Α2。根据如下公式（1)计算 Λ A样本。用同样的方法和条件测定标准液的吸光度值，并计算Λ A标准。然后根据公式 (2)计算样品的血清样品中视黄醇结合蛋白含量：
[0040] AA = Α2-Α1 (1)
[0041] 血清中视黄醇结合蛋白含量（mg/L) =Λ A样本/ Λ A标准X标准液浓度（2)
[0042] 实施例三
[0043] 按照下述成分和比例配置下述本发明试剂I及试剂II :
[0044] 试剂 I:
[0045] 磷酸二氢钠 200mmol/L
[0046] 磷酸氢二钠 200mmol/L
[0047] 聚乙二醇 6000 2.5%
[0048] 试剂 II :
[0049] 磷酸二氢钠 200mmol/L 磷酸氢二钠 200mmol/L 羊抗人视黄醇结合蛋白抗体 0. 5g/L 120nm 乳胶 5g/L 吐温-20 0. 5% 蛋白保护剂2 1.5% 小牛白蛋白 100g/L
[0050] 在样品管中将240 μ 1试剂I和3 μ 1血清样品混合，在37 °C孵育2-5分钟，然后向 样品中加入60 μ 1试剂II，混匀，继续孵育10秒后，使用奥林帕斯AU400型全自动生化分析 仪，空白调零，在波长340nm处，测定吸光度Al，3分钟后测定吸光度Α2。根据如下公式（1) 计算Λ A样本。用同样的方法和条件测定标准液的吸光度值，并计算Λ A标准。然后根据 公式（2)计算样品的血清样品中视黄醇结合蛋白含量：
[0051] AA = Α2-Α1 (1)
[0052] 血清中视黄醇结合蛋白含量（mg/L) =Λ A样本/ Λ A标准X标准液浓度 （2)
[0053] 实施例四
[0054] 按照下述成分和比例配置下述本发明试剂I及试剂II :
[0055] 试剂 I:
[0056] 磷酸二氢钠 lOOmmol/L
[0057] 磷酸氢二钠 100mmol/L
[0058] 聚乙二醇 6000 1.2%
[0059] 试剂 II :
[0060] 磷酸二氢钠 100mmol/L 磷酸氢二钠 IOOmmol/L 羊抗人视黄醇结合蛋白抗体 0. 15g/L 120nm 乳胶 0. fig/L 吐温-20 0. 3% 蛋白保护剂2 1% 小牛白蛋白 50g/L
[0061] 在样品管中将240 μ 1试剂I和3 μ 1血清样品混合，在37°C孵育2-5分钟，然后向 样品中加入60 μ 1试剂II，混匀，继续孵育10秒后，使用森龙8020型全自动生化分析仪，空 白调零，在波长340nm处，测定吸光度Al，3分钟后测定吸光度Α2。根据如下公式（1)计算 Λ A样本。用同样的方法和条件测定标准液的吸光度值，并计算Λ A标准。然后根据公式 (2)计算样品的血清样品中视黄醇结合蛋白含量：
[0062] AA = Α2-Α1 (1)
[0063] 血清中视黄醇结合蛋白含量（mg/L) =Λ A样本/ Λ A标准X标准液浓度 （2)
[0064] 实施例五
[0065] 使用本实施例1中所列的试剂，按照实施例1所述的方法和条件对100例血清样 品的血清中视黄醇结合蛋白含量进行测定，每份血清样品同时以市售血清中视黄醇结合蛋 白含量测定试剂盒（金华强盛生物科技有限公司）进行对照性测定。
[0066] I、SPSS定量统计分析
[0067] I. 1统计描述
[0068] 表1描述统计量
【主权项】
1. 一种定量测定人体血清中视黄醇结合蛋白含量的试剂，该试剂由分别放置的试剂I 和试剂II组成，其中，所述试剂I含有磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、聚乙二醇6000 ;所述试剂 II含有磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、羊抗人视黄醇结合蛋白抗体、乳胶、吐温-20、蛋白保护剂 2、小牛白蛋白。
2. 根据权利要求1所述的试剂，其特征在于，所述试剂I中蛋白保护剂2为甘油。
3. 根据权利要求1-2任一项所述的试剂，其特征在于，所述试剂I中磷酸二氢钠含量为 100-200mmol/L，磷酸氢二钠含量为100-200mmol/L，聚乙二醇6000的浓度为1-2. 5%。
4. 根据权利要求3所述的试剂，其特征在于，所述试剂I中磷酸二氢钠含量为 100mmol/L，磷酸氢二钠含量为100mmol/L，聚乙二醇6000的浓度为1. 2%。
5. 根据权利要求1-2任一项所述的试剂，其特征在于，所述试剂II中磷酸二氢钠含 量为100-200mmol/L，磷酸氢二钠含量为100-200mmol/L，羊抗人视黄醇结合蛋白抗体含量 为0. 1-0. 5g/L，乳胶含量为0. 5-5g/L，吐温-20含量为0. 1-0. 5%，蛋白保护剂2含量为 0. 5-1. 5%，小牛白蛋白含量为20-100g/L。
6. 根据权利要求5所述的试剂，其特征在于，所述试剂II中磷酸二氢钠含量为 100mmol/L，磷酸氢二钠含量为100mmol/L，羊抗人视黄醇结合蛋白抗体含量为0. 15g/L，乳 胶含量为〇. 6g/L，吐温-20含量为0. 3 %，蛋白保护剂2含量为1 %，小牛白蛋白含量为50g/ L0
7. -种定量测定人体血清中视黄醇结合蛋白含量的试剂盒，其特征在于，其中装有权 利要求1至6中任一所述的定量测定人体血清中视黄醇结合蛋白含量的试剂，该试剂由分 别放置的试剂I及试剂II组成。
8. -种定量测定人体血清中视黄醇结合蛋白含量的方法，该方法包括向血清样品中加 入所述试剂I，37°C孵育2-5分钟，然后加入试剂II，继续孵育10秒后，在一定的波长下测 定样品吸光度Al ;3分钟后测定吸光度A2,由下式（1)计算Λ A样本；用同样的方法测定校 准液的吸光度值Λ A标准；再通过下式（2)计算得到血清样品的视黄醇结合蛋白含量： Λ A = Α2-Α1 (1) 血清中视黄醇结合蛋白含量（mg/L) =Λ A样本/ Λ A标准X标准液浓度 （2)。
【专利摘要】本申请涉及一种定量测定人体血清中视黄醇结合蛋白含量的试剂，该试剂由分别放置的试剂I和试剂II组成，其中，所述试剂I含有磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、聚乙二醇6000；所述试剂II含有磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、羊抗人视黄醇结合蛋白抗体、乳胶、吐温-20、蛋白保护剂2、小牛白蛋白。本发明采用的试剂盒及检测方法只需几微升血清，无需离心或电泳等分离处理，操作简便，可满足全自动化分析的要求，适用于大规模样品的及时准确检测。
【IPC分类】G01N33-68
【公开号】CN104833807
【申请号】CN201510069222
【发明人】梁朝阳
【申请人】浙江凯成生物科技有限公司
【公开日】2015年8月12日
【申请日】2015年2月10日