对分析人员要求低。荧光检测器选择性高，抗干扰能力比质谱检测器强，灵敏度高，多种雌激素分离明显，峰形对称，浓度-峰面积线性关系好。
[0025](4)该方法对养殖固体废弃物中雌激素的回收率在80%以上，对雌二醇，炔雌醇，雌酮，双酚A的检测限分别为3.2、1.8,5.4,2.8 μ g/kg，本发明方法专属性强、准确度、精密度、重现性均较好，适应于固体废物中雌激素的含量检测，是值得推广的简便易行的方法。
【附图说明】
[0026]图1为养鸡场固废(添加有雌激素标样)中雌酮、雌二醇、炔雌醇的色谱分离图。
[0027]图2为雌二醇、雌酮和炔雌醇的标准曲线，雌酮、雌二醇、炔雌醇的保留时间分别为22.3,26.5和28.8min，3个组分均达到基线分离，在I μ g/kg-lmg/kg范围内具有良好的线性关系。
[0028]图3养鸡场固体废物中雌二醇的含量。
[0029]图4为养鸡场废物中检测雌激素的色谱图。
【具体实施方式】
[0030]以下通过具体实施例对本发明进行进一步说明:
[0031]实施例1
[0032]养鸡场废物中雌激素的检测。
[0033]样品取自南京郊区某养鸡场。该养鸡场每出笼一批肉鸡(周期为6周)，便清理一次笼中包括粪便、绒毛、食物残渣等的固体废物，并将废物集中堆置存放。等积累若干批次后，废物再集中处置。这样，养鸡场的固体废物实际上是若干批次肉鸡所产生，其中上层的为刚刚堆放新鲜，而下层的时间较为久远。一共取了 3个样品，3、2、1号分别取自离表面
0.3、0.6和0.9米深处的样品(推算堆放时间分别为12周、24周和36周左右)。越下层的样品，放置时间越久。分析结果见图3，发现养鸡场固体废物中的雌激素主要是雌二醇，随着深度的增加，雌激素的含量逐渐降低，表明雌二醇发生了降解。
[0034]将3个样品干燥后各称取5g，分别用1mL体积比2/1的二氯甲烷/甲醇混合溶液作为溶剂超声萃取3次，每次10分钟，合并萃取液，离心，取上清液，置于40°C水浴中，用氮气促进溶剂挥发，到剩余ImL左右停止。
[0035]制备硅胶净化小柱，使用2g粒径为100目的硅胶，用正己烷活化。将Iml浓缩样品用1mL正己烷溶解后倒入硅胶小柱，然后用30mL正己烷淋洗小柱，最后用氮气吹干。干燥后的硅胶柱用2mL乙腈淋洗，收集淋洗液，浓缩到lmL。样品用日立LC20TA型HPLC/FL进行分析。色谱柱为C18反相柱(250 X 4mm，5 μπι, Supelco)，流动相为甲醇和水，流速ImL/min，梯度洗脱，甲醇初始浓度为30%，在15分钟内升高到50%并保持10分钟，然后在下个10分钟内继续升高到100%，并保持5分钟。检测器激发波长和发射波长分别为280nm和310nmo
[0036]检测结果表明，养鸡场废物中没有检测到炔雌醇，检测到微量的雌酮，但含有大量雌二醇，见图4。雌二醇在离表面0.3米中废物中的浓度高达720 μ g/kg，但浓度随着样品深度显著下降，在离表面0.6和0.9米深处浓度降到335和201 μ g/kg。由于底层的废弃物堆置时间较长，上层的较为新鲜，这说明雌二醇发生了自然分解。
【主权项】
1.一种检测养殖废物中雌激素的方法，其特征在于该方法包括以下步骤: (1)样品萃取:取养殖场固体废物3-10g，以体积比为2:1-4:1的二氯甲烷和甲醇的混合溶液为溶剂，在超声辅助下萃取，合并萃取液，离心，取上清液，用氮气吹溶剂使之挥发，直至剩余溶液l_2mL ; (2)样品净化:取硅胶2-5g，用正己烷活化，装入径高比为1:10-15的玻璃柱中，静置，待固体沉降完全，排放正己烷，使其液面和硅胶柱齐平，制备得到净化小柱； 将步骤(I)得到的样品用正己烷溶解，再上载到净化小柱，用正己烷清洗，然后用氮气将硅胶柱吹干； (3)样品洗脱:用乙腈洗脱，收集洗脱液，浓缩至l_2ml; (4)样品测定:用高效液相色谱-荧光检测器进行定量分析，荧光检测器的激发波长和发射波长分别为280nm和310nm。2.根据权利要求1所述的检测养殖废物中雌激素的方法，其特征在于该方法步骤(I)中二氯甲烷和甲醇的混合溶液体的积比为2:1。3.根据权利要求1所述的检测养殖废物中雌激素的方法，其特征在于该方法步骤(I)中所述的萃取条件为萃取2-3次，每次萃取5-15分钟。4.根据权利要求1所述的检测养殖废物中雌激素的方法，其特征在于步骤(2)所用的硅胶粒径为过80-100目筛。5.根据权利要求1所述的检测养殖废物中雌激素的方法，其特征在于步骤(3)所用的乙腈用量为2-5mL。6.根据权利要求1所述的检测养殖废物中雌激素的方法，其特征在于步骤(2)硅胶用正己烷活化的具体步骤是将硅胶中加入正己烷搅拌糊状再倒入玻璃柱。7.根据权利要求1所述的检测养殖废物中雌激素的方法，其特征在于步骤(2)中的玻璃柱的径高比为1:10。8.根据权利要求1所述的检测养殖废物中雌激素的方法，其特征在于步骤(4)高效液相色谱-荧光检测器进行分析时采用色谱柱为C18反相柱，流动相为甲醇和水，流速ImL/min，采用梯度洗脱，甲醇初始浓度为30%，在15分钟内升高到50%并保持10分钟，然后再在10分钟内继续升高到100%，并保持5分钟。
【专利摘要】本发明公开了一种检测养殖废物中雌激素的方法，该方法包括样品萃取、样品净化、样品洗脱及样品测定步骤，主要以二氯甲烷/甲醇混合溶液为溶剂有效提取养殖固体废弃物中的雌激素，回收率在80％以上；采用硅胶小柱有效去除样品中的大量油脂类物质；运用HPLC/FL分析，方法简单、普遍，荧光检测器选择性高，抗干扰能力强，多种雌激素分离明显，峰形对称，浓度-峰面积线性关系好。
【IPC分类】G01N30/02, G01N30/08
【公开号】CN105572238
【申请号】CN201410550857
【发明人】陆隽鹤, 宦志荣, 孔德洋
【申请人】无锡市寰创环境科技发展有限公司
【公开日】2016年5月11日
【申请日】2014年10月16日