专利名称：酶免疫试剂盒的制作方法
技术领域：
本发明涉及医学检测技术领域，尤其涉及孕妇产前病原体IgM抗体测试技术领域。
为了搞好计划生育工作实行优生优育，在妇女怀孕后一般要检测TORCH(弓形体、风疹病毒、巨细胞病毒、单纯疱疹病毒)特异性IgM抗体。目前，国际上用间接酶免疫吸附试验来检测TORCH-IgM的诊断试剂盒有美国Maxim生物技术公司、HOPE公司、加拿大Microbix公司的产品，上述这些试剂盒，都只能在不同的板条孔中分别检测TOX、RV、CMV、HSV四种病原体的IgM，以上方法有三个共同的缺点，一是IgM型类风湿因子(IgM-RF)的干扰作用，它本质是抗自身IgG的IgM，抗原与其特异性的IgG形成复合物结合IgM-RF引起假阳性反应；二是特异IgG能竞争性地占有特异性IgG能竞争性地有特性IgM与抗原的结合部位产生假阴性反应；三是检测成本高，每个被检者每次得花160元左右。
本发明的目的在于，提供一种克服上述缺陷的试剂盒，检测时，可在板条每个孔中同时检出TOX、RV、CMV、HSV四种病原体的IgM，易于TORCH-IgM合检初筛，简化了操作，节约了成本，使用方便，效果好。
本发明的技术方案是这样实现的本发明包括盒体，设在盒体内的多孔板条和设在盒体内的用液，在多孔板条的每孔内，由包被液包被能引起胎儿先天性畸形的TORCH抗原，来检测孕妇血TORCH-IgM抗体，包被液和其他用液所含成份分别为(1)包被液含有碳酸氢钠、碳酸钠、尿素、盐酸胍和双蒸水，(2)其他用液包含洗涤液、标本稀释液、封闭液、底物稀释液、酶底物液的配制和抗人IgM酶联物，其中(a)洗涤液内含有氯化钠、磷酸二氢钾、磷酸氢二钠、双蒸水和吐温-20，(b)封闭液内含氯化钠、磷酸二氢钾、磷酸氢二纳、吐温-20、羊血清和双蒸水，(c)标本稀释液内含氯化钠、磷酸二氢钾、磷酸氨二钠、吐温-20、羊血清、葡萄球菌A蛋白、甘氨酸和双蒸水，(d)底物稀释液含有柠檬酸、柠檬酸三钠和双蒸水，(e)酶底物液内含3，3＇5，5＇-四甲基联苯胺、二甲亚砜、底物稀释液、过氧化脲，(f)抗人IgM酶联物，辣根过氧化物酶与纯化的抗人IgM单克隆抗体相联，包被液及用液成份含量分别为(1)1000ml包被液含量碳酸氢钠2．93g碳酸钠 1．59g尿素0．06-0．60g盐酸胍 0．09-0．90g双蒸水 1000mlTOX抗原、RV抗原、CMV抗原和HSV抗原各10-5000ug(2)1000ml洗涤液的含量
氯化钠8．7g磷酸二氢钾0．2g磷酸氢二钠2．33g吐温-20 1-10ml双蒸水990-999ml(3)1000ml封闭液的含量羊血清5-300ml洗涤液700-995ml(4)1000ml标本稀释液含量葡萄球菌A蛋白 5-20mg甘氨酸0．1-5g封闭液1000ml(5)1000ml底物稀释液配制如下柠檬酸9-13g柠檬酸三钠10-15g双蒸水1000ml(6)酶底物液3，3＇，5，5＇-四甲基联苯胺 200mg二甲亚砜 200ml过氧化脲 250ml底物稀释液 800ml包被液包被板条的方法是将上述用液各自经混合备用，用包被液稀释TORCH抗原，使终浓度分别为弓形体抗原、风疹病毒抗原、巨细胞病毒抗原、单纯疱疹病毒-1型抗原各10-5000ug／1000ml，将TORCH抗原混悬液加入多孔反应板的孔内(100Ul／孔)置于37℃温箱内2小时后，然后在4℃下6-12小时，甩掉包被液，用洗涤液清洗后，加封闭液，110ul／孔，再置于4℃条件下6-12小时，甩去封闭液，用洗涤液、双蒸水清洗，叩尽板条孔中的水，20-28℃晾干。
本发明的优点是1、采用这一技术可在同一孔里同时检出TOX、RV、CMV、HSV四种病原体的IgM，易于合检初筛，简化了操作，检测人员的工作量可减少3／4，节约了成本1／2，使用方便。
2、减少了非特异性。在稀释液中加入0．5-2mg％葡萄球菌A蛋白和0．01-0．5％甘氨酸37℃20分钟处理被检血清较好地克服了背景技术的第一、二个缺点。在封闭液中加入浓度为0．5-30％的羊血清，进一步降低了试验的非特异反应。
3、增加了固相载体吸附性。①由于用尿素处理蛋白质，使蛋白质部分变性后再包被酶标板；②又由于用盐酸胍在包被前处理病毒颗粒抗原，能将较大颗粒裂解为较小的亚单位。所以增加了固相载体吸附量。
4、提高了酶免诊断方法敏感性。①由于使用高亲和力的酶标抗人IgM单克隆抗体取代酶标抗人IgM多克隆抗体。②又由于选择更理想的底物，3，3＇，5，5＇-四甲基联苯胺是酶免技术中过氧化物酶的一种新的生色底物，其优点是敏感性高，另外还有产生的有色产物稳定、本底反应低、无致癌性等。还由于临用前用过氧化脲-柠檬酸缓冲液稀释，不仅提高了酶免诊断方法敏感性，还提高了该缓冲液的稳定性。
介绍实施例
本发明包括盒体、设在盒体内的多孔板条和设在盒体内的用液，在多孔板条的每孔内，包被能引起胎儿先天性畸形的TORCH抗原，来检测孕妇血TORCH-IgM抗体，将包被液和其他用液配置混合备用，先用包被液(0．05mol／L，PH9．6碳酸缓冲液的基础上加0．003mol／L尿素和0．003mol／L盐酸胍)稀释TORCH抗原，使终浓度分别为TOX抗原10ug／100ml、RV抗原170ug／100ml、CMV抗原110ug／100ml、HSV-1抗原110ug／100ml。将此TORCH抗原混悬液置37℃2小时后包被板条，100ul／孔，置入4℃冰箱6-12小时后甩掉包被液，用洗液洗1次后，用封闭液封闭，110ul／孔，置4℃冰箱6-12小时。甩去封闭液后，用洗液和双蒸水各洗1次，叩尽板条孔中的水，20-28℃晾干，装入塑料袋，并放入适量变色硅胶密封，置入-20℃冰箱备用。
权利要求
1.一种酶免疫试剂盒，它包括盒体、设在盒体内的多孔板条和设在盒体内的用液，其特征在于，在多孔板条的每孔内，由包被液包被能引起胎儿先天性畸形的TORCH抗原，检测孕妇血TORCH-IgM抗体，包被液和其他用液所含成份为(1)包被液含碳酸氢钠、碳酸钠、尿素、盐酸胍和双蒸水，(2)其他用液包含洗涤液、封闭液、标本稀释液、底物稀释液、酶底物的配制和抗人IgM酶联物，其中(a)洗涤液内含有氯化钠、磷酸二氢钾、磷酸氢二钠、吐温-20、双蒸水，(b)封闭液内含有氯化钠、磷酸二氢钾、磷酸氢二钠、吐温-20、羊血清和双蒸水，(c)标本稀释液内含氯化钠、磷酸二氢钾、磷酸氢二钠、吐温-20、羊血清、葡萄球菌A蛋白、甘氨酸和双蒸水，(d)底物稀释液含有柠檬酸、柠檬酸三钠和双蒸水，(e)酶底物液含有3，3＇，5，5＇-四甲基联苯胺、二甲亚砜底物稀释液、过氧化脲，(f)抗人IgM酶联物，辣根过氧化物酶与纯化的抗人IgM单克隆抗体相联，1000ml包被液及各用液的成份含量分别为(1)包被液含量碳酸氢钠2．93g碳酸钠 1．59g尿素 0．06-0．60g盐酸胍0．09-0．90g双蒸水1000mlTOX抗原、RV抗原、CMV抗原和HSV抗原各10-5000ug，(2)洗涤液的含量如下氯化钠8．70g磷酸二氢钾0．20g磷酸氢二钠2．33g吐温-20 1-10ml双蒸水990-999ml(3)封闭液配制如下羊血清5-300ml洗涤液700-995ml(4)标本稀释液葡萄球菌A蛋白 5-20mg甘氨酸1-5g封闭液1000ml(5)底物稀释液配制如下柠檬酸9-13g柠檬酸三钠10-15g双蒸水1000ml(6)酶底物液3，3＇，5，5＇-四甲基联苯胺 200mg二甲亚砜 200ml过氧化脲 250ml底物稀释液 800ml
2.一种生产酶免疫试剂盒的工艺方法，其特征在于，包被液包被板条的方法是，将包被液和其他用液各配置混合后备用，用包被液稀释TORCH抗原，使终浓度分别为弓形体抗原、风疹病毒抗原、原细胞病毒抗原、单纯疱疹病毒-1型抗原各10-5000ug／1000ml，将TORCH抗原混悬液加入多孔板条的孔内100μl／孔置于37℃温箱内2小时后，然后在4℃下6-12小时，甩掉包被液，用洗涤液清洗后，用封闭液封闭，110μl／孔，再置于4℃条件下6-12小时，甩去封闭液用洗涤液、双蒸水清洗，叩尽板条孔中的水，20-28℃晾干。
全文摘要
本发明涉及医学检测技术领域,尤其涉及孕妇产前病原体IgM抗体测试技术领域。本发明包括盒体,设在盒体内的多孔板条和设在盒内的用液,在多孔板条的每一孔内包被能引起胎儿先天畸形的TORCH病毒抗原,检测TORCH－IgM抗体,包被液内含有碳酸氢钠、碳酸钠、尿素、盐酸胍和双蒸水,用液包含有洗涤液、封闭液、稀释液、酶底物和抗人IgM的酶联物。本发明在板条每个孔中可以一次同时检出TOX、RV、CMV、HSV四种病原体的IgM,易于TORCH－IgM合检初筛,简化了操作,节约了成本,使用方便,效果好。
文档编号G01N33/535GK1294301SQ99114528
公开日2001年5月9日 申请日期1999年11月1日 优先权日1999年11月1日
发明者严华 申请人:扬州大学