微乳色谱测定丹参有效成分指纹图谱的方法及应用
【技术领域】
[0001 ]本发明设及检测技术领域，更具体地，设及一种微乳色谱测定丹参有效成分指纹 图谱的方法及应用。
【背景技术】
[0002] 微乳液相色谱(MELC)是在胶束液相色谱(MLC)的基础上发展起来的。微乳是热力 学稳定的液体分散体系，包括表面活性剂、助表面活性剂（中链醇）、油相和水相。微乳主要 有巧巾类型：油包水(W/0)和水包油(0/W)，0/W型由于其高的含水量和低的粘度，在反相HPLC 中广泛使用。如图1所示，MELC中的分配特性由W下两种方式决定，首先，固定相通过吸附表 面活性剂层而得到修饰，改变了物质在固定相中的保留模式。另外，物质可W从水相或固定 相中分配进入油滴中，运提供了第二种分配机制。MELC其中最重要的一个性质就是可W在 不用梯度洗脱的情况下同时快速分离水溶性和脂溶性的物质，运给快速预测多种药物的生 物活性提供了基础。
[0003] 微乳液相色谱(MELC)作为一种类生物膜的色谱体系，同样可用于预测药物的生物 活性，用于构建药物活性高通量筛选平台。该方法可W测定不同微乳体系下药物的logk与 药物透过血脑屏障的分配系数(logBB)的回归分析拟合优度，筛选用于预测logBB的最优微 乳体系，并通过交叉验证证明了模型可靠性。此外通过主成分分析(PCA)与1〇甜、BMC JAM等 常用预测模型进行比较，可W验证微乳色谱在药物透过血脑屏障方面的可靠性。
[0004] 中药是一个典型的复杂体系，其有效组分或有效部位形成了中药多组分的生物活 性基础。中药有效组分或有效部位是中药有效性的化学物质基础，传统的中药化学指纹图 谱主要用于中药质量评价研究，只设及到中药的稳定性和可控性，而没反映中药多组分的 生物有效性。中药的全指纹成分的生物活性是中药有效性的首要条件，构建中药活性成分 高通量筛选平台，对于进一步研究中药的有效性作用机制具有重要的意义。
[0005] 生物分配微乳液相色谱模型作为一种新的预测药物生物活性的方法，相对细胞模 型和动物模型要简便很多，特别是在药物吸收、药动学、药效学参数的预测中具有简便快 速等优点，有利于实现药物的高通量筛选。
[0006] 但目前未见利用微乳液相色谱法实现中药丹参多组分生物指纹图谱的构建的相 关技术报道。
【发明内容】
[0007] 本发明要解决的技术问题是，针对现有中药丹参多组分生物指纹图谱的构建的技 术不足，提供一种一种微乳色谱测定丹参有效成分指纹图谱的方法。
[000引本发明要解决的另一技术问题是提供所述方法的应用。
[0009] 本发明的发明目的通过W下技术方案予W实现：
[0010] 提供一种微乳色谱测定丹参有效成分指纹图谱的方法，W微乳为流动相，色谱柱 采用Agela Odyssil C18columns( 150mmX4.6mm，i .d. 5μπι)或Agela Odyssil ClScolumns (250mm X 4.6mm，i . d. 5皿）；流速:ο. 8ml/min;紫外检测波长:270nm;柱溫:30°C;进样量：10μ L；
[0011 ] 所述流动相为W下mpi~mp8的任意一种：
[0012]
[0013] 优选地，所述微乳流动相的制备方法包括W下步骤：
[0014] S1.按比例将表面活性剂溶解于水相中，然后将油和助表面活性剂(正下醇）加入 到表面活性剂溶液中获得混合溶液；
[0015] S2.将S1所得混合溶液经两次超声处理后静置过夜，形成稳定的微乳。
[0016] 优选地，步骤S2所述两次超声处理第一次处理的时间为20min，第二次超声处理的 时间为lOmin。
[0017]所述微乳在使用前，用〇.45μηι尼龙滤膜过滤。
[0018] 优选地，标准物质的储备液是采用甲醇(色谱纯)配制成0.5mg/mL的溶液。工作溶 液为50yg/mL，是采用储备液用流动相稀释得到，并用0.45μπι尼龙滤膜过滤。
[0019] 本发明同时提供了所述方法的应用。本发明在研究了微乳液相色谱法(MELC)测定 不同类型中性和碱性药物的1〇排及油-水分配系数log Ρ方法，W及测定丹参药材中的全溶 解性成分的指纹图谱，W中药标准物质的1〇评与1〇泌的线性拟合方程，预测全谱指纹峰的 logP。对于被动吸收的药物，药物的吸收程度主要取决于药物的油水分配系数log P，所W 通过微乳色谱测定药物成分的保留因子1〇巧，进而求出药物成分的log P，从而通过体外 log P的测定来预测药物的吸收。本发明所述微乳色谱测定丹参有效成分指纹图谱的方法 可W很好地用于预测丹参有效成分吸收。
[0020] 本发明的有益效果是：
[0021] 本发明提供了一种微乳色谱测定丹参有效成分指纹图谱的方法，运种方法避免了 流动相的大量的有机溶剂，具有无毒无公害的环保特点。该方法通过保留因子的测定，可W 预测中药组成分的生物可渗透性，成为一种测定中药组成分渗透性的生物色谱方法。本发 明方法简便快速精确，可用于测定丹参有效成分指纹图谱。并可很好地用于预测丹参有效 成分吸收。
【附图说明】
[0022] 图1微乳色谱的分配机制。
[0023] 图2丹参提取物在mp6微乳体系下的色谱图；
[0024] 其中，（a)丹参样品色谱图；（b)对照品色谱图；色谱峰:峰的标识：1、丹参素钢;3、 咖啡酸;4、原儿茶醒;5、迷迭香酸;6、丹酪酸C; 9、丹酪酸B; 13、丹参酬I; 14、隐丹参酬；16、丹 参酬IIA。
【具体实施方式】
[0025] 下面结合附图和具体实施例进一步说明本发明。下述实施例仅用于示例性说明， 不能理解为对本发明的限制。除非特别说明，下述实施例中使用的试剂为常规市购或商业 途径获得的试剂，除非特别说明，下述实施例中使用的方法和设备为本领域常规使用的方 法和设备。
[00%] 实施例1 [0027] 1.仪器与试药
[002引1.1仪器
[0029] LC-20AB型累(Shimadzu国际贸易有限公司，上海）
[0030] SPD-20A紫外检测器(Shimadzu国际贸易有限公司，上海）
[0031] LC Solution色谱工作站(Shimadzu国际贸易有限公司，上海）
[0032] QT-330柱溫箱(Auto-Science仪器有限公司，天津）
[0033] SB5200D超声波清洗机(新芝生物科技股份有限公司，宇波）
[0034] S监-D-虹循环水式多用真空累(凌科实业发展有限公司，上海）
[0035] FB-10T溶剂过滤器(Auto-Science仪器有限公司，天津）
[0036] P服-3D pH计(Ξ信仪表厂，上海）
[0037] FA3204B电子分析天平(精科天美电子仪器有限公司，上海）
[003引