1.2药品与试剂
[0039] 丹参素钢对照品（中国药品生物制品检定所，批号：110855-200809)
[0040] 丹酪酸B对照品（中国药品生物制品检定所，批号：111562-200605)
[0041 ]丹酪酸C对照品（Tauto Biotech Co丄td，批号：12020821)
[0042] 咖啡酸对照品（Tauto Biotech Co丄td，批号：110885-200102)
[0043] 原儿茶醒对照品（中国药品生物制品检定所，批号:0810-200004)
[0044] 迷迭香酸对照品（Tauto Biotech Co丄td，批号：11112932)
[0045] 隐丹参酬对照品（Tauto Biotech Co丄td，批号：12022835)
[0046] 丹参酬I对照品（Tauto Biotech Co丄td，批号：11070517)
[0047] 丹参酬IIA对照品（中国药品生物制品检定所，批号：110766-200314)
[004引 Brij35(AMRESC0,生化试剂）
[0049] 十二烷基硫酸钢(Sigma-Al化ich，生化试剂）
[00加]十六烷基Ξ甲基漠化锭(CTABKOupo Bio-Technique,生化试剂）
[0051] β-环糊精(Oupo Bio-Technique,生化试剂）
[0052] 憐酸二氨钢(天津富晨化学试剂厂，分析纯）
[0053] 憐酸氨二钢(天津富晨化学试剂厂，分析纯）
[0054] 氯化钢(天津富晨化学试剂厂，分析纯）
[0055] 憐酸(天津富晨化学试剂厂，分析纯）
[0056] 正下醇(天津百世化学有限公司，分析纯）
[0057] 正辛烧(天津百世化学有限公司，分析纯）
[0058] 正辛醇(天津百世化学有限公司，分析纯）
[0059] 正庚烧(天津百世化学有限公司，分析纯）
[0060] 环己烧(天津百世化学有限公司，分析纯）
[0061] 乙酸乙醋(广州化学试剂厂，分析纯）
[0062] 甲醇（J.T. Baker,色谱纯）
[0063] 蒸馈水(广州屈臣氏食品饮料有限公司）
[0064] 2.色谱系统及条件
[0065] 色谱系统构成:LC-20AB、SPD-20A、7725i手动进样阀、AT-330柱溫箱;本发明使用 的色谱柱：Agela Odyssil C18columns(150mmX4.6mm，i.d.5ym)或者Agela Odyssil C18columns(250mmX4.6mm, i .d.5ym)。微乳流动相的组成如表1所示的任意一种；流速： 0.8ml/min;紫外检测波长:270nm;柱溫:30°C;进样量:lOyL。
[0066] 3.本实施例用于单因素考察实验的主要MELC系统如表1所示。经过大量实验验证， 表1中所提供的微乳流动相系统均可W应用于本发明方法。
[0067] 其中，表面活性剂采用月桂醇聚氧乙締酸(Brij35)、十二烷基硫酸钢(SDS)或者二 者的混合物;助表面活性剂采用正下醇;所述油相为正辛醇、正辛烧、环己烧或乙酸乙醋的 一种。
[0068] 表1微乳色谱组成
[0069]
[0070] 微乳流动相的制备和标准溶液的配置
[0071] 微乳流动相的制备方法。将一定比例的表面活性剂溶解于水相中，然后将油加入 到表面活性剂溶液中。将该混合溶液经两次超声处理静置过夜，确保形成稳定的微乳。在使 用前，所有微乳流动相都用0.45WI1尼龙滤膜过滤。第一次超声处理的时间为20min，第二次 超声处理的时间为lOmin。
[0072] 标准物质的储备液由甲醇(色谱纯)配制成0.5mg/mL的溶液。工作溶液为50yg/血， 由储备液用流动相稀释得到，并用0.45WI1尼龙滤膜过滤。
[0073] 实施例2丹参药动学指纹图谱的绘制
[0074] 本实施例W表1中所示mp6微乳色谱体系为例，将丹参供试品溶液在mp6微乳色谱体 系下进样，记录色谱图见附图2所示。在微乳液相色谱条件下建立的丹参药材药动学指纹图 谱，共检测到16个色谱峰，其中的9个色谱峰是用对照品定性的已知峰，另外7个是未知峰。 利用构建的l〇gkmp6-logAUC/Dose模型进行预测，结果见表2所示。
[0075] 表2 丹参微乳全指纹图谱的1 0 g K预测结果
【主权项】
1. 一种微乳色谱测定丹参有效成分指纹图谱的方法，其特征在于，以微乳为流动相，色 谱柱米用Agela Odyssil C18columns(150mmX4.6mm，i.d.5ym)或Agela Odyssil C18columns(250mmX4.6mm, i ·d. 5μηι);流速:0 ·8ml/min;紫外检测波长：270nm;柱温：30°C; 进样量:10此； 所述流动相为以下mpi~mps的任意一种：2. 根据权利要求1所述微乳色谱测定丹参有效成分指纹图谱的方法，其特征在于，所述 流动相的制备方法包括以下步骤：51. 按比例将表面活性剂溶解于水相中，然后将油和助表面活性剂加入到表面活性剂 溶液中获得混合溶液；52. 将Sl所得混合溶液经两次超声处理后静置过夜，形成稳定的微乳。3. 根据权利要求2所述微乳色谱测定丹参有效成分指纹图谱的方法，其特征在于，步骤 S2所述两次超声处理第一次处理的时间为20min，第二次超声处理的时间为IOmin。4. 根据权利要求1所述微乳色谱测定丹参有效成分指纹图谱的方法，其特征在于，所述 测定方法中，标准物质的储备液是采用甲醇配制成〇 . 5mg/mL的溶液;工作溶液为50yg/mL， 是采用储备液用所述流动相稀释得到，并用〇.45μπι尼龙滤膜过滤。5. 权利要求1至4任一项所述方法的应用，其特征在于，应用于预测丹参全谱指纹峰的 IogPo
【专利摘要】微乳色谱测定丹参有效成分指纹图谱的方法及应用，本发明公开了一种微乳色谱测定丹参有效成分的生物色谱的方法及应用。以本发明科学配伍制得的微乳为流动相，色谱柱采用Agela？Odyssil？C18？columns（150mm×4.6mm，i.d.？5μm）或Agela？Odyssil？C18？columns？（250mm×4.6mm，i.d.？5μm）；流速：0.8ml/min；紫外检测波长：270nm；柱温：30℃；进样量：10μL。本发明方法简便快速精确，可用于测定丹参有效成分指纹图谱。并可很好地用于预测丹参有效成分吸收。
【IPC分类】G01N30/86
【公开号】CN105486787
【申请号】CN201510888333
【发明人】李宁
【申请人】广东药学院
【公开日】2016年4月13日
【申请日】2015年12月4日