70°C水浴回流2小时，放冷，将滤液移至分液漏斗，吸取上层乙酸乙酯层，浓缩至 4ml，备用。
[0021] b对照溶液制备： 取扶芳藤对照药材2g，加70%乙醇30ml，置水浴上加热回流1小时，滤过，药渣用70% 乙醇洗3次，每次10ml，合并乙醇溶液，蒸干，残渣加30ml水溶解，用乙酸乙酯萃取3次，每 次20ml，回收乙酸乙酯，残渣加甲醇Iml使之溶解，制成扶芳藤对照药材溶液，备用。
[0022] 取白背叶对照药材lg，按"扶芳藤对照药材溶液的制备方法"制成白背叶对照药材 溶液，备用。
[0023] 取山奈酚-3, 7-二鼠李糖苷、山奈酚-3，7-⑷-乙酰基）-0-a-L-二鼠李糖苷 和芹菜素-7-0-β -D-葡萄糖苷对照品，加甲醇制成Iml各含Img的溶液，作为对照品溶液， 备用。
[0024] 薄层色谱法试验：按（中国药典2010版附录VI Β)试验，吸取供试品溶液10μ1、 上述两种对照药材溶液和对照品溶液各2 μ 1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-甲 醇-乙酸（40 : 10 : 0.1)为展开剂展开，取出晾干；在紫外灯（254nm)下观察。
[0025] 结果如下：在供试品经血宁胶囊色谱中，与对照品及对照药材色谱相应的位置上 显相同颜色的斑点；无干扰，无拖尾现象。
[0026] (2)紫外-分光光度法测定总黄酮（以芦丁计）含量： a对照品洛液的制备 取干燥至恒重的芦丁对照品30mg，精密称定，置100mL容量瓶中，加无水乙醇至刻度， 摇匀，制成每1ml含0. 3mg的芦丁标准品溶液；精密量取IOml溶液，置50ml量瓶中，加60% 乙醇至刻度，摇匀，即得(每1ml含无水芦丁 60 μ g)。
[0027] b标准曲线绘制 分别精密吸取芦丁对照品溶液Iml、2ml、3ml、4ml、5ml分别置IOml量瓶中，各加 0· lmol/L三氯化铝溶液2ml、lmol/L醋酸钾溶液3ml，加60%乙醇至刻度，摇勾，放置30分 钟；以相应试剂为空白，立即照紫外-可见分光光度法（《中国药典》2010年版一部，附录 VA)，在420nm的波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标、浓度为横坐标绘制标准曲线。
[0028] c供试品溶液制备 取经血宁胶囊，批号2014010130批抽样检测，取内容物0. lg，精密称定，置IOml量瓶 中，加60%乙醇7ml，置水浴上微热，并时时振摇30分钟，放冷，加60%乙醇至刻度，摇匀；精 密量取溶液lml，置IOml量瓶中，加0. lmol/L三氯化铝溶液2ml、lmol/L醋酸钾溶液3ml， 加60 %乙醇至刻度，摇匀，放置30分钟，离心取上清液作供试品溶液，备用；另取本品内容 0. lg，精密称定，置IOml量瓶中，加60%乙醇稀释至刻度，精密量取lml，置IOml量瓶中，加 60%乙醇至刻度，摇匀，作为空白溶液，依法测定吸光度，从标准曲线上读出样品总黄酮的含 量。结果如下： 该批经血宁胶囊含总黄酮以无水芦丁（C27H31A6)计，为75. Omg ; (3)高效液相色谱法测定山奈酚-3，7-二鼠李糖苷和芹菜素-7-0- P-D-葡萄糖苷的 含量： a色谱条件 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-甲醇=10 :2 (V/V)为流动相A ;水-磷 酸=100 :0.05 (V/V)为流动相B，按如下方式进行梯度洗脱： Omin : A-B 为 16 :84 ; 25min : A-B 为 20 :80 ; 50min :A-B 为 40:60 ; 80min :A-B 为 80:20 ; 检测波长为340 nm，理论塔板数按山奈酚-3，7-二鼠李糖苷计算应不低于3000。
[0029] b对照品溶液的制备 分别精密称取对照品山奈酚-3，7-二鼠李糖苷8. 8mg、芹菜素-7-0-β -D-葡萄糖苷 2. 5mg，分别置于IOml容量瓶中，加甲醇定容，摇勾，分别制成每1ml中含0. 88mg和0. 25mg 的溶液，作为对照品溶液。
[0030] C供试品溶液的制备取装量差异项下的内容物约I. 〇g，精密称定，置具塞锥形瓶 中，加60%甲醇25ml，称定重量，水浴回流30分钟，放冷，用60%甲醇补足减失质量，摇勾，滤 过，即得。
[0031] d测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各ιομL，注入液相色谱仪，测定，即得。
[0032] 每粒经血宁胶囊（0.35g)含扶芳藤以山奈酚-3,7-二鼠李糖苷计，不少于 0. 30mg;，每粒经血宁胶囊（0. 35g)含白背叶以芹菜素-7-0-β -D-葡萄糖苷计，不少于 4. 5mg。发明人按照以上方法还对从2012年-2014年生产的经血宁胶囊进行了抽检，结果 如下： 2012-2014年经血宁胶囊不同批次抽检含量测定结果
可以看出，通过对2012-2014年不同批次生产的经血宁胶囊进行含量检测，可以有效 保证产品质量，经反复试验，该质量检测方法专属性、重复性好，因此做为经血宁胶囊的质 量控制定性检测方法，对经血宁胶囊进行质量控制。
【主权项】
1. 一种经血宁胶囊的质量检测方法，其特征在于：包括以下三种检测过程：（1)用薄层 色谱法鉴别定性；（2)用紫外-分光光度法测定总黄酮中芦丁成分的含量；（3)用高效液相 色谱法测定山奈酚-3，7-二鼠李糖苷和芹菜素-7-0-f-D-葡萄糖苷两种成分的含量； 所述采用薄层色谱法鉴别扶芳藤、白背叶的方法如下： a供试品溶液制备： 取本品内容物2g，置50ml圆底烧瓶中，加水4ml，搅拌，制成流动膏状物，加乙酸乙酯 20ml，70°C水浴回流2小时，放冷，将滤液移至分液漏斗，吸取上层乙酸乙酯层，浓缩至4ml， 备用； b对照溶液制备： 取扶芳藤对照药材2g，加70%乙醇30ml，置水浴上加热回流1小时，滤过，药渣用70% 乙醇洗3次，每次10ml，合并乙醇溶液，蒸干，残渣加30ml水溶解，用乙酸乙酯萃取3次，每 次20ml，回收乙酸乙酯，残渣加甲醇lml使之溶解，制成扶芳藤对照药材溶液，备用； 取白背叶对照药材lg，按"扶芳藤对照药材溶液的制备方法"制成白背叶对照药材溶 液，备用； 取山奈酚-3, 7-二鼠李糖苷、山奈酚-3，7-(V-乙酰基）-〇_a-L-二鼠李糖苷和芹 菜素-7-0-β-D-葡萄糖苷对照品，加甲醇制成lml各含lmg的溶液，作为对照品溶液，备 用； 薄层色谱法试验：按中国药典2010版附录VIB试验，吸取供试品溶液10μ1、上述两 种对照药材溶液和对照品溶液各2μ1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇-乙酸 体积比=40 : 10 : 0.1为展开剂展开，取出晾干；在254nm紫外灯下观察；在供试品色谱 中，与对照品及对照药材色谱相应的位置上显相同颜色的斑点； 所述紫外-分光光度法测定总黄酮以芦丁计含量的方法如下：a对照品洛液的制备 取干燥至恒重的芦丁对照品30mg，精密称定，置100ml容量瓶中，加无水乙醇至刻度， 摇匀，制成每lml含0. 3mg的芦丁标准品溶液；精密量取10ml溶液，置50ml量瓶中，加60% 乙醇至刻度，摇匀，即得，此时，每lml含无水芦丁 60μg; b标准曲线绘制 分别精密吸取芦丁对照品溶液lml、2ml、3ml、4ml、5ml分别置10ml量瓶中，各加 0·lmol/L三氯化铝溶液2ml、lmol/L醋酸钾溶液3ml，加60%乙醇至刻度，摇勾，放置30分 钟；以相应试剂为空白，立即照紫外-可见分光光度法（《中国药典》2010年版一部，附录 VA)，在420nm的波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标、浓度为横坐标绘制标准曲线； c供试品溶液制备 取本品内容物〇.lg，精密称定，置l〇ml量瓶中，加60%乙醇7ml，置水浴上微热，并时时 振摇30分钟，放冷，加60%乙醇至刻度，摇匀；精密量取溶液lml，置10ml量瓶中，加0.lmol/ L三氯化铝溶液2ml、lmol/L醋酸钾溶液3ml，加60 %乙醇至刻度，摇匀，放置30分钟，离心 取上清液作供试品溶液，备用；另取本品内容〇.lg，精密称定，置l〇ml量瓶中，加60%乙醇 稀释至刻度，精密量取lml，置10ml量瓶中，加60%乙醇至刻度，摇匀，作为空白溶液，依法测 定吸光度，从标准曲线上读出样品总黄酮的含量；每粒经血宁胶囊（〇. 35g)含总黄酮以无 水芦丁（C27H3Q016)计，不得少于56.Omg; 所述高效液相色谱法测定山奈酚-3，7-二鼠李糖苷和芹菜素-7-0-f-D-葡萄糖苷的 含量方法如下： a色谱条件 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-甲醇=10 :2 (V/V)为流动相A;水-磷 酸=100 :0.05 (V/V)为流动相B，按如下方式进行梯度洗脱： Omin:A-B为 16 :84 ; 25min:A-B为 20 :80 ; 50min:A-B为 40:60 ; 80min:A-B为 80:20 ; 检测波长为340nm，理论塔板数按山奈酚-3，7-二鼠李糖苷计算应不低于3000 ;b对照品洛液的制备 分别精密称取对照品山奈酚-3，7-二鼠李糖苷8. 8mg、芹菜素-7-0-β-D-葡萄糖苷 2. 5mg，分别置于10ml容量瓶中，加甲醇定容，摇勾，分别制成每lml中含0. 88mg和0. 25mg 的溶液，作为对照品溶液； c供试品溶液的制备取装量差异项下的内容物约l.Og，精密称定，置具塞锥形瓶中， 加60%甲醇25ml，称定重量，水浴回流30分钟，放冷，用60%甲醇补足减失质量，摇勾，滤过， 即得； d测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各ιομL，注入液相色谱仪，测定，即得； 每粒经血宁胶囊，重量0. 35g，含扶芳藤以山奈酚-3,7-二鼠李糖苷（C27H3(A6)计，不少 于0. 30mg;，每粒经血宁胶囊，重量0. 35g，含白背叶以芹菜素-7-0-β-D-葡萄糖苷计，不少 于 4. 5mg〇
【专利摘要】本发明涉及一种经血宁胶囊的质量检测方法，属于中药技术领域。包括用薄层色谱法鉴别定性其主要成分白背叶和扶芳藤；用紫外-分光光度法测定经血宁胶囊中总黄酮的含量；用高效液相色谱法测定山奈酚-3,7-二鼠李糖苷和芹菜素-7-O-<i>β</i>-D-葡萄糖苷的含量，总黄酮含量（以无水芦丁计）每粒经血宁胶囊（0.35g）含量不低于56mg，山奈酚-3,7-二鼠李糖苷和芹菜素-7-O-<i>β</i>-D-葡萄糖苷的含量每粒不低于0.30mg和4.5mg，本方法首次使用定性鉴别和定量检测的方法对经血宁胶囊进行检测，保证了质量检测标准的准确性、先进性和有效性。
【IPC分类】G01N33/15
【公开号】CN105319333
【申请号】CN201510763853
【发明人】方显明, 何天富, 黎明
【申请人】广西中医药大学
【公开日】2016年2月10日
【申请日】2015年11月11日