一种脑膜炎疫苗磷含量的简便检测方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种疫苗磷含量的检测方法，具体是指用于检测A群脑膜炎球菌多糖疫苗中磷含量的一种脑膜炎疫苗磷含量的简便检测方法。
【背景技术】
[0002]A群脑膜炎球菌多糖疫苗简称脑膜炎疫苗，《中国药典》第三部2010年版要求对所述脑膜炎疫苗中的磷含量进行测定，《中国药典》第三部2010年版，附录VIIA磷测定法中只给出了定性要求，并未给出具体统一的磷含量测定方法；现有技术各疫苗生产企业对脑膜炎疫苗磷含量的测定，方法各异，工艺复杂，操作繁难，过程长，效率低，成本高，因此，现有技术存在难以操作、效率低、成本高的问题与不足。
【发明内容】
[0003]针对上述现有技术存在的问题与不足，本发明采用炭化、二次消化、还原、紫外吸收测定的方法精确测定脑膜炎疫苗样本磷含量的技术方案，提供一种脑膜炎疫苗磷含量的简便检测方法，旨在使脑膜炎疫苗磷含量的检测，达到易于操作、提高效率、降低成本的目的。
[0004]本发明的目的是这样实现的:一种脑膜炎疫苗磷含量的简便检测方法，包括试剂预备和操作工艺，其中:
[0005]所述的试剂预备为，
[0006]被测样本，A群脑膜炎球菌多糖疫苗；
[0007]硫酸，分析纯；
[0008]高氯酸，分析纯；
[0009]注射用水；
[0010]钼酸铵溶液，0.04mol/L ；
[0011]还原剂；
[0012]所述的操作工艺包括还原剂的制备工艺和磷含量的测定工艺；其中:
[0013]所述还原剂的制备工艺为，取亚硫酸氢钠，分析纯，6g ;亚硫酸钠，分析纯，1.2g ；1-氨基-2-萘酚-4-磺酸，分析纯，0.1g ;置棕色玻璃瓶中，加注射用水至50ml定容，手动摇匀，即获得所述还原剂，待用，有效期为I周；
[0014]所述磷含量的测定工艺为，
[0015]步骤一、炭化
[0016]取被测样本Iml置于试管中，加硫酸0.08ml，手动摇匀后，将试管放入消化炉中进行炭化，炭化温度为150°C，炭化用时I小时；
[0017]步骤二、二次消化
[0018]步骤一之后，从消化炉中取出试管，向试管中加入高氯酸0.06ml，手动摇匀后，再将试管放入消化炉中进行第一次消化，第一次消化温度为180°C，第一次消化用时2小时，之后，再次提高炉温进行第二次消化，第二次消化温度为250°C，第二次消化用时30分钟，此时试管中的存留物呈无色清澄；
[0019]步骤三、还原
[0020]步骤二之后，从消化炉中取出试管，静置30?50秒，之后立即向试管中加入注射用水2ml，加入钼酸钱溶液0.4ml，手动摇匀后，加入所述还原剂0.2ml，之后，将试管插入漩涡混合器进行第一次机动混匀，漩涡混合器混匀频率1000?2000转/分钟，第一次机动混匀用时5?10秒，之后，再向试管中加入注射用水，定容试管中的容留物为6ml，再用漩涡混合器进行第二次机动混匀，漩涡混合器混匀频率1000?2000转/分钟，第二次机动混匀用时3?5分钟，之后，从漩涡混合器上取下试管静置15?20分钟；
[0021]步骤四、紫外吸收测定
[0022]步骤三之后，将试管中的物质移至紫外可见分光光度计中进行紫外光吸收率测定，在波长820nm处测得吸光度，紫外可见分光光度计打印出数据单，获得所述被测样本的磷含量。
[0023]所述消化为，在强酸和高温条件的作用下，将有机态的磷转变为无机态的磷。
[0024]试验
[0025]通过对照试验来验证本发明的真实性，参阅图1?图4 ;
[0026]结论:图1?图4的试验数据表明，本发明可以得到一种线性较好的曲线，相关系数R2大于0.999，《中国药典》标准:R2应高于0.99;标准品(质控品)的准确度与被测样本的重复性、平行性的变异系数分别都小于5%，符合《中国药典》要求。
[0027]有益效果
[0028]试验证实本发明可以使脑膜炎疫苗磷含量的测定更加精确，本发明工艺简便，易于操作，使脑膜炎疫苗磷含量的测定提高了效率、降低了成本。
[0029]上述，本发明采用炭化、二次消化、还原、紫外吸收测定的方法精确测定脑膜炎疫苗样本磷含量的技术方案，克服了现有技术存在难以操作、效率低、成本高的问题与不足，所提供的一种脑膜炎疫苗磷含量的简便检测方法，使脑膜炎疫苗磷含量的检测，达到了易于操作、提高效率、降低成本的目的。
【附图说明】
[0030]图1是本发明的对照试验图表之被测样本检测数据表；
[0031]图2是本发明的对照试验图表之标准品检测数据表；
[0032]图3是本发明的对照试验图表之标准品曲线数据表；
[0033]图4是本发明的对照试验图表之被测样本曲线与标准品曲线的合成对照图。
[0034]实施例说明
[0035]以下通过具体实施例对本发明的一种脑膜炎疫苗磷含量的简便检测方法作进一步详细说明，所属领域的技术人员可以参照实施例的试剂预备和操作工艺测定A群脑膜炎球菌多糖疫苗的磷含量，但不应理解为对本发明的任何限制。
【具体实施方式】
[0036]实施例
[0037]测定内容:A群脑膜炎球菌多糖疫苗的磷含量的测定
[0038]试剂预备:
[0039]被测样本，A群脑膜炎球菌多糖疫苗；
[0040]硫酸，分析纯；
[0041]高氯酸，分析纯；
[0042]注射用水；
[0043]钼酸铵溶液，0.04mol/L ；
[0044]还原剂；
[0045]测定
[0046]环境气压:一个大气压；环境温度:室温；
[0047]设施、仪器:无菌室；试管；消化炉DK 20S ;漩涡混合器；紫外-可见分光光度计UV1700 ；
[0048]操作工艺包括还原剂的制备工艺和磷含量的测定工艺；
[0049]还原剂的制备工艺为，取亚硫酸氢钠，分析纯，6g ;亚硫酸钠，分析纯，1.2g ；1-氨基-2-萘酚-4-磺酸，分析纯，0.1g ;置棕色玻璃瓶中，加注射用水至50ml定容，手动摇匀，即获得所述还原剂，待用，有效期为I周；
[0050]被测样本磷含量的测定工艺为，
[0051]步骤一、炭化
[0052]取被测样本Iml置于试管中，加硫酸0.08ml，手动摇匀后，将试管放入消化炉中进行炭化，炭化温度为150°C，炭化用时I小时；
[0053]步骤二、二次消化
[0054]步骤一之后，从消化炉中取出试管，向试管中加入高氯酸0.06ml，手动摇匀后，再将试管放入消化炉中进行第一次消化，第一次消化温度为180°C，第一次消化用时2小时，之后，再次提高炉温进行第二次消化，第二次消化温度为250°C，第二次消化用时30分钟，此时试管中的存留物呈无色清澄；
[0055]步骤三、还原
[0056]步骤二之后，从消化炉中取出试管，静置30?50秒，之后立即向试管中加入注射用水2ml，加入钼酸钱溶液0.4ml，手动摇匀后，加入所述还原剂0.2ml，之后，将试管插入漩涡混合器进行第一次机动混匀，漩涡混合器混匀频率1000?2000转/分钟，第一次机动混匀用时5?10秒，之后，再向试管中加入注射用水，定容试管中的容留物为6ml，再用漩涡混合器进行第二次机动混匀，漩涡混合器混匀频率1000?2000转/分钟，第二次机动混匀用时3?5分钟，之后，从漩涡混合器上取下试管静置15?20分钟；
[0057]步骤四、紫外吸收测定
[0058]步骤三之后，将试管中的物质移至紫外可见分光光度计中进行紫外光吸收率测定，在波长820nm处测得吸光度，紫外可见分光光度计打印出数据单，获得所述被测样本的磷含量。
【主权项】
1.一种脑膜炎疫苗磷含量的简便检测方法，包括试剂预备和操作工艺，其特征在于: 所述的试剂预备为， 被测样本，A群脑膜炎球菌多糖疫苗； 硫酸，分析纯； 高氯酸，分析纯； 注射用水； 钼酸铵溶液，0.04mol/L ； 还原剂； 所述的操作工艺，包括还原剂的制备工艺和磷含量的测定工艺；其中: 所述还原剂的制备工艺为，取亚硫酸氢钠，分析纯，6g ;亚硫酸钠，分析纯，1.2g ;1_氨基-2-萘酚-4-磺酸，分析纯，0.1g ;置棕色玻璃瓶中，加注射用水至50ml定容，手动摇匀，即获得所述还原剂，待用，有效期为I周； 所述磷含量的测定工艺为， 步骤一、炭化 取被测样本Iml置于试管中，加硫酸0.08ml，手动摇匀后，将试管放入消化炉中进行炭化，炭化温度为150°C，炭化用时I小时； 步骤二、二次消化 步骤一之后，从消化炉中取出试管，向试管中加入高氯酸0.06ml，手动摇匀后，再将试管放入消化炉中进行第一次消化，第一次消化温度为180°C，第一次消化用时2小时，之后，再次提高炉温进行第二次消化，第二次消化温度为250°C，第二次消化用时30分钟，此时试管中的存留物呈无色清澄； 步骤三、还原 步骤二之后，从消化炉中取出试管，静置30?50秒，之后立即向试管中加入注射用水2ml，加入钼酸铵溶液0.4ml，手动摇匀后，加入所述还原剂0.2ml，之后，将试管插入漩涡混合器进行第一次机动混匀，漩涡混合器混匀频率1000?2000转/分钟，第一次机动混匀用时5?10秒，之后，再向试管中加入注射用水，定容试管中的容留物为6ml，再用漩涡混合器进行第二次机动混匀，漩涡混合器混匀频率1000?2000转/分钟，第二次机动混匀用时3?5分钟，之后，从漩涡混合器上取下试管静置15?20分钟； 步骤四、紫外吸收测定 步骤三之后，将试管中的物质移至紫外可见分光光度计中进行紫外光吸收率测定，在波长820nm处测得吸光度，紫外可见分光光度计打印出数据单，获得所述被测样本的磷含量。
【专利摘要】本发明公开了一种脑膜炎疫苗磷含量的简便检测方法，包括试剂预备和操作工艺。本发明采用炭化、二次消化、还原和紫外吸收测定的方法，精确测定脑膜炎疫苗样本磷含量的技术方案，使脑膜炎疫苗磷含量的检测，达到了易于操作、提高效率、降低成本的目的。
【IPC分类】G01N21-33, G01N1-44
【公开号】CN104677850
【申请号】CN201510083222
【发明人】杨乾敏, 杨云霞, 胡文龙, 谢丹霞
【申请人】浙江卫信生物药业有限公司
【公开日】2015年6月3日
【申请日】2015年2月11日