品溶液的制备取新乌头碱对照品、次乌头碱对照品、乌头碱对照品适量，精密称 定，分别加乙腈制成每1ml含0. 2mg的溶液，作为对照品贮备液，精密量取对照品贮备液各 5ml，置50ml量瓶中，加0. 1%磷酸溶液稀释至刻度，摇匀，即得； 固相萃取柱系统适用性试验精密量取对照品贮备液各3ml，混匀，室温减压回收至干， 残渣精密加入〇. lmol/L盐酸溶液50ml使溶解，精密量取5ml，置于处理好的固相萃取柱 上，固相萃取柱以混合型阳离子交换反相吸附剂为填充剂，150mg，容量为6ml，预先依次用 乙腈、水各6ml洗脱；依次以0. lmol/L盐酸溶液、甲醇、乙腈各5ml洗脱，弃去洗脱液，放置 5分钟，继用乙腈：浓氨试液=90 : 10的混合溶液IOml洗脱，收集洗脱液，于40°C以下减 压回收溶剂至干，残渣精密加入乙腈：0.1%磷酸溶液=30 : 70的混合溶液3ml使溶解，滤 过，取续滤液作为固相萃取柱系统适用性试验溶液； 分别精密吸取上述固相萃取柱系统适用性试验溶液和对照品溶液各10 μ 1，注入液相 色谱仪，测定，计算系统适用性试验溶液和对照品溶液各相应成分峰面积比值，不得小于 0. 95 ； 供试品溶液的制备：取本品适量，研细，取l~3g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入 乙腈：浓氨试液=90 : 10的混合溶液50ml，密塞，称定重量，超声处理30分钟，用乙腈：浓 氨试液=90 : 10的混合溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取25ml续滤液于40°C以 下减压回收溶剂至干，残渣精密加入0. lmol/L盐酸溶液IOml使溶解，滤过，滤液照固相萃 取柱系统适用性试验项下的方法，自"置于处理好的固相萃取柱上"起，依法操作，即得； 测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10 μ 1，注入液相色谱仪，测定，即 得； 其他应符合《中国药典》2010年版一部附录制剂通则项下有关的各项规定； 【含量测定】附子含量测定：照《中国药典》2010年版一部附录VI D高效液相色谱法测 定； 色谱条件与系统适用性试验：以极性乙醚连接苯基键合硅胶为填充剂的色谱柱；以乙 腈：0.1%的磷酸溶液=23 : 77为流动相；检测波长为232nm，理论板数按苯甲酰新乌头原 碱峰计算不低于5000 ; 对照品溶液的制备取苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱对照 品适量，精密称定，分别加乙腈制成每1ml含0. 2mg的溶液，作为对照品贮备液；分别精密 量取上述对照品贮备液各l〇ml、5ml和5ml，置同一 100mL的量瓶中，用0. 1%的磷酸溶液稀 释至刻度，摇匀，作为固相萃取柱系统适用性试验用对照品溶液，分别精密量取各对照品贮 备液15ml、2ml、3ml，置同一 200ml的量瓶中，加乙腈至40ml，用0. 1%的磷酸溶液稀释至刻 度，摇匀，制备成每1ml含苯甲酰新乌头原碱15 μ g、苯甲酰乌头原碱2 μ g、苯甲酰次乌头原 喊3 μ g的对照品溶液； 固相萃取柱系统适用性试验精密量取苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰乌头原碱、苯甲酰 次乌头原碱的对照品C备液各l〇ml、5ml和5ml，混匀，室温减压回收至干，用0. lmol/L盐酸 溶液适量溶解并定容至200ml，精密量取10ml，置于处理好的固相萃取柱上，此固相萃取柱 以混合型阳离子交换反相吸附剂为填充剂，规格为150mg、6ml，预先依次用乙腈、水各6ml 洗脱；依次以水3ml，1. 25%的氨溶液、水、甲醇、乙腈各5ml洗脱，待洗脱液流尽后，放置5分 钟，再用乙腈：浓氨试液=90 : 10的混合溶液IOml洗脱，收集洗脱液，于40°C以下减压回 收溶剂至干，残渣加入流动相5ml使溶解，滤过，取续滤液作为固相萃取柱系统适用性试验 溶液； 分别精密吸取上述系统适用性试验溶液与对照品溶液各20 μ 1，注入液相色谱仪，测 定，计算系统适用性试验溶液与对照品溶液中各相应成分峰面积的比值，均不小于〇. 95 ; 供试品溶液的制备取附甘颗粒，研细，称取〇. 2~0. 6g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精 密加入0. lmol/L盐酸溶液25ml，密塞，称定重量，超声处理40分钟并时时振摇，放冷，再称 定重量，用0. lmol/L盐酸溶液补足减失的重量，摇匀，以每分钟4000转离心30分钟，滤过， 精密量取续滤液l〇ml，照固相萃取柱系统适用性试验项下的方法，自"置于处理好的固相萃 取柱"起，依法操作，即得； 测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20 μ 1，注入液相色谱仪，测定，即 得； 甘草含量测定：照《中国药典》2010年版一部附录VI D高效液相色谱法测定； 色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；以乙腈： 0. 5%冰醋酸溶液=18 : 82为流动相；检测波长为276nm ;理论板数按甘草苷峰计算应不低 于 4000 ; 对照品溶液的制备：取甘草苷对照品适量，精密称定，加70%乙醇制成每1ml含20μ g 的溶液，即得； 供试品溶液的制备：取本品内容物，研细，取〇. 2~0. 6g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精 密加入70 %乙醇50ml，密塞，称定重量，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用70 %乙醇补 足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得； 测定：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各1〇μ 1，注入液相色谱仪，测定，即得。
【专利摘要】本发明提供了一种附甘药物质量检测方法，其特征在于：采用以极性乙醚连接苯基键合硅胶为填充剂的色谱柱鉴别及测定附子含量，其目标成分分离度、峰形、拖尾因子均有了显著改善；采用薄层色谱法鉴别甘草；采用高效液相色谱法控制双酯型生物碱含量；经过相关方法学验证及实例考察，表明本发明能简便准确的鉴别附甘药物、控制双酯型生物碱含量、检测附子及甘草含量，在生产和使用中有效的保证产品质量，进而保证药品疗效。
【IPC分类】G01N30-88, G01N30-90
【公开号】CN104833754
【申请号】CN201510241317
【发明人】石红艳, 刘金磊, 王丽, 刘圣梅, 张为胜
【申请人】济南康众医药科技开发有限公司
【公开日】2015年8月12日
【申请日】2015年5月13日