奥氮平的抗体及其用图
【专利说明】
[0001] 相关申请的交叉引用
[0002] 本申请要求2012年8月21日提交的美国临时申请61/691，645的权益。
技术领域
[0003] 本发明涉及免疫测定领域，并且具体地涉及结合至奥氮平的抗体，这些抗体可用 于检测奥氮平的免疫测定中。
【背景技术】
[0004] 精神分裂症为一种慢性且使人衰弱的精神疾病，影响了约0. 45% -1%的世界人 口（van0s，J.Kapur，S. ;"schizophrenia"Lancet2009, 374,635-645)。治疗的主要目的 是实现对精神症状的持续缓解、降低复发的风险和后果、以及改善患者机能和总体生活质 量。虽然许多患有精神分裂症的患者能够用可用的抗精神病药物实现症状稳定性，但对药 物的低遵从性是在每日施用的口服药物下复发的常见原因。若干探索不依从性的后果的 研宄（Abdel_Baki，A. ;Ouellet_Plamondon，C. ;Malla，A."PharmacotherapyChallenges inPatientswithFirst-EpisodePsychosis"JournalofAffectiveDisorders2012， 138,S3-S14)显示不按处方服用其药物的患有精神分裂症的患者具有较高的复发率、入院 率和自杀率以及增加的死亡率。据估计，40%至75%患有精神分裂症的患者难以遵从每日 口服治疗方案（Lieberman，J.A. ;Stroup，T.S. ;McEvoy，J.P. ;Swartz，M.S. ;Rosenheck， R.A. ；Perkins,D. 0. ；Keefe,R.S.E. ；Davis,S.M. ；Davis,C.E. ；Lebowitz,B.D. ；Severe, J. ；Hsiao,J.K."EffectivenessofAntipyschoticDrugsinPatientswithChronic Schizophrenia"NewEnglandJournalofMedicine2005,353 (12)，1209-1223)。
[0005] 治疗药物监测（TDM)是对药物，包括抗精神病药物的血清或血浆浓度的量化，目 的是治疗监测和优化。这种监测允许例如识别未遵从其药物方案、未达到治疗剂量、在治疗 剂量下无应答、具有次优耐药性、具有药代动力学药物-药物互相作用或具有导致不适当 的血浆浓度的异常代谢的患者。患者吸收、分布、代谢以及排出抗精神病药物的能力存在相 当大的个体差异。这种不同可由并发疾病、年龄、伴随药物或遗传特性引起。不同的药物制 剂也可影响抗精神病药物的代谢。TDM允许针对个体患者进行剂量优化，改善治疗和功能结 果。TDM还允许处方临床医生确保对处方剂量的依从性且确保达到有效血清浓度。
[0006] 至今，用于确定抗精神病药物的血清或血浆浓度的水平的方法涉及具有UV的液相 色谱（LC)或质谱检测以及放射免疫测定的使用（参见例如，Woestenborghs等人，1990"0n theselectivityofsomerecentlydevelopedRIA's''，MethodologicalSurveys inBiochemistryandAnalysis20 :241_246;AnalysisofDrugsandMetabolites，IncludingAnti-infectiveAgents;Heykants等人，1994"ThePharmacokineticsof RisperidoneinHumans:ASummary''，JClinPsychiatry55/5,增干丨J: 13-17 ;Huang等人， 1993"Pharmacokineticsofthenovelanti-psychoticagentrisperidoneandthe prolactinresponseinhealthysubjects''，ClinPharmacolTher54 :257_268) 〇 放身寸 免疫测定检测利培酮和帕潘立酮之一或二者。在美国专利8, 088, 594中Salamone等人公开 了使用检测利培酮和帕潘立酮二者，但不检测药理学上非活性代谢物的抗体，用于利培酮 的竞争性免疫测定。针对特定免疫原开发了竞争性免疫测定中使用的抗体。IDLabsInc. (London，Ontario,Canada)出售针对另一种精神病药物奥氮平的ELISA，它也利用了竞争 格式。使用说明指示测定被设计用于筛选目的并且旨在用于法医或研宄用途，并且具体地 不旨在用于治疗用途。使用说明推荐使用气相色谱/质谱（GC-MS)来确认所有阳性样品， 并且指示所使用的抗体检测奥氮平和氯氮平（参见IDLabsInc./'InstructionsForUse DataSheetIDEL-F083"，修订日期2011年8月8日）。这些方法中的一些，即HPLC和GC/ MS可能是昂贵且劳动密集型的，并且通常仅在具有适当设备的大型或专业实验室中执行。
[0007] 存在对用于确定抗精神病药物的水平的其它方法的需要，具体地讲是能够在处方 临床医生办公室（在这里可相应地以更加及时的方式调整对个体患者的治疗）和缺乏LC 或GC/MS设备或需要快速测试结果的其它医疗设施中执行的方法。
【发明内容】
[0008] 本发明涉及分离的抗体或其结合片段，所述分离的抗体或其结合片段结合至奥氮 平，并且所述分离的抗体或其结合片段：（i)为选自以下的抗体：a)包含轻链可变区的分离 的抗体或其片段，该轻链可变区包含氨基酸序列SEQIDN0:11、SEQIDN0:15、SEQIDN0: 31、SEQIDN0:35或SEQIDN0:39;b)包含重链可变区的分离的抗体或其片段，该重链可 变区包含氨基酸序列SEQIDN0 :12、SEQIDN0 :16、SEQIDN0 :32、SEQIDN0 :36 或SEQ IDNO:40 ;c)包含轻链可变区和重链可变区的分离的抗体或其片段，该轻链可变区具有氨 基酸序列SEQIDN0 :11，该重链可变区具有氨基酸序列SEQIDN0:12 ;d)包含轻链可变区 和重链可变区的分离的抗体或其片段，该轻链可变区具有氨基酸序列SEQIDN0 :15,该重 链可变区具有氨基酸序列SEQIDNO:16;e)包含轻链可变区和重链可变区的分离的抗体 或其片段，该轻链可变区具有氨基酸序列SEQIDN0 :31，该重链可变区具有氨基酸序列SEQ IDNO:32 ;f)包含轻链可变区和重链可变区的分离的抗体或其片段，该轻链可变区具有氨 基酸序列SEQIDN0:35,该重链可变区具有氨基酸序列SEQIDN0:36;或g)包含轻链可 变区和重链可变区的分离的抗体或其片段，该轻链可变区具有氨基酸序列SEQIDN0 :39， 该重链可变区具有氨基酸序列SEQIDNO:40 ;或（ii)竞争与（i)的抗体所结合的表位相 同的表位。
[0009] 主题发明的抗体可提供于测定试剂盒和测定装置中，其中目前优选的装置为提供 床旁（point-of-care)分析的侧流测定装置。
[0010] 本发明还提供检测样品中奥氮平的方法。该方法包括：⑴使样品与根据主题发 明的抗体接触，该抗体用可检测标记物标记，其中标记抗体和存在于样品中的奥氮平形成 标记复合物；以及（ii)检测标记复合物以便检测样品中的奥氮平。
[0011] 还提供了用于检测样品中奥氮平的竞争性免疫测定方法。该方法包括：（i)使样 品与根据主题发明的抗体和奥氮平或奥氮平的竞争性结合配偶体接触，其中用可检测标记 物标记抗体和奥氮平或其竞争性结合配偶体中的一者，并且其中样品奥氮平与该奥氮平或 其竞争性结合配偶体竞争结合至抗体；以及（ii)检测标记以便检测样品奥氮平。
[0012] 由下文的优选实施例的详细描述，本发明更多的目的、特征和优点对于本领域技 术人员而g是显而易见的。
【附图说明】
[0013] 图1-3示出了用三个不同小鼠融合11. 1杂交瘤生成的竞争性ELISA结果；
[0014] 图4示出了在侧流测定装置上使用的竞争性免疫测定格式；
[0015] 图5示出了由奥氮平抗体克隆35生成的典型剂量反应曲线；
[0016]图6示出了由奥氮平抗体克隆61生成的典型剂量反应曲线；
[0017]图7示出了由奥氮平抗体克隆3F11生成的典型剂量反应曲线；
[0018] 图8示出了根据主题发明的侧流测定装置的芯片设计；
[0019] 图9示出了由抗体5C7和标记阿立哌唑竞争性结合配偶体生成的针对阿立哌唑阳 性对照的典型剂量反应曲线；
[0020] 图10示出了由抗体4G9-1和标记奥氮平竞争性结合配偶体生成的针对奥氮平阳 性对照的典型剂量反应曲线；
[0021] 图11示出了由抗体11和标记喹硫平竞争性结合配偶体生成的针对喹硫平阳性对 照的典型剂量反应曲线；
[0022] 图12示出了由抗体5-9和标记利培酮竞争性结合配偶体生成的针对利培酮阳性 对照的典型剂量反应曲线；
[0023] 图13示出了在标记阿立哌唑竞争性结合配偶体的存在下，由阿立哌唑抗体5C7生 成的针对包含阿立哌唑的样品的典型剂量反应曲线，对于奥氮平、喹硫平或利培酮在其各 自的标记竞争性结合配偶体的存在下无剂量反应曲线；
[0024] 图14示出了在标记奥氮平竞争性结合配偶体的存在下，由奥氮平抗体4G9-1生成 的针对包含奥氮平的样品的典型剂量反应曲线，对于阿立哌唑、喹硫平或利培酮在其各自 的标记竞争性结合配偶体的存在下无剂量反应曲线；
[0025] 图15示出了在标记喹硫平竞争性结合配偶体的存在下，由喹硫平抗体11生成的 针对包含喹硫平的样品的典型剂量反应曲线，对于阿立哌唑、奥氮平或利培酮在其各自的 标记竞争性结合配偶体的存在下无剂量反应曲线；
[0026] 图16示出了在标记利培酮竞争性结合配偶体的存在下，由利培酮抗体5-9生成的 针对包含利培酮的样品的典型剂量反应曲线，对于阿立哌唑、奥氮平或喹硫平在其各自的 标记竞争性结合配偶体的存在下无剂量反应曲线；
[0027] 图17示出了在标记阿立哌唑竞争性结合配偶体的存在下，由阿立哌唑抗体5C7生 成的针对包含阿立哌唑的样品的典型剂量反应曲线，对于奥氮平、喹硫平或利培酮在其各 自的抗体和标记竞争性结合配偶体的存在下无剂量反应曲线；
[0028] 图18示出了在标记奥氮平竞争性结合配偶体的存在下，由奥氮平抗体4G9-1生成 的针对包含奥氮平的样品的典型剂量反应曲线，对于阿立哌唑、喹硫平或利培酮在其各自 的抗体和标记竞争性结合配偶体的存在下无剂量反应曲线；
[0029] 图19示出了在标记喹硫平竞争性结合配偶体的存在下，由喹硫平抗体11生成的 针对包含喹硫平的样品的典型剂量反应曲线，对于阿立哌唑、奥氮平或利培酮在其各自的 抗体和标记竞争性结合配偶体的存在下无剂量反应曲线；
[0030] 图20示出了在标记利培酮竞争性结合配偶体的存在下，由利培酮抗体5-9生成的 针对包含利培酮的样品的典型剂量反应曲线，对于阿立哌唑、奥氮平或喹硫平在其各自的 抗体和标记竞争性结合配偶体的存在下无剂量反应曲线；
[0031] 图21示出了作为阳性对照生成的阿立哌唑剂量反应曲线与在多重格式中生成的 阿立哌唑剂量反应曲线的比较结果；
[0032] 图22示出了作为阳性对照生成的奥氮平剂量反应曲线与在多重格式中生成的奥 氮平剂量反应曲线的比较结果；
[0033] 图23示出了作为阳性对照生成的喹硫平剂量反应曲线与在多重格式中生成的喹 硫平剂量反应曲线的比较结果；并且
[0034] 图24示出了作为阳性对照生成的利培酮剂量反应曲线与在多重格式中生成的利 培酮剂量反应曲线的比较结果。
【具体实施方式】
[0035] 使用以下术语描述两个或更多个多核苷酸或氨基酸序列之间的序列关系："参 考序列"、"比较窗"、"序列同一性"、"序列同一性百分比"、"基本上相同"、"相似性"和"同 源"。"参考序列"是用作序列比较的基础的限定序列；参考序列可以是较大序列的子集，例 如序列表中给定的全长cDNA或基因序列的片段，或可包含完整的cDNA或基因序列；参考 序列可包含如序列表中给定的编码蛋白质的完整氨基酸序列的片段，或可包含编码蛋白质 的完整氨基酸序列。一般来讲，参考序列为至少18个核苷酸或6个氨基酸的长度，通常为 至少24个核苷酸或8个氨基酸的长度，并且经常为至少48个核苷酸或16个氨基酸的长 度。因为两个多核苷酸或氨基酸序列可各自（1)包含在两个分子之间类似的序列（即，完 整的核苷酸或氨基酸序列的一部分），以及（2)还可包含在两个多核苷酸或氨基酸序列之 间存在分歧的序列，所以典型地通过在"比较窗"上比较两个分子的序列来进行两个（或更 多个）分子之间的序列比较，以鉴定和比较具有序列相似性的局部区域。如本文所用，"比 较窗"是指至少18个连续核苷酸位置或6个氨基酸的概念性片段，其中多核苷酸序列或氨 基酸序列可与至少18个连续核苷酸或6个氨基酸的参