一种经血宁胶囊的质量检测方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种中药组合物制剂的质量检测方法，特别涉及经血宁胶囊的质量检 测方法。
【背景技术】
[0002] 经血宁胶囊是由广西金秀圣堂药业有限责任公司生产的中成药，国药准字 B20020057。其主要功效为：祛瘀止血；适用于瘀血阻滞症月经过多，经色紫黑有块，腹痛 拒按等症；也可用于轻中度消化道出血的辅助治疗；也可用于轻中度消化道出血的辅助治 疗。其由白背叶、扶芳藤二味药材经加工制成中药胶囊制剂，广西金秀圣堂药业有限责任公 司和广西大学化学化工学院在文献《经血宁颗粒的质量控制标准物质的筛选》一文(大众科 技；2014年2月总第16卷174期）中确立了经血宁颗粒的质量控制标准，作者：许子竞， 唐艳秀，庞国。该经血宁颗粒以其中的主要原料之一白背叶，经分离纯化得到化合物I，通 过定性鉴定为黄酮苷类；HPLC检测为单一纯化合物；MS测定化学分子量为564 ;H NMR和C NMR数据分析与Corymboside -致，为伞房决明苷，分子式为C26H28O14故以化合物I作为经 血宁颗粒的质量控制标准物质。
[0003] 但单纯以其中原料之一来定性或检测经血宁胶囊，并作为主要质量控制标准还存 在诸多问题，发明人通过对经血宁胶囊的物化性质分析，同步定性鉴别白背叶和扶芳藤，并 结合紫外-分光光度法和高效液相色谱对其含有的有效物质进行含量检测，可以有效控制 经血宁胶囊产品的质量。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种能全面定性、定量检测药物成 分的经血宁胶囊质量检测方法，本方法具有检测手段简单、检测结果更加准确、可靠的特 点。
[0005] 本发明是通过以下技术方案实现的： 经血宁胶囊的质量检测方法，包括以下三种过程：用薄层色谱法鉴别定性；用紫外-分 光光度法测定总黄酮（以芦丁计）成分的含量；用高效液相色谱法测定山奈酚-3，7-二鼠 李糖苷和芹菜素-7-0-β -D-葡萄糖苷两种成分的含量。
[0006] (1)采用薄层色谱法鉴别扶芳藤、白背叶的方法：扶芳藤以山奈酚-3, 7-二鼠李糖 苷（C27H3qO16)计(还包括山奈酸_3，7-(f -乙酰基）-〇-a-L_二鼠李糖苷)，白背叶以序 菜素_7_〇_ β _D_匍萄糖苷计。
[0007] a供试品溶液制备： 取本品内容物2g，置50ml圆底烧瓶中，加水4ml，搅拌，制成流动膏状物，加乙酸乙酯 20ml，70°C水浴回流2小时，放冷，将滤液移至分液漏斗，吸取上层乙酸乙酯层，浓缩至4ml， 备用； b对照溶液制备： 取扶芳藤对照药材2g，加70%乙醇30ml，置水浴上加热回流1小时，滤过，药渣用70% 乙醇洗3次，每次10ml，合并乙醇溶液，蒸干，残渣加30ml水溶解，用乙酸乙酯萃取3次，每 次20ml，回收乙酸乙酯，残渣加甲醇Iml使之溶解，制成扶芳藤对照药材溶液，备用； 取白背叶对照药材lg，按"扶芳藤对照药材溶液的制备方法"制成白背叶对照药材溶 液，备用； 取山奈酚-3, 7-二鼠李糖苷、山奈酚-3，7-(V -乙酰基）-O-a-L-二鼠李糖苷和芹 菜素-7-0-β -D-葡萄糖苷对照品，加甲醇制成Iml各含Img的溶液，作为对照品溶液，备 用； 薄层色谱法试验：按（中国药典2010版附录VI Β)试验，吸取供试品溶液10μ1、上述 两种对照药材溶液和对照品溶液各2 μ 1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇-乙 酸（40 : 10 : 0.1)为展开剂展开，取出晾干；在紫外灯（254nm)下观察；在供试品色谱中， 与对照品及对照药材色谱相应的位置上显相同颜色的斑点； (2) 紫外-分光光度法测定总黄酮（以芦丁计）含量： a对照品洛液的制备 取干燥至恒重的芦丁对照品30mg，精密称定，置100mL容量瓶中，加无水乙醇至刻度， 摇匀，制成每1ml含0. 3mg的芦丁标准品溶液；精密量取IOml溶液，置50ml量瓶中，加60% 乙醇至刻度，摇匀，即得(每1ml含无水芦丁 60 μ g); b标准曲线绘制 分别精密吸取芦丁对照品溶液Iml、2ml、3ml、4ml、5ml分别置IOml量瓶中，各加 0· lmol/L三氯化铝溶液2ml、lmol/L醋酸钾溶液3ml，加60%乙醇至刻度，摇勾，放置30分 钟；以相应试剂为空白，立即照紫外-可见分光光度法（《中国药典》2010年版一部，附录 VA)，在420nm的波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标、浓度为横坐标绘制标准曲线； c供试品溶液制备 取本品内容物〇. lg，精密称定，置IOml量瓶中，加60%乙醇7ml，置水浴上微热，并时时 振摇30分钟，放冷，加60%乙醇至刻度，摇匀；精密量取溶液Iml，置IOml量瓶中，加0.1mol/ L三氯化铝溶液2ml、lmol/L醋酸钾溶液3ml，加60 %乙醇至刻度，摇匀，放置30分钟，离心 取上清液作供试品溶液，备用；另取本品内容〇. lg，精密称定，置IOml量瓶中，加60%乙醇 稀释至刻度，精密量取Iml，置IOml量瓶中，加60%乙醇至刻度，摇匀，作为空白溶液，依法测 定吸光度，从标准曲线上读出样品总黄酮的含量；每粒经血宁胶囊（〇. 35g)含总黄酮以无 水芦丁计，不得少于56. Omg ; (3) 高效液相色谱法测定山奈酚-3，7-二鼠李糖苷和芹菜素-7-0-β -D-葡萄糖苷的 含量： a色谱条件 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-甲醇=10 :2 (V/V)为流动相A ;水-磷 酸=100 :0.05 (V/V)为流动相B，按如下方式进行梯度洗脱：
检测波长为340 nm，理论塔板数按山奈酚-3，7-二鼠李糖苷计算应不低于3000 ; b对照品洛液的制备 分别精密称取对照品山奈酚-3，7-二鼠李糖苷8. 8mg、芹菜素-7-0-β -D-葡萄糖苷 2. 5mg，分别置于IOml容量瓶中，加甲醇定容，摇勾，分别制成每1ml中含0. 88mg和0. 25mg 的溶液，作为对照品溶液； c供试品溶液的制备取装量差异项下的内容物约l.Og，精密称定，置具塞锥形瓶中， 加60%甲醇25ml，称定重量，水浴回流30分钟，放冷，用60%甲醇补足减失质量，摇勾，滤过， 即得； d测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各ιομL，注入液相色谱仪，测定，即得； 每粒经血宁胶囊（0.35g)含扶芳藤以山奈酚-3,7-二鼠李糖苷（C27H31A6)计，不少 于0. 30mg;，每粒经血宁胶囊（0. 35g)含白背叶以芹菜素-7-0-β-D-葡萄糖苷计，不少于 4. 5mg〇
[0008] 本发明还对扶芳藤和白背叶有效成分含量测定方法的方法学进行了考察，结果如 下： (1)线性关系：精密量取山奈酚-3，7-二鼠李糖苷对照品母液（0. 88mg/ml)和芹菜 素-7-0- β -D-葡萄糖苷对照品母液（0· 25mg/ml) 0· 25，0· 5，1，2，5ml，置于IOml量瓶中， 加流动相稀释至刻度，摇匀。按本发明的方法，注入高效液相色谱仪中，测定山奈酚-3， 7-二鼠李糖苷和芹菜素-7-0-β -D-葡萄糖苷峰面积。以进样量(m)为横坐标，峰面积（A) 为纵坐标，绘制标准曲线，计算回归方程：山奈酚-3，7-二鼠李糖苷：A=153. 8m-126. 4， r=0. 9997 ;芹菜素-7-0-β-?-葡萄糖苷：A=2001.7m-2038. 3, r=0. 9994,说明山奈酚-3， 7-二鼠李糖苷在0. 22-4. 4mg/ml浓度下线性关系良好，芹菜素-7-0-β -D-葡萄糖苷在 0· 0625mg-l. 25mg/ml浓度下线性关系良好。
[0009] (2)精密度试验：取浓度为0.88mg/ml的山奈酚-3，7-二鼠李糖苷和浓度为 0. 25mg/ml芹菜素-7-0-β -D-葡萄糖苷的对照样品溶液，各精密吸取10ul，注入液相色谱 仪，测定两个有效成分的峰面积，连续测定6次，结果见下表1。
[0010] 表1山奈酚-3，7-二鼠李糖苷精密度试验结果
表2芹菜素-7-0- β -D-葡萄糖苷精密度试验结果
以上结果表明，本方法精密度良好。
[0011] (3)稳定性试验：取本品供试品溶液，每隔一定时间，注入液相色谱仪，测定山奈 酚-3，7-二鼠李糖苷和芹菜素-7-0- β -D-葡萄糖苷峰面积，结果见表3和表4。
[0012] 表3山奈酸-3，7-二鼠李糖苷稳定性试验结果
表4芹菜素-7-0- β -D-葡萄糖苷稳定性试验结果
以上结果表明，样品在4小时内稳定，本方法稳定性良好。
[0013] (4)重现性试验：取本品5份，按本发明方法测定，结果见表5。
[0014] 表5山奈酚-3，7-二鼠李糖苷重现性试验结果
表6芹菜素-7-0- β -D-葡萄糖苷重现性试验结果
以上结果表明，本方法重现性良好。
[0015] (5)回收率试验：精密量取本品2ml，精密加入对照品母液适量，按本发明方法测 定山奈酚-3, 7-二鼠李糖苷和芹菜素-7-0- β -D-葡萄糖苷含量，按下式计算回收率，结果 见表7。
[0016] 回收率=(测得量-已知量）/加入量*100 表7山奈酚-3，7-二鼠李糖苷回收率试验结果
表8序菜素-7-〇-β -D-匍萄糖苷回收率试验结果
以上结果表明，本方法回收率良好。
[0017] ( 6 )阴性干扰试验：取不含扶芳藤和白背叶药材制成的阴性对照品，按本发明方法 测定山奈酚-3，7-二鼠李糖苷和芹菜素-7-0- β -D-葡萄糖苷的峰面积，结果表明无干扰。
[0018] (7)样品测定：取本品5批，按本发明方法，测定山奈酚-3，7-二鼠李糖苷和芹菜 素-7-0- β -D-葡萄糖苷含量，结果见表 表9 5批清浊祛毒丸中有效成分含量测定结果
本发明有益效果是：使用薄层鉴别方法鉴别白背叶和扶芳藤两种有效成分，使用紫 外-分光光度测定总黄酮含量，以无水芦丁含量计；使用高效液相色谱法测定山奈酚-3， 7-二鼠李糖苷和芹菜素-7-0- β -D-葡萄糖苷含量，方法简便、结果准确，重现性好。现有文 献中标准中只是对白背叶进行了定性鉴别，而没有对其进行定量检测，局限性大，难于控制 经血宁胶囊的质量，本发明建立了从定性、定量两方面对经血宁胶囊中的主要成分白背叶 和扶芳藤进行质量控制，大大提高了质量控制的准确性。通过以上检测项目对药品质量进 行了有效的控制，具有稳定、快速、灵敏、可靠的特点，进一步确保产品内在质量，对促进产 品销售，保证患者用药安全意义重大。
【具体实施方式】
[0019] 实施例1 采用以下质量检测方法对经血宁胶囊进行质量控制。
[0020] (1)采用薄层色谱法鉴别扶芳藤、白背叶： a供试品溶液制备： 取经血宁胶囊内容物2g，置50ml圆底烧瓶中，加水4ml，搅拌，制成流动膏状物，加乙酸 乙酯20ml，