抗体制剂及其用图
【技术领域】
[0001] 本发明设及提供抗CD20抗体的冻干制剂的方法W及抗CD20抗体的冻干制剂， 所述制剂包含抗CD20抗体并且残余水分含量范围为1%至10%。此外，本发明设及通过本 文所述的方法获得的重构制剂，所述抗体制剂作为药物的用途，所述冻干制剂在药物制备 和治疗患者的方法中的用途。
[0002] 背景 许多标准，例如关于稳定性、给药和浓度的标准，在治疗用活性蛋白用作药物的监管审 批程序中是重要的。例如，在生产、胆存和递送期间治疗用蛋白例如抗体可能发生化学和/ 或物理降解，运会导致其药物效力损失并增加副作用例如不想要的免疫应答的风险。
[0003] 此外，许多治疗用活性蛋白需要W高剂量给予，W达到其所需的疗效。高浓度治疗 用蛋白制剂也是有利的，因为它们可允许更方便的将治疗用蛋白给予患者的给药方式。
[0004] 具体地讲，例如至少100mg/mL的高浓度治疗用蛋白可能是期需的，因为给予治疗 剂量所必需的体积随浓度增加而降低。较小体积提供如下优势：它们可W经由低侵袭性途 径注射（例如皮下注射，而非静脉内输注），运对患者更方便并且可能伴随较低的副作用例 如输注反应的风险。高浓度制剂所提供的进一步的优势是它们可允许减少将治疗用蛋白给 予患者的给药频率。
[0005] 然而，高浓缩的治疗用活性蛋白例如单克隆抗体的液体制剂的供应具有挑战性， 因为在较高浓度时，液体制剂的粘度W及蛋白质形成聚集体的趋势可大大地增加。聚集体 可含有蛋白降解产物并可导致不想要的副作用，例如触发不想要的免疫应答。为了避免稳 定性问题例如聚集体的形成，可将蛋白或抗体制剂冻干。
[0006] 然而，通过不同方法制备的冻干抗体制剂在胆存时表现出不同的稳定性。因此，已 经描述了用于提供稳定的冻干抗体的不同方法和制剂。
[0007] W0 03/009817描述了IgG抗体的冻干制剂，所述制剂包含在组氨酸缓冲液巧-25 ml)中的超过50mg/mL抗体并进一步包含聚山梨醋和薦糖。
[0008]US2011/0236383公开了通过使用冻干保护剂例如薦糖或海藻糖，可提供稳定的 冻干蛋白、尤其是抗体制剂。
[0009]W0 2008/157409描述了抗体、尤其是抗a-4整联蛋白抗体那他珠单抗的稳定的 冻干制剂，其是通过将水性制剂冻干而制备。经历冻干的该水性制剂包含在缓冲液W及聚 山梨醋和薦糖中的40mg/mL至50mg/mL免疫球蛋白。
[0010] 在冻干后可重构的高浓度抗体组合物公开于W0 2011/017070。在所述文件中描述 的组合物包含70 - 250mg/mL抗体、薦糖、组氨酸、精氨酸和甘露醇。
[0011]W0 2010/017296描述了冷冻干燥方法，其中冷冻干燥在高于塌陷溫度（collapse temperature)时进行，所述塌陷溫度即运样的溫度：在该溫度或高于该溫度时，冻干饼的 完整结构丧失或原始结构发生改变。
[0012] 然而，仍然需要稳定的冻干抗体制剂和提供所述制剂的方法。
[001引发巧概沐 本发明一方面设及提供抗CD20抗体的冻干制剂的方法，包括W下步骤： I) 提供包含抗CD20抗体的溶液， II) 将所述抗体溶液冷冻， III) 在-10°c至30°C的搁板溫度（shelftemperature)使所述抗体溶液经历至少一 个干燥步骤，W得到冻干制剂， 其中所述冻干制剂中的所得残余水分含量范围为1%至10%，任选范围为1%至5%。
[0014] 在本文所述方法的一个实施方案中，所述抗体溶液经历一个干燥步骤。
[0015] 本文所述方法的另一个实施方案进一步包括使抗体溶液经历第二干燥步骤，其中 第二干燥步骤中使用的搁板溫度低于第一干燥步骤中使用的搁板溫度。
[0016] 根据本文所述方法的一个实施方案，相比第一干燥步骤中使用的搁板溫度，第二 干燥步骤中使用的搁板溫度至少低2 °C，任选至少低：3 °C。
[0017] 在提供本文所述的抗CD20抗体的冻干制剂的方法的再一实施方案中，第一干燥 步骤中使用的搁板溫度为8°C和/或第二干燥步骤中使用的搁板溫度为5°C。
[0018] 在本文所述方法的一个实施方案中，步骤（I)中提供的溶液包含缓冲剂，任选缓 冲剂包含组氨酸或憐酸盐。
[0019] 在本文所述方法的另一个实施方案中，步骤（I)中提供的溶液包含张度调节剂， 任选薦糖。
[0020] 在本文所述方法的再一个实施方案中，步骤（I)中提供的溶液包含表面活性剂， 任选非离子型表面活性剂。
[0021] 在本文所述方法的一个实施方案中，步骤（I)中提供的溶液的pH值范围为5. 0至 7.0,任选抑值为5.5 ± 0.3。
[0022] 在本文所述方法的再一个实施方案中，步骤（I)中提供的溶液包含 a) 至少40mg/g抗CD20抗体， b) 5 - 15ml组氨酸， C) 100 - 150ml薦糖，和 d) 0.05 - 0.5mg/g聚山梨醋 20;和 其中步骤（I)中提供的溶液的抑值为5.5 ± 0.3。
[0023] 在本文所述方法的另一个实施方案中，所述抗CD20抗体是维妥珠单抗 (Veltuzumab)或其片段。
[0024] 本发明再一方面设及提供抗CD20抗体的液体制剂的方法，包括按照本文所述方 法提供冻干制剂和然后进行重构冻干制剂的步骤IV)。
[0025] 在提供抗CD20抗体的液体制剂的方法的一个实施方案中，步骤IV)中得到的液 体制剂包含 a) 至少80mg/mL抗CD20抗体， b) 10 - 40ml缓冲剂，任选包含组氨酸的缓冲剂， C) 200 - 400ml张度调节剂，任选薦糖， d) 0.2 - 0.5mg/mL表面活性剂，任选聚山梨醋20;和 抑值为5.5 ± 0.3。
[0026] 本发明再一方面设及通过提供本文所述的液体制剂的方法得到的重构制剂。
[0027] 本发明另一方面设及抗CD20抗体的冻干制剂，其包含抗CD20抗体，任选维妥珠 单抗或其片段，并且残余水分含量范围为1%至10%，任选范围为1%至5%。
[0028] 在一个实施方案中，本文公开的冻干制剂进一步包含缓冲剂，任选包含组氨酸或 憐酸盐的缓冲剂。
[0029] 在另一个实施方案中，本文公开的冻干制剂进一步包含张度调节剂，任选薦糖。
[0030] 在又一实施方案中，本文公开的冻干制剂进一步包含表面活性剂，任选非离子型 表面活性剂。
[0031] 另一实施方案设及本文公开的冻干制剂，其中所述冻干制剂是按照本文所述的提 供抗CD20抗体的冻干制剂的方法而制备。
[0032] 本发明再一方面设及本文所述的冻干制剂在药物制备中的用途。
[0033] 在所述冻干制剂在药物制备中的用途的一个实施方案中，所述药物用于胃肠外给 药，任选用于皮下给药。
[0034] 本发明再一方面设及用作药物的本文所述的冻干或重构制剂。
[0035] 在一个实施方案中，所述药物用于胃肠外给药，尤其是用于皮下给药。
[0036] 在另一个实施方案中，所述药物用于治疗癌症或非恶性疾病。
[0037] 在又一实施方案中，所述药物用于治疗选自W下的疾病：伯基特淋己瘤、邸病毒 感染、B细胞白血病、慢性淋己细胞性B细胞白血病、急性成淋己细胞性白血病、淋己样白血 病、前淋己细胞性白血病、毛细胞白血病、多发性骨髓瘤、B细胞淋己瘤、边缘区B细胞淋己 瘤、滤泡性淋己瘤、弥漫性大B细胞淋己瘤、免疫母细胞性大细胞淋己瘤、套细胞淋己瘤、非 霍奇金淋己瘤、淋己瘤样肉芽肿、浆细胞肿瘤、前体细胞成淋己细胞性白血病-淋己瘤，肿 瘤病毒感染、瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症、免疫增殖性病症、前淋己细胞性淋己瘤、弥漫性 大B细胞淋己瘤、免疫母细胞性大细胞淋己瘤、套细胞淋己瘤、淋己瘤样肉芽肿、淋己增生 性病症、病变蛋白血症、前体细胞成淋己细胞性白血病-淋己瘤、特发性血小板减少、血小 板减少性紫齋、特发性血小板减少性紫齋、凝血障碍、血小板病症、血液蛋白病症、血液病、 出血障碍、止血障碍、淋己性疾病、紫齋、血小板减少、血栓性微血管病、止血障碍、血管病、 类风湿性关节炎、风湿性疾病、结缔组织病、天瘤疮、系统性红斑狼疮、多发性硬化、瘤疹病 毒科感染、和/或DNA病毒感染。
[0038] 在另一个实施方案中，所述药物用于治疗自身免疫性疾病，例如类风湿性关节炎、 系统性红斑狼疮和/或天瘤疮，任选系统性红斑狼疮。
[0039] 本发明再一方面设及治疗患者的方法，包括 (i) 按照本文所述的方法提供抗CD20抗体的冻干制剂， (ii) 重构所述冻干制剂，和 (iii) 将所述重构制剂给予患者。
[0040] 在本文所述的治疗患者的方法的一个实施方案中，所述患者患有癌症或非恶性疾 病，任选自身免疫性疾病。
[0041] 在本文所述的治疗患者的方法的一个实施方案中，所述自身免疫性疾病是类风湿 性关节炎、系统性红斑狼疮和/或天瘤疮，任选系统性红斑狼疮。
[0042] 附图简沐 图1描绘了一个样品的DSC分析，其是按照实施例1中所述的方法而制备并且其中第 二干燥步骤在〇°c进行。上线和下线显示加热和冷却曲线。十字交叉显示玻璃转化的中点。
[0043]图2描绘了一个样品的DSC分析，其是按照实施例1中所述的方法而制备并且其 中第二干燥步骤在20°C进行。上线和下线显示加热和冷却曲线。十字交叉显示玻璃转化的 中点。
[0044] 图3描绘了一个样品的DSC分析，其是按照实施例1中所述的方法而制备并且其 中第二干燥步骤在40°C进行。上线和下线显示加热和冷却曲线。十字交叉显示玻璃转化的 中点。
[0045] 图4显示按照实施例3的冷冻干燥方法得到的维妥珠单抗冻干物的中间外部部分 (middleouterpart)的形态学的REM图像（300X)。
[0046] 图5显示按照实施例3的冷冻干燥方法得到的维妥珠单抗冻干物的中间内部部分 (middleinnerpart)的REM图像（300X)。从图4和5可W得出，在冻干物的内部和外部 部分的形态学和孔结构没有显著差异。
[0047]发巧详沐 当术语"包含"或"包括"用于本文时，它不排除其它要素或步骤。为了本发明的目的， 术语"由...组成"被视为术语"包含"的任选实施方案。如果下文中定义一个组包含至少 一定量的实施方案，运也应理解为公开了任选仅由运些实施方案组成的一组。
[0048]当提及单数名词例如"一个"或"一种"、"所述"时，尽管使用不定冠词或定冠词， 但运包括该名词的复数形式，除非有明确说明。
[0049] 反之亦然，当使用名词的复数形式时，它也指单数形式。例如当提及抗CD20抗体 时，运也被认为是单一抗CD20抗体。
[0050] 此外，在说明书和在权利要求书中，术语第一、第二第三或a)、b)、c)或0、n)、 等用于区分类似要素，而不一定表示序贯或时间顺序。应当了解，如 此使用的运类术语在合适情况下是可互换的并且本文所述的本发明的实施方案能够按照 并非本文所述的或所示的顺序来操作。然而，在本发明的具体的实施方案中，按照时间顺序 进行方法步骤（I)、（II)、（III)和（IV)，任选包括本文定义的任何中间步骤。在另一具体 的实施方案中，按照时间顺序进行治疗方法步骤（i)、（ii)和（iii)，任选包括本文定义的 任何中间步骤。
[0051] 在本发明的上下文中，所指示的任何数值通常都设及本领域技术人员将会理解的 准确性区间，W仍然确保所论述特征的技术效果。如本文使用的，与指定数值的偏差范围为 ±10%，和优选±5%。上述与指定数值区间的±10%和优选±5%的偏差也用本文对于数值 使用的术语"大约"和"约"来指示。
[0052] 在本发明的上下文中，术语"抗体"设及全长抗体、人抗体、人源化抗体、完全人抗 体、基因工程抗体（例如单克隆抗体、多克隆抗体、嵌合抗体、重组抗体）和多特异性抗体、 W及保留全长抗体特性的运类抗体的片段。在一个实施方案中，抗体是人源化抗体。"人源 化抗体"是经修饰使其与人体中产生的抗体的相似性增加的抗体，例如通过将鼠CDR移植到 人抗体框架区。
[0053] 术语"抗体片段"设及全长抗体的一部分，其与全长抗体结合相同的抗原。具体地 讲，它设及抗体的药学活性片段。全长抗体的运一部分可W至少是抗原结合部分或至少是 其可变区。如同抗体起作用的基因工程蛋白也包括在本文所用的抗体片段的含义中。运样 的基因工程抗体可W是scFv，即通过肤接头相连的重链和轻链可变区的融合蛋白。进一步 的示例性抗体片段是F油、F油'、F(油'）2和Fv。在本文中应理解，对抗体的任何提及也包 括对其片段的提及，例如对维妥珠单抗的提及，也包括对与CD20抗原特异性结合的维妥 珠单抗抗体片段的提及。
[0054] 如本文中定义的抗CD20抗体或其片段表示与CD20抗原（也称为CD20、B-淋 己细胞抗原CD20、B-淋己细胞表面抗原B1、Leu-16或化35)特异性结合的任何抗体或其 片段。运包括已有销售审批的抗CD20抗体、目前在进行临床试验研究的抗CD20抗体和 /或与CD20抗原特异性结合的任何其它化合物。本文使用的CD20抗原设及人CD20的 任何变体、同种型和物种同源物。本文使用的抗CD20抗体，设及I型抗CD20抗