为对位 抗体），进入强磁室被强磁体磁化，样品中检测目标被捕获，本系统基于毛细力作用，依靠流 体驱动提供磁珠富集过程，完成对目标的检测。本发明能够为包被抗体提供基于共价键的 唯一结合途径，高灵敏度地控制反应的进行，提供精准即时检测方案。
[0210] 以上实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述实施例 对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施 例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换；而这些修改或者 替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的精神和范围。
【主权项】
1. 一种微流控芯片，其特征在于，包括： 加样室、Y型结构通道和回收室； Y型结构通道分为上部的漏斗状通道和下部的柱形通道；所述漏斗状通道的底部为免 疫标记模块；免疫标记模块上部为滤血模块； 下部的柱形通道底端分岔为一对并行的免疫通道；每个免疫通道末端连接一个回收 室； 柱形通道设置上下两个腔室，上部腔室为强磁室，下部腔室为质控室。2. 根据权利要求1所述的微流控芯片，其特征在于，所述滤血模块为玻纤或无纺布材 料。3. 根据权利要求1所述的微流控芯片，其特征在于，所述滤血模块以兔抗人红细胞蛋 白与凝集素按质量比2:1处理，冻干制得。4. 根据权利要求1-3任一项所述的微流控芯片，其特征在于，所述滤血模块中间部位 还包括结合抗体的免疫磁珠，所述免疫磁珠经过活化剂活化。5. 根据权利要求1所述的微流控芯片，其特征在于，所述微流控芯片强磁室处的底部 嵌有强磁片。6. -种捕获心肌标志物的方法，其特征在于，所述方法应用于权利要求1-5任一项所 述的微流控芯片，所述方法包括： 制作包被有能与血液中心肌标志物特异性结合的抗体的免疫磁珠； 对所述心肌标志物的对位抗体标记免疫标识物； 将包被抗体的免疫磁珠输入所述芯片的滤血模块，将标记对位抗体的免疫标识物输入 免疫标记模块； 将一定量心肌标记物样本与平衡液的混合液加至加样室； 启动检测设备，反应预设时间，对预定检测项目结果进行检测。7. 根据权利要求6所述的方法，其特征在于，不同的心肌标志物具有不同的磁珠包被 体系。8. 根据权利要求6所述的方法，其特征在于，不同的心肌标志物具有不同的标识物； 所述标识物包括：量子点、荧光微球和胶体金。9. 根据权利要求6-8任一项所述的方法，其特征在于，所述心肌标志物包括：心肌肌 钙蛋白cTnl、肌红蛋白MYO、C反应蛋白CRP、心脏型脂肪酸结合蛋白FABP、N端脑钠肽前体 NT-proBNP、髓过氧化物酶MPO。10. 根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述心肌标志物为心肌肌钙蛋白cTnl 时，包被抗体的免疫磁珠的制备包括： 免疫磁珠平衡MES缓冲液至所述MES缓冲液的pH为4~5,离子强度为0. 1M; 在平衡PH后的溶液中，分别加入EDC和NHS，至EDC与NHS在溶液中的浓度均为lmg/mL，反应20分钟后离心弃上清； 以所述平衡前的MES缓冲液复溶弃上清后的沉淀物； 复溶得到的溶液中加入抗体8E10至所述抗体8E10的浓度为0. 5mg/mL; 混合包被1小时，加入BSA至所述BSA的浓度为1 %终止反应。11. 根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述心肌标志物为心肌肌钙蛋白cTnl 时，所述心肌标志物标记免疫标识物包括： lmg量子点平衡pH为7. 5~8. 5、浓度0. 01M的PBS缓冲液至所述量子点的浓度为 0.lmg/mL； 在平衡后的溶液中，分别加入EDC与NHS，至所述EDC和NHS的浓度均为0. 5mg/mL，活 化30分钟后离心弃上清； 以所述平衡前的PBS缓冲液复溶弃上清后的沉淀物； 在复溶后的溶液中，加入抗体7G2,标记20分钟，加入BSA至所述BSA的浓度为1 %终 止反应。12. 根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述心肌标志物为肌红蛋白MYO时，包被 抗体的免疫磁珠的制备包括： 免疫磁珠平衡PB缓冲液至缓冲液的pH为7~8,离子强度为0. 1M; 在平衡后的溶液中分别加入H)C与NHS，至所述EDC与NHS的浓度均为lmg/mL，反应20 分钟后离心弃上清； 以所述平衡前的PB缓冲液复溶弃上清后沉淀物； 在复溶得到的溶液中，加入抗体4E2至所述抗体4E2的浓度为0. 5mg/mL，混合包被1小 时，加入BSA至所述BSA的浓度为1 %终止反应。13. 根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述心肌标志物为肌红蛋白MYO时，所述 心肌标志物标记免疫标识物包括： lmg荧光微球平衡pH为7~9、浓度0. 01M的PBS缓冲液至荧光微球的浓度为0.lmg/ mL； 在平衡后的溶液中分别加入EDC与NHS，至所述EDC与NHS的浓度均为0. 5mg/mL，活化 30分钟后离心弃上清； 以所述平衡前的PBS缓冲液复溶弃上清后的沉淀物； 在复溶后的溶液中，加入抗体MYO,标记20分钟，加入BSA至所述BSA的浓度为1 %终 止反应。14. 根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述心肌标志物为C反应蛋白CRP时，包 被抗体的免疫磁珠的制备包括： 免疫磁珠平衡MES缓冲液至pH为4. 5~5. 5,离子强度为0. 1M; 在平衡后的溶液中分别加入H)C与NHS，至所述EDC与NHS的浓度均为lmg/mL，反应20 分钟后离心弃上清； 以所述平衡前的MES缓冲液复溶弃上清后的沉淀物，加入抗体CRP135至所述抗体CRP135在复溶后的溶液中的浓度为0. 5mg/mL; 混合包被1小时，加入BSA至所述BSA在复溶后的溶液中的浓度为1 %终止反应。15. 根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述心肌标志物为C反应蛋白CRP时，所 述心肌标志物标记免疫标识物包括： 40nm胶体金溶液以1(20)3溶液平衡至胶体金溶液pH为8. 5-9. 5 ; 在平衡后的溶液中加入抗体CRP36,标记1小时； 标记1小时后，在溶液中加入BSA至所述BSA的浓度为1 %终止反应； 终止反应后离心，以离子强度为0. 1M、pH为7~9的PBS缓冲液复溶至终止反应时溶 液体积的0. 1倍。16. 根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述标志物为心脏型脂肪酸结合蛋白 FABP时，包被抗体的免疫磁珠的制备包括： 免疫磁珠平衡MES缓冲液至缓冲液pH为4~5,离子强度0. 1M; 平衡后的溶液中分别加入EDC与NHS，至所述EDC和NHS的浓度均为lmg/mL，反应20 分钟后离心弃上清； 以所述平衡前的MES缓冲液复溶弃上清后的沉淀物，在复溶后的溶液中加入抗体FABP5B5至浓度为1.Omg/mL，混合包被1小时，加入BSA至BSA浓度为1 %终止反应。17. 根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述标志物为心脏型脂肪酸结合蛋白 FABP时，所述心肌标志物标记免疫标识物包括： lmg量子点平衡pH为7~8、浓度为(λ01M的PBS溶液至量子点浓度为0·lmg/mL; 在平衡后的溶液中分别加入EDC与NHS，至EDC与NHS在溶液中的浓度均为0. 5mg/mL， 活化30分钟后，离心弃上清； 将弃上清之后的沉淀物以所述平衡前的PBS溶液复溶，加入抗体FABP28标记20分钟； 加入BSA至所述BSA浓度为1 %终止反应。18. 根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述心肌标志物为N端脑钠肽前体 NT-proBNP时，包被抗体的免疫磁珠的制备包括： 免疫磁珠平衡PBS缓冲液至缓冲液的pH为6~7,离子强度为0. 01M; 在平衡后的溶液中分别加入EDC与NHS，至所述EDC与NHS在溶液中的浓度均为lmg/mL，反应20分钟后离心弃上清； 以所述平衡前的PBS缓冲液复溶弃上清后的沉淀物，加入抗体18H5至所述抗体18H5 在复溶后的溶液中的浓度为lmg/mL; 混合包被1小时，加入BSA至所述BSA复溶后的溶液中的浓度为1 %终止反应。19. 根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述心肌标志物为N端脑钠肽前体 NT-proBNP时，所述心肌标志物标记免疫标识物包括： lmg量子点平衡pH为7. 5-8. 5、浓度为0. 01M的PBS缓冲液至量子点的浓度0.lmg/mL; 在平衡后的溶液中分别加入EDC与NHS，至所述EDC和NHS的浓度分别为0. 5mg/mL，活 化30分钟后离心弃上清； 以所述平衡前的PBS缓冲液复溶弃上清之后的沉淀物，加入抗体15F11，标记30分钟， 加入BSA至所述BSA在复溶后的溶液中的浓度为1 %终止反应。20. 根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述心肌标志物为髓过氧化物酶MP0时， 包被抗体的免疫磁珠的制备包括： 免疫磁珠平衡PB缓冲液至溶液pH为7. 5~8. 5,离子强度0. 01M; 在平衡后的溶液中分别加入EDC与NHS，至EDC与NHS在溶液中的浓度均为lmg/mL，反 应20分钟后离心弃上清； 以所述平衡前的PB缓冲液复溶弃上清后的沉淀物，在复溶后的溶液中加入抗体19H2 至所述抗体19H2的浓度为0. 5mg/mL; 混合包被1小时，加入BSA至所述BSA的浓度1 %终止反应。21. 根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述心肌标志物为髓过氧化物酶MP0时， 所述心肌标志物标记免疫标识物包括： lmg荧光微球平衡pH为6. 5~7. 5、浓度为0. 1M的PBS溶液至荧光微球的浓度为 0.lmg/mL； 在平衡后的溶液中分别加入EDC与NHS，至EDC与NHS在溶液中的浓度均为0. 5mg/mL， 活化30分钟后，离心弃上清； 以所述平衡前的PBS溶液复溶弃上清后的沉淀物，在复溶后的溶液中加入抗体18B7， 标记20分钟，加入BSA至所述BSA的浓度为1 %终止反应。22. -种捕获心肌标志物的方法，其特征在于，所述方法应用于权利要求1-5任一项所 述的微流控芯片，所述方法包括： 制作包被有能与血液中心肌标志物特异性结合的抗体的免疫磁珠； 对所述心肌标志物的对位抗体标记免疫标识物； 将标记对位抗体的免疫标识物输入免疫标记模块； 将一定量心肌标记物样本与平衡液的混合液加至加样室，所述平衡液中包含所述包被 抗体的免疫磁珠； 启动检测设备，反应预设时间，对结果进行检测。
【专利摘要】本发明实施例公开了一种基于磁珠包被抗体的微流控芯片及捕获心肌标志物的方法，应用于免疫磁珠包被结合抗体领域，防止包被抗体复溶于流体系统及被流体中抗原捕获脱离包被基材。所述微流控芯片包括：加样室、Y型结构通道和回收室；Y型结构通道分为上部的漏斗状通道和下部的柱形通道；所述漏斗状通道的底部为免疫标记模块；免疫标记模块上部为滤血模块；下部的柱形通道底端分岔为一对并行的免疫通道；每个免疫通道末端连接一个回收室；柱形通道设置上下两个腔室，上部腔室为强磁室，下部腔室为质控室。
【IPC分类】G01N33/533
【公开号】CN105424922
【申请号】CN201510900358
【发明人】胡飞, 熊晶, 张单单, 邱笑违, 余占江
【申请人】北京乐普医疗科技有限责任公司
【公开日】2016年3月23日
【申请日】2015年12月9日