失调影响的受试者的至少一个皮肤样本（A^ );
[0140] b)用候选试剂与所述样本（A')接触；
[0141] c)通过本发明的方法确定样本（A^ )皮肤表面的成熟水平；
[0142] d)确定至少一个对照样本皮肤表面的成熟水平；
[0143] e)比较步骤c)的成熟水平和步骤d)的成熟水平，以及
[0144] f)确定所述候选物是否为治疗皮肤失调的活性试剂。
[0145] 根据优选的实施方案，提供样本（A)的受试者是儿童。更优选地，该受试者是1-15 天的新生儿、5/6周的婴儿、6个月± 1个月的婴儿、或者1-2岁的婴儿。
[0146] 优选地，本发明的活性试剂能够恢复皮肤成熟的正常水平。就"正常水平"而言， 其在本文涉及通常在与受所述失调影响的患者同龄的健康受试者群体中观察到的皮肤表 面的成熟水平。换言之，经过处理的皮肤表面显示的各向同性程度与在同龄的健康受试者 群体中观察到的相同。还可换言之，EMI分值与在同龄的健康受试者群体中观察到的相同。 更优选地，经过处理的皮肤表面显示的各向同性程度和形貌与在同龄的健康受试者群体中 观察到的相同。仍可换言之，EMI分值和展开的表面与在同龄的健康受试者群体中观察到 的相同。
[0147] 可替代地，本发明的活性试剂能够引起皮肤成熟的改进水平。就"改进水平"而言， 其在本文涉及通常在与受所述失调影响的患者同龄的健康受试者群体中观察到的皮肤表 面的成熟水平。换言之，经过处理的皮肤表面显示的各向同性程度高于在同龄的健康受试 者群体中观察到的。还可换言之，EMI分值优于在同龄的健康受试者群体中观察到的。更 优选地，经过处理的皮肤表面显示的各向同性程度高于在同龄的健康受试者群体中观察到 的，并且形貌比在同龄的健康受试者群体中观察到的更加展开。仍可换言之，EMI分值和展 开的表面优于在同龄的健康受试者群体中观察到的。
[0148] 下述实施例仅示例本发明的范围和本公开的内容。本领域技术人员能够在不偏离 本发明的范围下设计和构建下列实施例的很多变型。
【附图说明】
[0149] 图1 :不同组的角质层SEM图片。
[0150] 图2 :年龄和EMI分值之间的相关性。
[0151] 图3 :SEM图像定量的方法学。
[0152] 图4:展开的表面。
[0153] 图5 :展开的表面演变作为儿童年龄的函数。
[0154] 图6 :经校正的展开的表面的演变作为儿童年龄的函数。
[0155] 实验例
[0156] 在本研宄中，从六个年龄组（η = 6 ;每组）新生儿（1-15天）、5周、6个月、1-2岁 和20-35岁的成人共36个健康的男性和女性志愿者掌侧前臂上收集胶带（表1)。在第二 个实验中，以每组η = 6在相同年龄组中的30个志愿者中进行验证性实验分析，但不含新 生儿组。附着于D-Squames的角质细胞随后通过扫描电子显微镜法（SEM)进行分析。
[0157] 基于打印出的SEM图片，采用以下参数展开表面分值：细胞密度、细胞团、粘附性 /细胞形状及单个细胞的可辩性，每个参数以30Χ和500Χ的放大率用三个不同的定级 (grading)步骤得到（图1，表2)。
[0158] 表1 :受试者人口学特征的总结
[0159]
【主权项】
1. 一种确定受试者皮肤表面于其组织结构/功能是成熟还是不成熟的方法，所述方法 包括步骤： a) 取得所述受试者的皮肤样本（A); b) 将所述皮肤样本评分至适当的数值范围，其中所述适当的数值范围基于细胞密度、 细胞团、粘附性/细胞形状及单个细胞的可辩性四个参数。
2. 根据权利要求1所述的方法，其中所述数值范围是0-12的数值范围，并且其中分值 0表明强烈的各向异性，W及分值12表明良好的各向同性。
3. 根据权利要求1或2任一项所述的方法，其中所述参数由显微镜技术确定，所述显微 镜技术选自包括W下方法的组；光学显微镜法如传统的光学显微镜法、巧光显微镜法、共焦 /多光子显微镜法及受激发射损耗法；扫描探针显微镜法，包括扫描隧道显微镜法（STM)、 原子力显微镜法（AFM)、近场扫描光学显微镜法及其他；W及电子显微镜法如透射电子显 微镜法（TEM)、扫描透射电子显微镜法（STEM)、聚焦离子束显微镜法（FIB) W及扫描电子显 微镜法（SEM)。
4. 根据权利要求3所述的方法，其中所述参数由电子显微镜法确定。
5. 根据权利要求4所述的方法，其中所述参数由扫描电子显微镜法确定。
6. 根据前述权利要求中任一项所述的方法，进一步包括评估皮肤表面纹理的步骤。
7. 根据权利要求6所述的方法，其中所述评估包括确定所述皮肤样本的展开的表面。
8. 根据权利要求7所述的方法，其中所述评估包括确定所述受试者身体表面积炬SA) 的进一步的步骤。
9. 根据权利要求8所述的方法，其中所述评估包括W下进一步的步骤；确定所述受试 者的BSA与成人群体中平均BSA值之间的比率，W及通过步骤b)中展开的皮肤样本乘W所 述比率来确定所述皮肤样本的经校正的展开的皮肤表面。
10. 根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中通过剥离皮肤表面取得所述皮肤样 本。
11. 一种鉴别用于制备皮肤用化妆品、药品、食品和/或营养品组合物的活性试剂的方 法，所述方法包括步骤： a) 获取受试者皮肤细胞的至少一个样本（A); b) 将候选活性试剂与样本（A)接触； C)通过权利要求1-10中任一项所述的方法确定样本（A)皮肤表面的成熟水平； d) 通过权利要求1-10中任一项所述的方法确定对照样本皮肤表面的成熟水平； e) 比较步骤C)的成熟水平和步骤d)的成熟水平，W及 f) 确定所述候选活性试剂是否是用于针对皮肤制备皮肤用化妆品、药品、食品和/或 营养品组合物的活性试剂。
12. -种鉴别用于制备化妆品、药品、食品和/或营养品制剂的原材料的方法，所述方 法包括步骤： a) 从受试者获取至少一个皮肤样本（A); b) 将候选原材料与样本（A)接触； C)通过权利要求1-10中任一项所述的方法确定样本（A)皮肤表面的成熟水平； d)通过权利要求1-10中任一项所述的方法确定对照样本皮肤表面的成熟水平； e) 比较步骤c)的成熟水平和步骤d)的成熟水平，W及 f) 确定所述材料是否为用于制备化妆品、药品、食品和/或营养品制剂的候选材料。
13. -种鉴别用于皮肤的化妆品、药品、食品和/或营养品制剂的方法，所述方法包括 步骤： a) 获取受试者皮肤细胞的至少一个样本（A); b) 将候选活性制剂与样本（A)接触； C)通过权利要求1-10中任一项所述的方法确定样本（A)皮肤表面的成熟水平； d) 通过权利要求1-10中任一项所述的方法确定皮肤表面的成熟水平； e) 比较步骤C)的成熟水平和步骤d)的成熟水平，W及 f) 确定所述候选制剂是否为化妆品、药品、食品和/或营养品制剂。
14. 根据权利要求11、12或13任一项所述的方法，其中所述试剂、材料或制剂伴随、保 护或恢复皮肤的成熟。
15. -种评估化妆品、药品、食品和/或营养品组合物耐受性的方法，所述方法包括步 骤： a) 获取受试者皮肤细胞的至少一个样本（A); b) 将候选活性试剂与样本（A)接触； C)通过本发明的方法确定样本（A)皮肤表面的成熟水平； d) 确定对照样本皮肤表面的成熟水平； e) 比较步骤C)的表达水平和步骤d)的表达水平，化及 f) 确定受试者皮肤的所述化妆品、药品、食品和/或营养品组合物是否为受试者皮肤 所耐受。
16. -种确定皮肤失调是否影响皮肤表面成熟的方法，所述方法包括W下步骤： a) 获取受所述皮肤失调影响的受试者细胞的至少一个皮肤样本（A'); b) 获取健康受试者皮肤细胞的至少一个对照样本炬）； C)通过权利要求1-10中任一项所述的方法确定样本（A')皮肤表面的成熟水平； d) 通过权利要求1-10中任一项所述的方法确定步骤b)的样本皮肤表面的成熟水平； e) 比较步骤a)的成熟水平和步骤b)的成熟水平，W及 f) 确定所述皮肤失调是否影响皮肤表面的成熟水平。
17. -种鉴别用于治疗特定的皮肤失调的活性试剂的方法，所述方法包括步骤： a) 获取来自受所述皮肤失调影响的受试者的至少一个皮肤样本（A'); b) 将候选试剂与所述样本（A')接触； C)通过权利要求1-10中任一项所述的方法确定样本（A')皮肤表面的成熟水平； d) 通过权利要求1-10中任一项所述的方法确定至少一个对照样本的皮肤表面的成熟 水平； e) 比较步骤C)的成熟水平和步骤d)的成熟水平，W及 f) 确定所述候选物是否为治疗皮肤失调的活性试剂。
18. 根据权利要求11-17中任一项所述的方法，其中步骤a)的受试者是儿童。
19. 根据权利要求18所述的方法，其中所述受试者是1-15天的新生儿、5/6周的婴儿、 6个月± 1个月的婴儿、1-2岁的婴儿，或直至18岁的婴儿。
【专利摘要】本发明涉及通过检测反映细胞组织结构的各种参数而确定受试者皮肤表面的各向同性，因而确定所述皮肤表面的成熟度的方法。还提供了用于鉴别活性试剂、原材料和制剂的方法。
【IPC分类】G01N33-50
【公开号】CN104685357
【申请号】CN201380051237
【发明人】P·姆西卡, N·拉赫曼, J·弗吕尔
【申请人】科学发展实验室
【公开日】2015年6月3日
【申请日】2013年8月2日
【公告号】CA2880250A1, EP2767830A1, EP2880439A1, US20150153328, WO2014020173A1