一种藁本内酯的快速检测方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种基于快速热解-气相色谱-质谱联用技术（PY-GC/MS法）快速检 测藁本内酯含量的方法。
【背景技术】
[0002] 当归别名秦归、云归、西归、岷归，为伞形科植物当归的干燥根。其味甘、辛、性温， 具有补血活血、调经镇痛、润肠通便等功效，主要用于血虚萎黄、眩晕心悸、肠燥便秘、风湿 痹痛，是我国传统特产药材之一。现代中药学认为，藁本内酯是当归的重要和主要有效成 分，其含量约占当归挥发油的50%左右。藁本内酯具有解痉、止咳平喘、调经止痛等多种生 理活性。最近的研究表明藁本内酯能够抑制星形胶质细胞中NF-KB依赖的细胞因子的表 达，是治疗和预防慢性疼痛疾病的候选药物之一；此外，藁本内酯对低钾大鼠小脑颗粒神经 元凋亡也有一定的保护作用。因此，针对藁本内酯，建立新的当归质量控制方法对当归资源 的深度开发是非常必要的。现有对藁本内酯的检测和分析主要采用两步法：第一步是用水 蒸气蒸馏、有机溶剂或超临界萃取等方法从当归中分离得到挥发油；第二步是利用气相色 谱和气相色谱-质谱联用（GC-MS)技术，或薄层层析-光谱联用技术（TLC-SP)等检测其有 效成分。该两步法的主要缺点是总体分析时间长、样品需要量大。
[0003] 快速热解-气相色谱/质谱联用技术（PY-GC/MS)是一种高效的检测易挥发性成 分的技术，近年来发展迅速。通过精确控制热解的温度和时间，可以使大分子化合物热裂解 为小分子化合物，也可以使低沸点的复杂混合物质进行初步的气-液或气-固相分离。而 分析检测过程中的热解时间、温度、升温速率、载气流速、分流比、离子化温度等对分析结果 的影响是很大的。因此，基于PY-GC/MS技术的特点，目前亟需提出一种针对藁本内酯的快 速、微量检测方法。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的在于提供一种藁本内酯的快速检测方法，并基于此，初步判断当归 及其制剂质量的尚低。
[0005] 为达到上述目的，本发明采用了以下技术方案：
[0006] 1)准确称取当归或复方当归制品0. 01~1.OOmg得样品，将样品加入热解杯中；
[0007] 2)采用快速热解-气相色谱-质谱联用仪对加入热解杯中的样品进行测定；
[0008] 3)经过步骤2)后，根据测定的原始色谱数据及质谱数据，定性样品中藁本内酯的 色谱峰，并获得样品中藁本内酯的相对含量。
[0009] 所述样品为块状或粉末状固体。
[0010] 所述热解的条件为：热解温度为1〇〇~400°c，热解时间为0. 1~2min。
[0011] 所述气相色谱的工作条件为：载气为流速〇. 1~4. OmL/min的氦气，分流比为0~ 500 :1，升温程序为：初始温度为40~80°C，并保持0~6min，然后以彡10°C /min升至 200°C，然后以5~15°C /min升至280°C，然后以5~20°C /min升至300~310°C后保持 0 ~10min〇
[0012] 所述质谱的工作条件为：采用EI源、正离子检测，电子能量为40~120eV，离子源 温度为200~250°C，单四级杆温度为130~200°C，扫描方式为全扫描方式，电子倍增器电 压为1070~3120V，溶剂延迟为0? 1~lOmin。
[0013] 所述相对含量采用面积归一化方法进行计算。
[0014] 所述藁本内酯的色谱峰的定性采用NIST08软件的自动匹配计算。
[0015] 本发明的有益效果体现在：
[0016] 1)总分析时间短，提高分析效率。现有方法是将当归通过水蒸气蒸馏、有机溶剂 或超临界萃取等方法分离得到挥发油，然后利用气相色谱和气相色谱-质谱联用（GC-MS) 技术，或薄层层析_光谱联用技术（TLC-SP)等检测其有效成分；该方法的一般分析时间为 12~24小时。本发明中通过热解方法直接对当归及其制剂进行分析，大大节省了分析时 间，常规分析时间为〇. 5~1小时，提高了分析效率。
[0017] 2)灵敏度好，所需样品量少。现有方法因需要先分离得到挥发油，因此需要的样品 量较大，通常是几克到几十克不等；本发明方法的一般分析所用样品量为〇. 01~lmg，提高 了分析灵敏度。
[0018] 3)本发明优化了热解、色谱、质谱等检测条件，可以快速定性所需的色谱峰，实现 了快速和准确检测。
【具体实施方式】
[0019] 下面结合实施例对本发明作进一步说明。
[0020] 实施例
[0021] -种基于PY-GC/MS检测藁本内酯的方法，以当归为例，但本发明的保护范围不局 限于该实施例，具体步骤如下：
[0022] 一、样品准备
[0023] 将取得的当归块（陕西帕尼尔生物科技有限公司，西安）准确称取 1. 00mg(±0. 02mg)放入50 y L的热解小杯中；
[0024]二、热解：
[0025]热裂解炉采用 Frontiers 的 PY2020is，
[0026] ①热解温度：260°C，
[0027] ②热解时间：0?2〇min。
[0028] 三、分离、检测
[0029]色谱：
[0030] 气相色谱采用安捷伦7890A:
[0031] ①分析柱是DB-5MS弹性石英毛细管柱（30m*0. 25id*0. 25um);
[0032] ②载气：氦气，流速为1. OmL/min ;
[0033] ③进样方式为分流进样，分流比为100 :1 ;
[0034]④进样口温度为280 °C，传输线温度为290 °C ;
[0035]⑤程序升温，初始温度为40°C，保持3min，然后以4°C /min升至200°C，然后以 15°C /min 升至 280°C，再以 20°C /min 升至 310°C，保持 4min。
[0036] 质谱（采用安捷伦5975C):
[0037] ①EI源，正离子检测，电子能量为70eV ;
[0038] ②离子源温度为230°C，单四级杆温度为150°C ;
[0039] ③扫描方式为全扫描方式；
[0040] ④电子倍增器电压为2082V，溶剂延迟为3min ;
[0041] 四、数据分析及处理
[0042] 色谱图的保留时间和积分面积由工作站自动完成，利用NIST08谱库定性色谱峰。 各挥发性成分的相对含量通过面积归一化法得到。
[0043] 本样品当归热解组分中可辨认的峰为82个，成分及其保留时间列于表1。保留时 间及峰面积用安捷伦Chemstation计算，相对含量用面积归一化的方法计算。
[0044] 表1.当归中挥发性成分的组成和含量匕=13. 567为藁本内酯）
[0045]
[0046]
[0047]
[0048]
[0049] 五、精密度、重现性及稳定性实验
[0050] 1.精密度实验：取同一当归样品5份，按照上述方法连续进样5次，对相对峰面积 大于0. 5%的82个色谱峰进行分析，其相对保留时间和相对峰面积的RSD (相对标准偏差） 分别在〇~〇. 53%和0. 01~3%之间，说明该方法精密度良好。
[0051] 2.重现性实验：取同一批次的样品5份，按照上述方法连续进样5次。结果82个 色谱峰的相对保留时间和相对峰面积的RSD分别在0~1. 8%和0. 11~3. 8%之间，说明 该方法重现性良好。
[0052] 3.稳定性实验：取制备好的样品1份，分别在0、2、4、8、12、24h进样测定，结果82 个色谱峰的相对保留时间和相对峰面积的RSD均小于1. 8%，说明该方法在24h内测定是稳 定的。
[0053] 从根本上说当归中的挥发性成分是当归的主要活性成分，统称为当归挥发油。本 发明所针对的是当归挥发油中主要和重要的活性成分之一藁本内酯，并将其作为当归品质 的主要判断标准，从而快速的鉴定当归质量。不同的当归样品因产地、季节、炮制方式的不 同，其含水量、密度等都有细微的不同，而其需要的热解、分离和分析条件均不相同，据此得 出本发明中的条件范围。
[0054] 本发明选择PY-GC/MS技术对藁本内酯含量进行检测，是针对实际生产、生活中当 归因产地、季节、炮制等不同而品质不同的问题，提供一种藁本内酯的快速、微量的检测方 法，进而初步判断当归的质量。本发明具有操作简单，检测限低，实验重现性好，实验数据直 观可靠等特点，特别适用于微量样品检测（可低至10 y g)，并可对不同样品间的质量差别 进行定量的比较，应用性广，为当归的质量标准和中药现代化提供了一条可以参考的思路 和方法。
【主权项】
1. 一种藁本内酯的快速检测方法，其特征在于：包括以下步骤： 1) 准确称取当归或复方当归制品0.Ol~I.OOmg得样品，将样品加入热解杯中； 2) 采用快速热解-气相色谱-质谱联用仪对加入热解杯中的样品进行测定； 3) 经过步骤2)后，根据测定的原始色谱数据及质谱数据，定性样品中藁本内酯的色谱 峰，并获得样品中藁本内酯的相对含量。2. 根据权利要求1所述一种藁本内酯的快速检测方法，其特征在于：所述样品为块状 或粉末状固体。3. 根据权利要求1所述一种藁本内酯的快速检测方法，其特征在于：所述热解的条件 为：热解温度为100~400°C，热解时间为0. 1~2min。4. 根据权利要求1所述一种藁本内酯的快速检测方法，其特征在于：所述气相色谱的 工作条件为：载气为流速〇. 1~4.OmL/min的氦气，分流比为0~500 :1，升温程序为：初 始温度为40~80°C，并保持0~6min，然后以彡10°C/min升至200°C，然后以5~15°C/ min升至280°C，然后以5~20°C/min升至300~310°C后保持0~IOmin。5. 根据权利要求1所述一种藁本内酯的快速检测方法，其特征在于：所述质谱的工作 条件为：采用EI源、正离子检测，电子能量为40~120eV，离子源温度为200~250°C，单四 级杆温度为130~200 °C，扫描方式为全扫描方式，电子倍增器电压为1070~3120V，溶剂 延迟为〇? 1~lOmin。6. 根据权利要求1所述一种藁本内酯的快速检测方法，其特征在于：所述相对含量采 用面积归一化方法进行计算。7. 根据权利要求1所述一种藁本内酯的快速检测方法，其特征在于：所述藁本内酯的 色谱峰的定性采用NIST08软件的自动匹配计算。
【专利摘要】本发明提供一种藁本内酯的快速检测方法：1)样品的准备；2)PY-GC/MS检测；3)数据分析及定性和定量分析。本发明选择PY-GC/MS技术对当归中藁本内酯含量进行检测，是针对实际生产、生活中当归因产地、季节、炮制等不同而品质不同的问题，提供一种藁本内酯快速、微量的检测方法，进而初步判断当归的质量，本发明具有操作简单，检测限低，实验重现性好，实验数据直观可靠等特点，特别适用于微量样品检测，并可对不同当归样品间的质量差别进行定量的比较，应用性广，为当归的质量标准和中药现代化提供了一条可以参考的思路和方法。
【IPC分类】G01N30/88
【公开号】CN105203688
【申请号】CN201510599046
【发明人】陈福欣, 龚频, 周安宁, 马筱娴
【申请人】西安科技大学
【公开日】2015年12月30日
【申请日】2015年9月18日