色谱峰3倍与10倍信噪比（S/N)所对应的样 品中该物质的浓度分别确定为方法检出限（L0D)和定量下限（L0Q)，得到目标分析物的检 出限为0. 5 μ g/kg，定量下限为1. 5 μ g/kg (见表3)。标准溶液离子流图见图2。
[0022] 表3乌洛巧品的线性方程、相关系数和检出限、定量限
实施例1 腐竹的前处理：将20 g腐竹研磨成均匀的粉末或匀浆，准确称取2.00 g于离必管中， 加入5血己腊并置于超声萃取10 min, W 3000 r/min离必5 min,己腊相过无水硫酸钢， 转移至浓缩瓶浓缩近干后取己腊层过C18固相萃取小柱，使用己腊作为洗脱液，浓缩至1.0 血，待测。
[0023] 腐竹中乌洛巧品含量的测定：取上述腐竹洗脱液中添加5、10、20、50 μκΑ的乌洛 巧品标准溶液，在上述（2) (3)的质谱条件、色谱条件下进行UPLC-MS/MS测定，6次重复测 定计算变异系数，其具体测定结果如表4。
[0024] 表4腐竹的测定结果
实施例2 猪肉丸的前处理：将20 g猪肉丸研磨成均匀的粉末或匀浆，准确称取2.00 g于离必管 中，加入5血己腊并置于超声萃取10 min, W 3000 r/min离必5 min,己腊相过无水硫酸 钢，转移至浓缩瓶浓缩近干后取己腊层过C18固相萃取小柱，使用己腊作为洗脱液，浓缩至 1.0血，待测。
[00巧]猪肉丸中乌洛巧品含量的测定；取上述猪肉丸洗脱液中添加5、10、20、50 μκΑ的 乌洛巧品标准溶液，在上述（2) (3)的质谱条件、色谱条件下进行UPLC-MS/MS测定，6次重 复测定计算变异系数，其具体测定结果如表5。
[0026] 表5猪肉丸的测定结果
实施例3 米线的前处理：将20 g米线研磨成均匀的粉末或匀浆，准确称取2. 00 g于离必管中， 加入5血己腊并置于超声萃取10 min, W 3000 r/min离必5 min,己腊相过无水硫酸钢， 转移至浓缩瓶浓缩近干后取己腊层直接过0.22 μ m滤膜，待测。
[0027] 米线中乌洛巧品含量的测定：取上述米线洗脱液中添加5、10、20、50μg/L的乌洛 巧品标准溶液，在上述（2) (3)的质谱条件、色谱条件下进行UPLC-MS/MS测定，6次重复测 定计算变异系数，其具体测定结果如表6。
[0028] 表6米线的测定结果
实施例4 犹鱼的前处理：将20 g犹鱼研磨成均匀的粉末或匀浆，准确称取2. 00 g于离必管中， 加入5血己腊并置于超声萃取10 min, W 3000 r/min离必5 min,己腊相过无水硫酸钢， 转移至浓缩瓶浓缩近干后取己腊层直接过0.22 μ m滤膜，待测。
[0029] 犹鱼中乌洛巧品含量的测定；取上述犹鱼洗脱液中添加5、10、20、50μg/L的乌洛 巧品标准溶液，在上述（2) (3)的质谱条件、色谱条件下进行UPLC-MS/MS测定，6次重复测 定计算变异系数，其具体测定结果如表7。
[0030] 表7米线的测定结果
通过表：Γ表7数据可知：目标物在色谱柱上实现了有效分离，在3 min左右完成一个 样品的分析，相关系数（r2, n=6)大于0.999,检测结果稳定、灵敏。乌洛巧品的线性范围 1.0~50. 0 μg/^，检出限为0. 5 ug/kg (L0D，S/N=3)，方法回收率为86. 8%~102. 7%，精密度 RSD 为 0. 36% ~4. 79〇/〇。
[0031] 基于上述测验结果，可W看到，本发明检测食品中违禁食品添加乌洛巧品的方法 操作简单，方便快速。其检测精度适用于食品中乌洛巧品的仲裁检测与确证。述实施例仅 用于说明本发明的内容，但送并非是对本发明的限制。
【主权项】
1. 一种使用UPLC-MS/MS检测食品中乌洛托品含量的方法，其特征包括以下步骤： (1) 标准溶液的配置：准确称取乌洛托品标准品0. 001g，用超纯水溶解并定容至100 mL，摇匀备用，配制成浓度为1. 0mg/mL的标准储备液； (2) 色谱条件：HILIC色谱柱（50mmX2.1mm，1.7μπι)，柱温35 °C，流速0.25mL/min; 进样量5μL;流动相为乙腈和10mmol/L的乙酸铵溶液（pH=3. 5) (80/20,V/V)，等度洗 脱； (3) 质谱条件：电喷雾离子源（ESI)，正离子扫描模式；碰撞气（CAD)为8psi;气帘气 (CUR)为20psi;雾化气（GS1)为45psi;辅助加热器（GS2)为60psi;喷雾电压（IS)为 5500V;离子源温度（TEM)为150°C; (4) 标准曲线的绘制：取（1)所述的乌洛托品系列标准溶液，选择流动相为乙腈和乙酸 铵，通过固相萃取柱以峰面积Y对浓度X(μg/L)作标准曲线； (5) 含油脂较高样品的前处理：将20g食品样品研磨成均匀的粉末或匀浆，准确称取 2. 00g于离心管中，加入5mL乙腈并置于超声萃取10min,以3000r/min离心5min,乙 腈相过无水硫酸钠，转移至浓缩瓶浓缩近干后取乙腈层过固相萃取小柱，使用乙腈作为洗 脱液，浓缩至1.0mL，待测； (6) 含油脂较低样品的前处理：将20g食品样品研磨成均匀的粉末或匀浆，准确称取 2. 00g于离心管中，加入5mL乙腈并置于超声萃取10min,以3000r/min离心5min,乙 腈相过无水硫酸钠，转移至浓缩瓶浓缩近干后取乙腈层直接过0.22μm滤膜，待测； (7) 样品的测定：取上述（2)含油脂较高样品和（3)含油脂较低样品的洗脱液添加一系 列浓度梯度的乌洛托品标准溶液，在上述（4) (5)的条件下进行UPLC-MS/MS测定，重复测 定计算变异系数，测出样品中的乌洛托品的含量。2. 如权利要求1所述的一种使用UPLC-MS/MS检测食品中乌洛托品含量的方法，其特征 在于：所述的步骤（1)中标准溶液的配置浓度为5、10、20、50Pg/L。3. 如权利要求1所述的一种使用UPLC-MS/MS检测食品中乌洛托品含量的方法，其特征 在于：所述的步骤（4)中使用的固相萃取柱为C18柱。4. 如权利要求1所述的一种使用UPLC-MS/MS检测食品中乌洛托品含量的方法，其特征 在于：所述的步骤（5)中使用的固相萃取小柱为C18柱。5. 如权利要求1所述的一种使用UPLC-MS/MS检测食品中乌洛托品含量的方法，其特征 在于：所述的步骤（6) (7)中判别含油脂含量的标准为目标样品的脂肪含量百分比限界为 20% 〇
【专利摘要】本发明涉及一种食品检测技术，特别是一种通过使用UPLC-MS/MS检测食品中违禁添加剂乌洛托品，通过对脂肪含量不同的样品进行不同的前处理，再通过设定的质谱色谱条件进行检测，从而得出目标食品中乌洛托品的含量。乌洛托品的线性范围1.0~50.0μg/L，检出限为0.5μg/kg（LOD，S/N=3），方法回收率为86.8%~102.7%，精密度RSD为0.36%～4.79%。该方法快速、灵敏，适用于食品中乌洛托品的仲裁检测与确证。
【IPC分类】G01N30/88
【公开号】CN105486789
【申请号】CN201410482355
【发明人】林锦浩
【申请人】林锦浩
【公开日】2016年4月13日
【申请日】2014年9月19日