、2，3-二氢酞嗪 二酮、苹果酸脱氢酶、脲酶、过氧化物酶例如辣根过氧化物酶(HRP0)、碱性磷酸酶、β-半乳糖 苷酶、乙酰胆碱酯酶、葡萄糖淀粉酶、溶菌酶、糖氧化酶(例如，葡萄糖氧化酶、半乳糖氧化酶 和葡萄糖-6-磷酸脱氢酶）、杂环氧化酶(例如尿酸酶和黄嘌呤氧化酶）、乳过氧化物酶、微过 氧化物酶和类似物。合适的辅基复合物的实例包括抗生蛋白链菌素/生物素和亲和素/生物 素;合适的荧光材料的实例包括伞形酮、荧光素、异硫氰酸荧光素、若丹明、二氯三嗪基胺荧 光素、丹磺酰氯或藻红蛋白；发光材料的实例包括鲁米诺;生物发光材料的实例包括萤光素 酶、萤光素和水母荧光素；以及合适的放射性材料的实例包括 125I、131I、mIn或99Tc。优选地， 本发明所用的抗体是生物素化的抗体。
[0024] 在另一方面，本发明提供了用于诊断肺癌的试剂盒，其包含用于检测受试者的催 乳素水平的试剂。
[0025] 在另一方面，本发明提供了用于诊断肺癌的试剂盒，其包含用于检测受试者的催 乳素和其它标志物的水平的试剂。所述其它标志物选自但不限于癌胚抗原(CEA)、鳞状细胞 癌相关抗原（SCC-Ag)、细胞角蛋白19(CYFRA21-1)、糖类抗原125(CA125)、糖类抗原153 (CA153)、糖类抗原199(CA199)、神经特异性烯醇化酶(NSE)、组织多肽抗原(TPA)、胃泌素释 放肽前体(pro-GRP)、血清溶血磷脂酸(LPA)、肿瘤特异性生长因子(TSGF)、STAT3或其组合 中的一种或多种。优选地，所述其它标志物包括癌胚抗原(CEA)和细胞角蛋白19 (CYFRA21 -1)〇
[0026] 在一些实施方案中，所检测的催乳素或其它标志物的水平是例如但不限于，血浆 水平、组织液水平和/或胸水水平。
[0027] 在一些实施方案中，所述诊断是早期诊断。
[0028] 在一些实施方案中，受试者可以是哺乳动物。优选地，受试者是人，例如但不限于 欧洲人群、北美人群和/或中国人群。优选地，受试者是中国人群。
[0029] 在一些实施方案中，所诊断的肺癌包括小细胞肺癌和/或非小细胞肺癌。优选地， 所诊断的肺癌是非小细胞肺癌。非小细胞肺癌包括但不限于鳞癌、腺癌、大细胞癌。
[0030] 在一些实施方案中，检测受试者的催乳素或其它标志物的水平的试剂可以是 ELISA中使用的试剂。在其它实施方案中，检测受试者的催乳素或其它标志物的水平的试剂 还可以是RIA或CLIA例如ECLI中使用的试剂。优选地，检测受试者的催乳素或其它标志物的 水平的方法是ELISA中使用的试剂。应理解，本领域技术人员可以使用本领域已知的任何生 物标志物检测试剂来检测受试者的催乳素或其它标志物的水平。
[0031] 在一些实施方案中，检测受试者的催乳素或其它标志物的水平的试剂是如上文所 述的抗体。
[0032] 在一些实施方案中，试剂盒还包含检测受试者的催乳素和/或其它标志物的水平 所需的其它试剂。在一个实施方案中，所述其它试剂包括ELISA试剂。ELISA试剂可包括结合 物、标准品、标准品稀释液、洗涤缓冲液、底物溶液和终止液中的一种或多种。本领域技术人 员知晓，根据抗体标记可选择不同的适宜结合物。例如，当被标记的抗体是生物素化的抗体 时，结合物可以是亲和素或抗生蛋白链菌素。结合物可以如本文所述地被标记以进行检测。 例如，结合物可以被例如但不限于辣根过氧化物酶HPR或碱性磷酸酶标记。本领域技术人员 知晓，根据所用标记，可选择适宜的底物溶液进行检测。例如，当结合物被辣根过氧化物酶 HPR或碱性磷酸酶标记时，底物溶液可以是例如但不限于，分别地TMB溶液(TMB:3，3'，5，5'-四甲基联苯胺)或对硝基苯磷酸酯(p-NPP)。本领域技术人员知晓，根据所检测的靶，可选择 适宜的标准品。在一些实施方案中，标准品可以是例如但不限于催乳素和/或其它标志物的 原核表达重组蛋白。标准品稀释液可以是例如但不限于0.05M PH9.6碳酸盐缓冲液。洗涤 缓冲液可以是本领域已知的适合于ELI SA的任何缓冲液，例如但不限于磷酸盐缓冲液，例如 含0.05%了《6611-20的0.31?!17.4磷酸盐缓冲液。终止液可以是例如但不限于21硫酸或21 H2S〇4。在一些实施方案中，试剂盒可以是商购可得的ELISA试剂盒。
[0033]在一个方面，本发明涉及检测催乳素水平的试剂在制备用于诊断肺癌的试剂盒中 的用途。在另一方面，本发明涉及检测催乳素、癌胚抗原和细胞角蛋白19的水平的试剂在制 备用于诊断肺癌的试剂盒中的用途。在一些实施方案中，所述试剂是如上文所述的抗体。
【附图说明】
[0034] 图1.各组中血浆中的PRL水平
[0035] 图2.样本集合组血浆PRL、CEA和CYFRA21 -1水平与三者联合的R0C曲线。 实施例
[0036]材料与方法
[0037] 一.标本分组
[0038]本实验一共有231例检测对象(所有标本集合组），其中非小细胞肺癌患者116例， 健康对照组115例，按照性别和年龄平均分配到两组，建模组（116例，来源于南京医科大学 附属第一医院）和验证组（115例，来源于湖北省宜昌市肿瘤医院），两组实验对象的基本情 况见表1。病理类型依据病理诊断资料来判断是肺癌病人或健康人。健康人来自于健康体检 的人群，体检没有发现肺癌。早期非小细胞癌患者的确定为如果原发肿瘤< 5cm、未突破肺 膜、无区域淋巴结的可以称为早期肺癌，一般在病理分期1-2期。
[0039] 表1.两组检测对象的基本情况。
[0040]
[0041] 二.方法
[0042]实验采用ELISA方法对标志物进行检测，实验数据采用中位数土四分位距(median ± IQR; IQR, interquartile range)的统计学方法分析。
[0043] 三.具体步骤
[0044] 1.样本的采集与保存
[0045] 血浆:将收集于血浆分离管的全血标本在室温放置2小时或4°C过夜，然后1000 Xg 离心20分钟，取上清即可，或将上清置于-80°C保存，但应避免反复冻融。
[0046] 2.材料与试剂：
[0047] (1)标准品：催乳素原核表达重组蛋白标准品稀释液:0.05M PH9.6碳酸盐缓冲液 (均购自武汉优尔生）
[0048] (2)检测溶液A工作液:生物素化的血清催乳素(购自武汉优尔生）
[0049] (3)浓洗涤液:含0 · 05 % Tween-20的0 · 3M PH7 · 4磷酸盐缓冲液(购自宜昌百奥生物 服务中心）
[0050] (4)检测B工作液:辣根过氧化物酶HPR标记的亲和素(购自武汉百浩天生物科技有 限公司）
[0051 ] (5)底物溶液:TMB溶液(TMB: 3，3 '，5，5 ' -四甲基联苯胺）（购自武汉百浩天生物科 技有限公司）
[0052] (6)终止液:2M硫酸(购自宜昌百奥生物服务中心）
[0053 ] (7) CEA，CYFR21 -1试剂盒购自武汉优尔生商贸有限公司
[0054] 3 .ELISA 方法
[0055] (1)加样:在96孔板(购自武汉优尔生)上分别设标准孔7孔、空白孔、待测样品孔。 标准品：其浓度为100ng/mL。准备7个稀释标准品的EP管，前8个EP管中加入100yL的标准品 稀释液，第一孔中加 l〇〇yL标准品即浓度为50ng/mL，然后前孔吸取100yL到下孔中，依次倍 比稀释成25ng/mL，12 · 5ng/mL，6 · 25ng/mL，3 · 12ng/mL，1 · 56ng/mL，0 · 78ng/mL，标准品稀释 液(Ong/mL)直接作为空白孔，余孔加待测样品100yL，酶标板加上覆膜，37°C湿盒温育2小 时。
[0056] (2)弃去液体，甩干，不用洗涤。
[0057] (3)每孔加检测溶液A工作液100yL(临用前配制），酶标板加上覆膜，37°C温育1小 时。
[0058] (4)弃去孔内液体，每孔用350yL的洗涤液洗涤，浸泡1-2分钟，吸去（不可触及板 壁)或甩掉酶标板内的液体，在实验台上铺垫几层吸水纸，酶标板朝下用力拍几次(也可轻 拍将孔内液体拍干），重复洗板3-5次。最后一次洗涤后，要把孔内的洗涤液完全甩干。自动 洗板机亦可。
[0059] (5)每孔加检测溶液B工作液(临用前配制）100yL，加上覆膜，37°C温育30分钟。
[0060] (6)弃去孔内液体，甩干，洗板5次，方法同步骤4。
[00611 (7)每孔加底物溶液90yL，酶标板加上覆膜，37°C避光显色(反应时间控制在15-25 分钟，不要超过30分钟。当标准孔的前3-4孔有明显的梯度蓝色，后3-4孔梯度不明显时，即 可终止）。
[0062] (8)每孔