1)螺旋藻为原核生物，其细胞壁结构与植物不同，无法通过纤维素酶的作用完全打开细胞壁，而经过溶菌酶的处理，富砸螺旋藻的细胞壁可被完全打开，细胞内的含砸蛋白等物质被释放至提取液中，有利于后续的提取过程；
(2)酶解时离心管采用水平放置的方式，加大了比表面积，有助于酶促反应的发生；
(3)本发明中酶促反应采用不同的酶对样品进行分步连续提取，排除不同酶之间的相互干扰，同时也将酶解后的酶解液与反应体系分离开，保证了酶解后样品中各游离形态砸的稳定性，同时也有利于下一步的酶促反应。
[0016](4)采用本发明对富砸螺旋藻样品进行测定，提取率达到50-80%，而采用传统的植物样品形态测定方法，不经过破壁，单纯只是直接利用蛋白酶K与蛋白酶XIV对样品进行酶解处理，且不进行分步酶解，其提取率不到20%，本发明在此基础上，将提取率最高可提高近4倍。
[0017](5)本发明中各步骤反应条件温和，实验采用的超声提取前处理过程以及各步的酶解等步骤均不会改变样品体内的砸形态，不会导致砸形态变化，更能真实的反映样品内砸形态的分布。
【具体实施方式】
[0018]下面结合具体实施例对本发明作进一步说明，以使本领域的技术人员可以更好的理解本发明并能予以实施，但所举实施例不作为对本发明的限定。
[0019]实施例1:富砸钝顶螺旋藻样品砸形态测定实施例选用的富砸钝顶螺旋藻总砸含量为1003 mg/kg (Dff)o
[0020](1)样品的前处理:取0.lg的经过研磨的富砸螺旋藻干样，加入5ml 0.lmol/L磷酸缓冲液进行超声提取；
(2)样品破壁酶解:对上述经过前处理的样品体系调节pH值至5-7，然后向其中加入50mg的溶菌酶，然后将离心管水平放置于30?50°C恒温振荡摇床中培养12_18h。
[0021](3)样品酶解:将上述反应体系的pH值调节至7.5，然后加入5 mg的蛋白酶K，然后将离心管水平放置于50°C恒温振荡摇床中8-12h。
[0022](4)样品分离后再酶解:将上述酶解后的样品于冷冻高速离心机中进行离心分离，转速为10000 rpm，离心时间15_30min，取离心后的上清液过0.22 μ m水系膜待测，将离心后的沉淀部分继续加入5ml缓冲液，调节pH值至7.5，加入5 mg的蛋白酶XIV，然后将离心管水平放置于37°C恒温振荡摇床中8-12h。
[0023](5)样品分离后再酶解:将上述酶解后的样品于冷冻高速离心机中进行离心分离，转速为10000 rpm,离心时间15_30min，取离心后的上清液过0.22 μ m水系膜待测，将离心后的沉淀部分继续加入5ml缓冲液，调节pH值至1.5-2.5，加入50 mg的胃蛋白酶，然后将离心管水平放置于37°C恒温振荡摇床中18-24h。
[0024](6)样品分离后再酶解:将上述酶解后的样品于冷冻高速离心机中进行离心分离，转速为10000 rpm,离心时间15_30min，取离心后的上清液过0.22 μ m水系膜待测，将离心后的沉淀部分继续加入5ml缓冲液，调节pH值至7.0-8.0，加入50 mg的胰蛋白酶，然后将离心管水平放置于37°C恒温振荡摇床中18-24h。
[0025](7)样品分离:将上述酶解后的样品于冷冻高速离心机中进行离心分离，转速为10000 rpm，离心时间15_30min，取离心后的上清液过0.22 μ m水系膜待测。
[0026](8)上机测定:对上述四个步骤中过膜后的酶解液采用高效液相色谱法与氢化物发生-原子荧光光谱法(HPLC-HG-AFS)联用上机测定样品中的砸形态。
[0027]实施效果:
经过形态测定分析，富砸螺旋藻形态以砸代半胱氨酸(SeCys)为主，有机砸比例达到65%，砸形态提取率为50%。
[0028]实施例2:富砸钝顶螺旋藻样品砸形态测定实施例选用的富砸钝顶螺旋藻总砸含量为12 mg/kg (Dff)o
[0029](1)样品的前处理:取0.2g的经过研磨的富砸螺旋藻干样，加入5ml 0.2mol/LTris-HCl缓冲液进行超声提取；
(2)样品破壁酶解:对上述经过前处理的样品体系调节pH值至5-7，然后向其中加入10mg的溶菌酶，然后将离心管水平放置于30?50°C恒温振荡摇床中培养12_18h。
[0030](3)样品酶解:将上述反应体系的pH值调节至7.5，然后加入1 mg的蛋白酶K，然后将离心管水平放置于50°C恒温振荡摇床中8-12h。
[0031](4)样品分离后再酶解:将上述酶解后的样品于冷冻高速离心机中进行离心分离，转速为10000 rpm,离心时间15_30min，取离心后的上清液过0.22 μ m水系膜待测，将离心后的沉淀部分继续加入5ml缓冲液，调节pH值至7.5，加入1 mg的蛋白酶XIV，然后将离心管水平放置于37°C恒温振荡摇床中8-12h。
[0032](5)样品分离后再酶解:将上述酶解后的样品于冷冻高速离心机中进行离心分离，转速为10000 rpm,离心时间15_30min，取离心后的上清液过0.22 μ m水系膜待测，将离心后的沉淀部分继续加入5ml缓冲液，调节pH值至1.5-2.5，加入20 mg的胃蛋白酶，然后将离心管水平放置于37°C恒温振荡摇床中18-24h。
[0033](6)样品分离后再酶解:将上述酶解后的样品于冷冻高速离心机中进行离心分离，转速为10000 rpm,离心时间15_30min，取离心后的上清液过0.22 μ m水系膜待测，将离心后的沉淀部分继续加入5ml缓冲液，调节pH值至7.0-8.0，加入20 mg的胰蛋白酶，然后将离心管水平放置于37°C恒温振荡摇床中18-24h。
[0034](7)样品分离:将上述酶解后的样品于冷冻高速离心机中进行离心分离，转速为10000 rpm，离心时间15_30min，取离心后的上清液过0.22 μ m水系膜待测。
[0035](8)上机测定:对上述四个步骤中过膜后的酶解液采用高效液相色谱法与氢化物发生-原子荧光光谱法(HPLC-HG-AFS)联用上机测定样品中的砸形态。
[0036]实施效果:
经过形态测定分析，富砸钝顶螺旋藻形态以砸代半胱氨酸(SeCys )为主，有机砸比例达到95%，砸形态提取率为80%。
[0037]实施例3:富砸盐泽螺旋藻样品砸形态测定实施例选用的富砸盐泽螺旋藻总砸含量为117 mg/kg (Dff)o
[0038](1)样品的前处理:取0.2g的经过研磨的富砸盐泽螺旋藻干样，加入5ml 0.lmol/L磷酸缓冲液进行超声提取；
(2)样品破壁酶解:对上述经过前处理的样品体系调节pH值至5-7，然后向其中加入25mg的溶菌酶，然后将离心管水平放置于30?50°C恒温振荡摇床中培养12_18h。
[0039](3)样品酶解:将上述反应体系的pH值调节至7.5，然后加入2 mg的蛋白酶K，然后将离心管水平放置于50°C恒温振荡摇床中8-12h。
[0040](4)样品分离后再酶解:将上述酶解后的样品于冷冻高速离心机中进行离心分离，转速为10000 rpm,离心时间15_30min，取离心后的上清液过0.22 μ m水系膜待测，将离心后的沉淀部分继续加入5ml缓冲液，调节pH值至7.5，加入2 mg的蛋白酶XIV，然后将离心管水平放置于37°C恒温振荡摇床中8-12h。
[0041](5)样品分离:将上述酶解后的样品于冷冻高速离心机中进行离心分离，转速为10000 rpm，离心时间15_30min，取离心后的上清液过0.22 μ m水系膜待测。
[0042](6)上机测定:对上述两个步骤中过膜后的酶解液采用高效液相色谱法与氢化物发生-原子荧光光谱法(HPLC-HG-AFS)联用上机测定样品中的砸形态。
[0043]实施效果:
经过形态测定分析，富砸盐泽螺旋藻形态以砸代半胱氨酸(SeCys )为主，有机砸比例达到76%，砸形态提取率为73%。
[0044]实施例4:富砸盐泽螺旋藻样品砸形态测定实施例选用的富砸盐泽螺旋藻总砸含量为651 mg/kg (Dff)o
[0045](1)样品的前处理:取0.2g的经过研磨的富砸盐泽螺旋藻干样，加入5ml 0.2mol/L Tris-HCl缓冲液进行超声提取；
(2)样品破壁酶解:对上述经过前处理的样品体系调节pH值至5-7，然后向其中加入30mg的溶菌酶，然后将离心管水平放置于30?50°C恒温振荡摇床中培养12_18h。
[0046](3)样品酶解:将上述反应体系的pH值调节至7.5，加入5 mg的蛋白酶XIV，然后将离心管水平放置于37°C恒温振荡摇床中8-12h。
[0047](4)样品分离:将上述酶解后的样品于冷冻高速离心机中进行离心分离，转速为10000 rpm，离心时间15_30min，取离心后的上清液过0.22 μ m水系膜待测。
[0048](5)上机测定:对上述过膜后的酶解液采用高效液相色谱法与氢化物发生-原子荧光光谱法(HPLC-HG-AFS)联用上机测定样品中的砸形态。
[0049]实施效果:
经过形态测定分析，富砸盐泽螺旋藻形态以砸代半胱氨酸(SeC