视。因此，研究开发出一种利用生物体的特定生物标记物对水体污染进行检测的方法，对不同类型污染物所产生的生物效应进行归纳总结，进而为不同污染进行早期评价提供基础理论依据，变得十分必要和迫切。
有鉴于此，特提出本发明。
技术实现要素：
本发明的第一目的在于提供一种三刺鱼cyp1家族基因在制备水体污染检测生物标记物中的应用，该应用通过将三刺鱼cyp1家族基因作为生物标记物对水体污染进行检测，可以更为直观的得到水体污染状况，能够有效缓解现有的常规化学检测手段往往只能对单一的或部分的有毒有害物质进行检测，可能存在漏检某类污染物质的可能性的问题。
本发明的第二目的在于提供一种水体污染检测生物标记物，所述水体污染检测生物标记物包括三刺鱼cyp1家族基因。
本发明的第三目的在于提供一种水体污染检测方法，所述检测方法的检测指标包括上述水体污染检测生物标记物。
本发明提供的三刺鱼cyp1家族基因在制备水体污染检测生物标记物中的应用。
本发明提供的一种水体污染检测生物标记物，所述水体污染检测生物标记物包括三刺鱼cyp1家族基因；
优选地，所述三刺鱼cyp1家族基因包括三刺鱼cyp1a，三刺鱼cyp1b1、三刺鱼cyp1c1和三刺鱼cyp1c2基因中的至少一种。
进一步的，所述水体污染检测生物标记物为三刺鱼cyp1a，三刺鱼cyp1b1、三刺鱼cyp1c1和三刺鱼cyp1c2基因的组合。
本发明提供的一种水体污染检测方法，所述检测方法的检测指标包括上述水体污染检测生物标记物。
进一步的，所述水体污染检测的污染物为有机污染物。
更进一步的，所述有机污染物包括多环芳烃、多氯联苯和二噁英中的至少一种。
进一步的，所述检测方法包括以下步骤：
(a)、将三刺鱼作为水体污染检测的生物学样本进行培养；
(b)、利用分子生物学的方法对步骤(a)培养后的三刺鱼中上述水体污染检测生物标记物的相对表达含量进行检测；
所述水体污染检测生物标记物包括三刺鱼cyp1a，三刺鱼cyp1b1、三刺鱼cyp1c1和三刺鱼cyp1c2基因中的至少一种；
(c)、通过步骤(b)三刺鱼cyp1a，三刺鱼cyp1b1、三刺鱼cyp1c1和三刺鱼cyp1c2基因相对表达含量的差异，对水体进行污染检测分析；
优选地，所述步骤(a)培养在有机污染物胁迫的条件下进行。
更进一步的，所述步骤(b)对培养后三刺鱼进行检测的检测方法包括以下步骤：
(ⅰ)、将步骤(a)培养完成后的三刺鱼进行总rna提取，随后以总rna为模板转录合成首链cdna；
(ⅱ)、以首链cdna为模板，利用三刺鱼cyp1a、三刺鱼cyp1b1、三刺鱼cyp1c1和三刺鱼cyp1c2的特异性引物和内参引物进行荧光pcr扩增反应，得到三刺鱼cyp1a、三刺鱼cyp1b1、三刺鱼cyp1c1和三刺鱼cyp1c2的相对表达含量。
进一步的，所述步骤(ⅱ)中三刺鱼cyp1a的特异性引物如seqidno.01、02所示：
seqidno.01：5’-gtcagacgagaagattgtgggaa-3’；
seqidno.02：5’-ccactttgtccttcagctcttgat-3’；
优选地，所述步骤(ⅱ)中三刺鱼cyp1b1的特异性引物序列如seqidno.03、04所示：
seqidno.03：5’-ggaccaactgagagacaaatc-3’；
seqidno.04：5’-tgcatctcggggaacttgac-3’；
优选地，所述步骤(ⅱ)中三刺鱼cyp1c1的特异性引物序列如seqidno.05、06所示：
seqidno.05：5’-atggagctggtgcaggtatt-3’；
seqidno.06：5’-aactcctggtcttcgtgtgc-3’；
优选地，所述步骤(ⅱ)中三刺鱼cyp1c2的特异性引物序列如seqidno.07、08所示：
seqidno.07：5’-ctggcagcttggtagatgtg-3’；
seqidno.08：5’-gctcttccaccttgttctgg-3’；
优选地，所述步骤(ⅱ)中内参基因为三刺鱼β-actin基因，其内参引物序列如seqno.09、10所示：
seqidno.09：5’-acatcagggagtgatggtgg-3’；
seqidno.10：5’-caggatacctctcttgctctg-3’。
进一步的，所述步骤(c)对水体进行污染检测分析的方法为：
当水体出现多环芳烃污染时，三刺鱼cyp1a和cyp1b1的相对表达含量同时升高；
当水体出现多氯联苯污染时，三刺鱼cyp1a和cyp1c1的相对表达含量同时升高；
当水体出现二噁英污染时，三刺鱼cyp1a、cyp1b1、cyp1c1和cyp1c2的相对表达含量均同时升高。
与现有技术相比，本发明的有益效果为：
本发明提供的三刺鱼cyp1家族基因在制备水体污染检测生物标记物中的应用，该应用利用三刺鱼的生物学效应，通过将三刺鱼cyp1家族基因作为生物标记物对水体污染进行检测，可以更为直观的得到水体污染状况，能够有效缓解现有的常规化学检测手段往往只能对单一的或部分的有毒有害物质进行检测，可能存在漏检某类污染物质的可能性的问题。
本发明提供的水体污染检测生物标记物，所述水体污染检测生物标记物包括三刺鱼cyp1家族基因。经研究发现，三刺鱼cyp1家族基因的表达活性与水环境污染程度的相关性，并且根据不同基因表达模式及其生物效应对污染物种类进行评价具有较强的可行性。
本发明提供的水体污染检测方法，所述检测方法的检测指标包括上述水体污染检测生物标记物。该方法通过利用上述水体污染检测生物标记物在水体中的相对表达含量的差异，作为生物标记物对水体进行污染分析检测。通过三刺鱼的生物学效应，能够更为直观的得到水体污染状况。
具体实施方式
下面将结合实施例对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
根据本发明的一个方面，三刺鱼cyp1家族基因在制备水体污染检测生物标记物中的应用。
本发明提供的三刺鱼cyp1家族基因在制备水体污染检测生物标记物中的应用，该应用利用三刺鱼的生物学效应，通过将三刺鱼cyp1家族基因作为生物标记物对水体污染进行检测，可以更为直观的得到水体污染状况，能够有效缓解现有的常规化学检测手段往往只能对单一的或部分的有毒有害物质进行检测，可能存在漏检某类污染物质的可能性的问题。
根据本发明的一个方面，一种水体污染检测生物标记物，所述水体污染检测生物标记物包括三刺鱼cyp1家族基因；
本发明提供的水体污染检测生物标记物，所述水体污染检测生物标记物包括三刺鱼cyp1家族基因。三刺鱼cyp1家族基因是细胞色素p450(cytochromep450，cyp)家族中的重要成员，主要和芳基烃受体(ahr)调控的信号途径有关。在鱼类cyp1家族当中，除了cyp1a之外，还有其它cyp1亚家族成员，包括cyp1b、cyp1c。目前，鱼类cyp1在水环境污染及其效应监测中的应用研究还处于起步阶段，经研究发现，三刺鱼cyp1家族基因的表达活性与水环境污染程度的相关性，并且根据不同基因表达模式及其生物效应对污染物种类进行评价具有较强的可行性。
同时，本申请所采用的三刺鱼是一种实验模式鱼类，其广泛分布在欧洲、亚洲和美洲北部的小溪、河流、河口和海洋沿岸地区，其在我国华北地区也有广泛的分布。由于其地理分布、健壮性、对雄激素和雌激素的敏感性，三刺鱼是一种有吸引力的环境监测活性污染物的模型。
在上述优选实施方式中，所述三刺鱼cyp1家族基因包括三刺鱼cyp1a，三刺鱼cyp1b1、三刺鱼cyp1c1和三刺鱼cyp1c2基因中的至少一种。
其中，三刺鱼cyp1a的蛋白序列如seqno.11所示；
三刺鱼cyp1b1的蛋白序列如seqno.12所示；
三刺鱼cyp1c1的蛋白序列如seqno.13所示；
三刺鱼cyp1c1的蛋白序列如seqno.14所示。
在本发明的一种优选实施方式中，所述水体污染检测生物标记物为三刺鱼cyp1a，三刺鱼cyp1b1、三刺鱼cyp1c1和三刺鱼cyp1c2基因的组合。
作为一种优选的实施方式，上述水体污染检测生物标记物为三刺鱼cyp1a，cyp1b1、cyp1c1和cyp1c2基因的组合，通过对三刺鱼cyp1家族基因上述各基因的相对表达含量的差异，即通过三刺鱼的生物学效应可以对水体污染物种类进行相应的分析和预估。
根据本发明的一个方面，一种水体污染检测方法，所述检测方法的检测指标包括上述水体污染检测生物标记物。
本发明提供的水体污染检测方法，所述检测方法的检测指标包括上述水体污染检测生物标记物。该方法通过利用上述水体污染检测生物标记物在水体中的相对表达含量的差异，作为生物标记物对水体进行污染分析检测。通过三刺鱼的生物学效应，能够更为直观的得到水体污染状况。
在本发明的一种优选实施方式中，所述水体污染检测的污染物为有机污染物。
在上述优选实施方式中，所述有机污染物包括多环芳烃、多氯联苯和二噁英中的至少一种。
在本发明的一种优选实施方式中，所述检测方法包括以下步骤：
(a)、将三刺鱼作为水体污染检测的生物学样本进行培养；
(b)、利用分子生物学的方法对步骤(a)培养后的三刺鱼中上述水体污染检测生物标记物的相对表达含量进行检测；
所述水体污染检测生物标记物包括三刺鱼cyp1a，三刺鱼cyp1b1、三刺鱼cyp1c1和三刺鱼cyp1c2基因中的至少一种；
(c)、通过步骤(b)三刺鱼cyp1a，三刺鱼cyp1b1、三刺鱼cyp1c1和三刺鱼cyp1c2基因相对表达含量的差异，对水体进行污染检测分析；
在上述优选实施方式中，所述步骤(a)培养在有机污染物胁迫的条件下进行。
在上述优选实施方式中，所述步骤(b)对培养后三刺鱼进行检测的检测方法包括以下步骤：
(ⅰ)、将步骤(a)培养完成后的三刺鱼进行总rna提取，随后以总rna为模板转录合成首链cdna；
(ⅱ)、以首链cdna为模板，利用三刺鱼cyp1a、三刺鱼cyp1b1、三刺鱼cyp1c1和三刺鱼cyp1c2的特异性引物和内参引物进行荧光pcr扩增反应，得到三刺鱼cyp1a、三刺鱼cyp1b1、三刺鱼cyp1c1和三刺鱼cyp1c2的相对表达含量。
在上述优选实施方式中，所述步骤(ⅰ)三刺鱼的总rna来源于鱼的鱼鳃。鱼鳃作为鱼的水体过滤装置，也是水体污染物积蓄的重要器官，由于其长期与水体接触，是水体污染检测的理想生物指标材料。
在本发明的一种优选实施方式中，所述步骤(ⅱ)中三刺鱼cyp1a的特异性引物如seqidno.01、02所示：
seqidno.01：5’-gtcagacgagaagattgtgggaa-3’；
seqidno.02：5’-ccactttgtccttcagctcttgat-3’；
优选地，所述步骤(ⅱ)中三刺鱼cyp1b1的特异性引物序列如seqidno.03、04所示：
seqidno.03：5’-ggaccaactgagagacaaatc-3’；
seqidno.04：5’-tgcatctcggggaacttgac-3’；
优选地，所述步骤(ⅱ)中三刺鱼cyp1c1的特异性引物序列如seqidno.05、06所示：
seqidno.05：5’-atggagctggtgcaggtatt-3’；
seqidno.06：5’-aactcctggtcttcgtgtgc-3’；
优选地，所述步骤(ⅱ)中三刺鱼cyp1c2的特异性引物序列如seqidno.07、08所示：
seqidno.07：5’-ctggcagcttggtagatgtg-3’；
seqidno.08：5’-gctcttccaccttgttctgg-3’；
优选地，所述步骤(ⅱ)中内参基因为三刺鱼β-actin基因，其内参引物序列如seqno.09、10所示：
seqidno.09：5’-acatcagggagtgatggtgg-3’；
seqidno.10：5’-caggatacctctcttgctctg-3’。
作为一种优选的实施方式，上述三刺鱼cyp1家族基因的特异性引物序列能够快速的扩增出首链cdna中的相关cyp1家族基因，得到三刺鱼cyp1中各基因的相对表达含量；三刺鱼β-actin基因作为内参基因，用来确定检测过程是否有误。
在本发明的一种优选实施方式中，所述步骤(c)对水体进行污染检测分析的方法为：
当水体出现多环芳烃污染时，三刺鱼cyp1a和cyp1b1的表达较为敏感，相对表达含量倾向性升高明显；
当水体出现多氯联苯污染时，三刺鱼cyp1a和cyp1c1的表达较为敏感，相对表达含量倾向性升高明显；
当水体出现二噁英污染时，三刺鱼cyp1a、cyp1b1、cyp1c1和cyp1c2均表达较为敏感，相对表达含量倾向性升高明显，特别是cyp1c2相对于多环芳烃或多氯联苯污染，升高明显。
下面将结合实施例对本发明的技术方案进行进一步地说明。
实施例1(以低浓度苯并芘溶液为例，进行多环芳烃污染检测实验):
(1)、样本选择：选择平均体长55±15mm，平均体重1.3±0.3g的三刺鱼，用曝气48h后的自来水驯养14d(驯养水温为(20±1)℃，光暗比为12h:12h，溶解氧(do)保持在7.0mg/l以上)，驯养期间三刺鱼死亡率小于5％方可用于实验。驯养期间每天喂食一次，及时清除粪便及食物残渣。为了防止食物对实验的影响，实验前24h停止喂食，实验期间不喂食。
实验过程：设置a～h，八个实验组，各试验组苯并芘浓度如下：
每组设置3个平行样。每组中随机投入24条三刺鱼，实验时间为48h，采用静态置换法每12h定时置换二分之一的实验用水。
(2)、合成cdna：培养结束后立即处死实验用鱼并对鱼鳃进行活性分析，使用总rna脂肪和纤维组织试剂盒与dnase酶(购自美国伯乐公司)提取总rna，提取产物经紫外分光光度计、微量核酸蛋白测定仪，nd1000检测，260/280与260/230吸光值比率在2～2.1范围内.经1％的琼脂糖凝胶电泳后(tae缓冲液edta，购自sigma公司)，显示总rna样品没被降解，完整性好.严格按cdna合成试剂盒(iscriptcdna合成试剂盒，购自biorad伯乐公司)操作规范进行操作合成cdna。
(3)、pcr扩增：以上述得到的cdna为模板，分别利用如下三刺鱼cyp1家族各基因的特异性引物和内参引物序列进行荧光pcr扩增反应；
检测三刺鱼cyp1a基因的引物序列如seqno.01、02所示：
seqno.01：5’-gtcagacgagaagattgtgggaa-3’；
seqno.02：5’-ccactttgtccttcagctcttgat-3’；
检测三刺鱼cyp1b1基因的引物序列如seqno.03、04所示：
seqno.03：5’-ggaccaactgagagacaaatc-3’；
seqno.04：5’-tgcatctcggggaacttgac-3’；
检测三刺鱼cyp1c1基因的引物序列如seqno.05、06所示：
seqno.05：5’-atggagctggtgcaggtatt-3’；
seqno.06：5’-aactcctggtcttcgtgtgc-3’；
检测三刺鱼cyp1c2基因的引物序列如seqno.07、08所示：
seqno.07：5’-ctggcagcttggtagatgtg-3’；
seqno.08：5’-gctcttccaccttgttctgg-3’；
内参基因为三刺鱼β-actin基因，其内参引物序列如seqno.09、10所示：
seqno.09：5’-acatcagggagtgatggtgg-3’；
seqno.10：5’-caggatacctctcttgctctg-3’。
cdna定量分析操作过程严格按规范进行，具体过程如下:cdna样品同时进行二孔平行分析，程序首先为95℃10min，然后进入95℃15s，62℃15s的35个循环反应，最后溶解曲线分析阶段(温度从55～95℃，从低至高，温度每5s提高1℃)。
使用eδδct法分析计算三刺鱼cyp1家族各基因的相对mrna的表达表达量，具体结果如下：
由上述实验可知，受水体中多环芳烃模式化合物苯并芘的污染胁迫，三刺鱼的生理活性发生变化，通过三刺鱼cyp1家族基因的相对表达含量的检测发现，随着苯并芘溶液浓度的升高，三刺鱼cyp1a和cyp1b1的相对表达含量出现了明显的趋向性变化，e-δδct值明显升高，具有正相关性，而cyp1c1和cyp1c2的表达含量未有明显变化。
实施例2(以低浓度pcb126溶液为例，进行多氯联苯污染检测实验):
注：所述pcb126为3,3'，4,4'，5-五氯联苯。
(1)、样本选择：本实施例“样本选择”的方法同实施例1；
实验过程：设置i～p，八个实验组，各试验组pcb126浓度如下：
每组设置3个平行样。每组中随机投入24条三刺鱼，实验时间为48h，采用静态置换法每12h定时置换二分之一的实验用水。
(2)、合成cdna：本实施例“合成cdna”的方法同实施例1。
(3)、pcr扩增：本实施例“pcr扩增”的引物和方法同实施例1；
使用eδδct法分析计算三刺鱼cyp1家族各基因的相对mrna的表达表达量，具体结果如下：
由上述实验可知，受水体中多氯联苯模式化合物pcb126的污染胁迫，三刺鱼的生理活性发生变化，通过三刺鱼cyp1家族基因的相对表达含量的检测发现，随着pcb126溶液浓度的升高，三刺鱼cyp1a和cyp1c1的相对表达含量出现了明显的趋向性变化，e-δδct值明显升高，具有正相关性，而cyp1b1和cyp1c2的表达含量未有明显变化。
实施例3(以低浓度tcdd溶液为例，进行二噁英污染检测实验):
注：所述tcdd为2,3,7,8-四氯苯并二噁英。
(1)、样本选择：本实施例“样本选择”的方法同实施例1；
实验过程：设置q～s，八个实验组，各试验组tcdd浓度如下：
每组设置3个平行样。每组中随机投入24条三刺鱼，实验时间为48h，采用静态置换法每12h定时置换二分之一的实验用水。
(2)、合成cdna：本实施例“合成cdna”的方法同实施例1。
(3)、pcr扩增：本实施例“pcr扩增”的引物和方法同实施例1；
使用eδδct法分析计算三刺鱼cyp1家族各基因的相对mrna的表达表达量，具体结果如下：
由上述实验可知，受水体中二噁英模式化合物tcdd的污染胁迫，三刺鱼的生理活性发生变化，通过三刺鱼cyp1家族基因的相对表达含量的检测发现，随着tcdd溶液浓度的升高，三刺鱼cyp1a、cyp1b1、cyp1c1和cyp1c2的相对表达含量均出现了明显的趋向性变化，e-δδct值明显升高，具有正相关性，应引起环保监测部门的高度重视。
应用例1
2019年5月中旬，选择平均体长56±17mm，平均体重1.2±0.2g的三刺鱼，用曝气48h后的自来水驯养14d，(驯养水温为(20±1)℃，光暗比为12h:12h，溶解氧(do)保持在7.0mg/l以上)。随后采用吊笼培养的方式将驯化后的三刺鱼，分别放置于天津境内3个不同位置；
所述吊笼的规格为(55cm×55cm×55cm)中实验动物(n＝10)；
所述位置分别为：
1、海河干流葛沽(西外环高速桥下处，n38.991613，e117.560305)；
2、海河入海口处(于家堡与海河交汇处，n38.990570，e117.694044)；
3、马厂减河桥下(467县道与马厂减河交汇处交汇处，n38.978878，e117.554119)。
实验周期为1天，暴露实验后，立即处死实验用鱼，取出完整鳃弓用滤纸擦净表面血污后放入rna稳定溶液rnalater(购于ambion公司)中.回到实验室后，将样品置于4℃冰箱保存.实验期间，全部实验动物未发现明显不适或死亡现象.暂存实验室三刺鱼(用曝气48h后的自来水培养)设定为实验对照组。
采用与实施例1步骤(2)相同的方法将上述鳃弓提取总rna后，以总rna为模板转录合成首链cdna；
采用与实施例1步骤(3)相同的引物和方法，以上述cdna为模板进行荧光pcr扩增反应，随后使用eδδct法分析计算三刺鱼cyp1家族各基因的相对mrna的表达表达量，具体结果如下：
由上述实验可知，通过对三刺鱼cyp1家族基因在上述三个实验位置的相对表达含量的检测发现，该三个位点上的三刺鱼cyp1家族各基因的表达趋向并不相同，其中：
在海河入海口处位点的检测时，cyp1a和cyp1c1的相对表达含量升高，cyp1b1和cyp1c2的表达含量虽有升高但并未有明显变化，高度怀疑存在多环芳烃类污染；
在马厂碱河桥下位点的检测时，cyp1a和cyp1b1的相对表达含量升高，cyp1c1和cyp1c2的表达含量未有明显变化，说明此处的污染物应以多氯联苯类为主；
特别应该注意的是，在海河干流葛沽位点的检测时，cyp1a、cyp1b1、cyp1c1均出现了明显的升高，说明此处的污染物成分较为复杂，可能存在多环芳烃和多氯联苯混合污染的问题，同时，cyp1c2的表达含量虽未达到明显升高的程度，但其表达量也有所增加，应引起高度的重视，建议进行二噁英相关的检测分析。
综上所述，本发明检测方法通过利用鱼的生物学效应，将鱼cyp1家族基因作为生物标记物对水体污染进行检测，可以更为直观的得到水体污染状况，能够有效缓解现有的常规化学检测手段往往只能对单一的或部分的有毒有害物质进行检测，可能存在漏检某类污染物质的可能性的问题，同时为对不同污染物进行早期评价提供了基础理论依据。
最后应说明的是：以上各实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述各实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分或者全部技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的范围。
sequencelisting
<110>天津市生态环境监测中心
<120>三刺鱼cyp1家族基因在制备水体污染检测生物标记物中的应用及其检测方法
<130>
<160>14
<170>patentinversion3.5
<210>1
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<213>三刺鱼cyp1a的特异性引物
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<213>三刺鱼cyp1a的特异性引物
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<212>dna
<213>三刺鱼cyp1b1的特异性引物序列
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ggaccaactgagagacaaatc21
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<213>三刺鱼cyp1b1的特异性引物序列
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tgcatctcggggaacttgac20
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<211>20
<212>dna
<213>三刺鱼cyp1c1的特异性引物序列
<400>5
atggagctggtgcaggtatt20
<210>6
<211>20
<212>dna
<213>三刺鱼cyp1c1的特异性引物序列
<400>6
aactcctggtcttcgtgtgc20
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<213>三刺鱼cyp1c2的特异性引物序列
<400>7
ctggcagcttggtagatgtg20
<210>8
<211>20
<212>dna
<213>三刺鱼cyp1c2的特异性引物序列
<400>8
gctcttccaccttgttctgg20
<210>9
<211>20
<212>dna
<213>三刺鱼β-actin基因
<400>9
acatcagggagtgatggtgg20
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<213>三刺鱼β-actin基因
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<212>prt
<213>三刺鱼cyp1a的蛋白序列
<400>11
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