一种防风中升麻素苷和5-o-甲基维斯阿米醇苷的测定方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及实验室检测领域，特别是一种防风中升麻素苷和5-0-甲基维斯阿米醇 苷的测定方法。
【背景技术】
[0002] 2015年药典记录了防风中升麻素苷和5-0-甲基维斯阿米醇苷的提取方法:取本品 细粉约0.25g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇10ml，称定重量，水浴回流2小时， 放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
[0003] 液相色谱检测条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水(40:60)为 流动相;检测波长为254nm。理论板数按升麻素苷峰计算应不低于2000。
[0004] 药典的方法操作过程复杂，对操作人员的操作技能要求高。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的是提供一种防风中升麻素苷和5-0-甲基维斯阿米醇苷的测定方法， 该方法操作简单，检测精度高。
[0006] 本发明提供的技术方案为:一种防风中升麻素苷和5-0-甲基维斯阿米醇苷的测定 方法，包括以下步骤：
[0007] 步骤1:将防风粉碎后采用ASE萃取法萃取得到萃取液；
[0008] 步骤2:将萃取液稀释过滤后，得到上清液；
[0009] 步骤3:将上清液采用液相色谱法进行分析；
[0010]其中，液相色谱法的分析条件为：
[0011] a)仪器:液相色谱仪
[0012] b)色谱柱规格:Ultimate XB-C18液相色谱柱3mm* 100mm3.0ym
[0013] c)柱温:40 °C
[0014] d)流速:0.3mL/min
[0015] e)流动相：甲醇-水，体积比35:65
[0016] f)检测波长：254nm〇
[0017] 在上述的防风中升麻素苷和5-0-甲基维斯阿米醇苷的测定方法中，所述的步骤1 具体为：
[0018] S11:将防风粉碎后，过筛；
[0019] S12:称取0.25重量份罗汉果粉，与0.3重量份硅藻土混合均匀待用；
[0020] S13:将S12中的混合物移入预先放好过滤膜的萃取池中，加入适量的硅藻土至达 到萃取池的池口；盖上萃取池的盖子进行静态萃取;萃取结束后得到萃取液；
[0021] 萃取条件为：萃取溶剂为甲醇；萃取温度100°C;静态萃取时间5min;冲洗体积 100%;静态循环次数2次。
[0022] 在上述的防风中升麻素苷和5-0-甲基维斯阿米醇苷的测定方法中，所述的萃取池 的体积为5ml。
[0023] 在上述的防风中升麻素苷和5-0-甲基维斯阿米醇苷的测定方法中，所述的静态萃 取的压力为1500psi。
[0024] 在上述的防风中升麻素苷和5-0-甲基维斯阿米醇苷的测定方法中，所述的静态萃 取的吹扫时间为100s。
[0025] 在上述的防风中升麻素苷和5-0-甲基维斯阿米醇苷的测定方法中，步骤2具体为： 将萃取液用甲醇稀释后过滤，保留滤液。
[0026] 在上述的防风中升麻素苷和5-0-甲基维斯阿米醇苷的测定方法中，液相色谱分析 所用的仪器为安捷伦1200液相色谱仪。
[0027] 在上述的防风中升麻素苷和5-0-甲基维斯阿米醇苷的测定方法中，所述的ASE萃 取法所采用的仪器为ASE350快速溶剂萃取仪。
[0028] 本发明在采用上述技术方案后，其具有的有益效果为：
[0029]本发明的检测方法操作简单，精度与药典方法的精度一致，重复性好。
【附图说明】
[0030] 图1为本发明的色谱分析升麻素苷有效性验证的直角坐标图；
[0031] 图2为本发明的色谱分析5-0-甲基维斯阿米醇苷有效性验证的直角坐标图；
[0032] 图3为本发明的混合对照品按照实施例1的液相色谱法检测得到的图谱；
[0033]图4为本发明药典的液相色谱图谱；
[0034]图5为本发明的样品20141201按照药典所记载的方法得到的色谱图；
[0035]图6为本发明的样品20141201按照实施例1所记载的方法得到的色谱图。
【具体实施方式】
[0036]下面结合【具体实施方式】，对本发明的技术方案作进一步的详细说明，但不构成对 本发明的任何限制。
[0037] 实施例1:
[0038]将防风经粉碎机粉碎，过五号筛，取约0.25g，精密称定，与0.3g硅藻土混合均匀， 待用，移入到预先放好过滤膜的ASE?5ml萃取池中再加入适量硅藻土，轻轻振摇使之与池 口在同一水平线上，拧紧萃取池上盖。萃取结束后，把萃取液转移于50ml容量瓶中，用甲醇 稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
[0039]萃取条件(见表1)为：
[0040]表 1
[0041]
[0042] 分析方法为LC液相色谱法，液相色谱分析条件：
[0043] a)仪器:安捷伦1200
[0044] b)色谱柱Ultimate XB-C18液相色谱柱3mm*100mm3.0ym即色谱柱直径3mm，长度 100mm，粒径 3. Ομπι。
[0045] (^柱温:仙！：
[0046] d)流速:0.3mL/min
[0047] e)流动相：：甲醇-水(35:65)
[0048] f)检测波长：254nm
[0049] 色谱分析有效性验证：
[0050] 取升麻素苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每lml含10yg的溶液，即得。取5-0-甲基维斯阿米醇苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每lml含10yg的溶液，即得混合对照 品。
[0051 ] 取混合对照品溶液(升麻素苷浓度:0.01123yg/mL，5-0-甲基维斯阿米醇苷浓度： 0 · 01126yg/mL)，分别精密吸取该溶液0 · 4μ1、0 · 8μ1、ΙμL、1 · 2μ1、1 · 6μ1、2μ1进入LC测定，并 依照上述方法测定，结果详见表2和表3。以绝对进样量(ng)_平均峰面积进行线性回归，求 得回归方程:升麻素苷y = 6.121 x+2.928，R2 = 0.999，5-0-甲基维斯阿米醇苷y = 7.004x+ 3 · 027，R2 = 0 · 999。升麻素苷在4 · 492~22 · 46ng，5-0-甲基维斯阿米醇苷在4 · 504~22 · 52ng 范围内呈良好的线性关系。详见图1和图2。此外，图3示出了混合对照品按照实施例1的液相 色谱法检测得到的图谱，图4示出了药典所记载的图谱。
[0052]表2升麻素苷线性关系
[0053]
[0054]表3 5-0-甲基维斯阿米醇苷线性关系
[0055]
[0056] 实施例1的萃取方法的重现性验证：
[0057]取相同批号的样品（批号：151001) 0.25g，共6份，精密称定，按ASE提取方法提取供 试品溶液，进样量为UU，以实施例1中记载的色谱条件平行试验，测得样品中升麻素苷和5-0-甲基维斯阿米醇苷的含量见表4，RSD分别为1.7%，试验表明ASE提取方法重复性良好，结 果详见表3。
[0058] 表4
[0059]
[0060]实施例1的萃取方法的精确度测试
[0061 ]米用实施例1的ASE萃取方法和药典的萃取方法对防风进彳丁萃取，防风为4批，批号 分别为 20141201，151001,150929,1511016;
[0062]实施例1的ASE萃取方法对同一批次的防风采用相同型号规格但是不同的机器进 行平行测试两次，分别为ASE1和ASE2表示。
[0063]图5为样品20141201按照药典所记载的方法得到的色谱图；
[0064]图6为样品20141201按照实施例1所记载的方法得到的色谱图。
[0065] 具体测试结果见下表5;
[0066] 表 5
[0067]
[0068]以上所述的仅为本发明的较佳实施例，凡在本发明的精神和原则范围内所作的任 何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
【主权项】
1. 一种防风中升麻素苷和5-0-甲基维斯阿米醇苷的测定方法，其特征在于，包括以下 步骤： 步骤1:将防风粉碎后采用ASE萃取法萃取得到萃取液； 步骤2:将萃取液稀释过滤后，得到上清液； 步骤3:将上清液采用液相色谱法进行分析； 其中，液相色谱法的分析条件为： a) 仪器:液相色谱仪 b) 色谱柱规格:Ultimate XB-C18液相色谱柱3mm*100mm3·0μηι (：)柱温:40°〇 d) 流速:0.3mL/min e) 流动相：甲醇-水，体积比35:65 f) 检测波长:254nm〇2. 根据权利要求1所述的防风中升麻素苷和5-0-甲基维斯阿米醇苷的测定方法，其特 征在于，所述的步骤1具体为： S11:将防风粉碎后，过筛； S12:称取0.25重量份罗汉果粉，与0.3重量份硅藻土混合均匀待用； S13:将S12中的混合物移入预先放好过滤膜的萃取池中，加入适量的硅藻土至达到萃 取池的池口；盖上萃取池的盖子进行静态萃取;萃取结束后得到萃取液； 萃取条件为:萃取溶剂为甲醇;萃取温度l〇〇°C;静态萃取时间5min;冲洗体积100%;静 态循环次数2次。3. 根据权利要求2所述的防风中升麻素苷和5-0-甲基维斯阿米醇苷的测定方法，其特 征在于，所述的萃取池的体积为5ml。4. 根据权利要求2所述的防风中升麻素苷和5-0-甲基维斯阿米醇苷的测定方法，其特 征在于，所述的静态萃取的压力为1500psi。5. 根据权利要求2所述的防风中升麻素苷和5-0-甲基维斯阿米醇苷的测定方法，其特 征在于，所述的静态萃取的吹扫时间为100s。6. 根据权利要求1所述的防风中升麻素苷和5-0-甲基维斯阿米醇苷的测定方法，其特 征在于，步骤2具体为:将萃取液用甲醇稀释后过滤，保留滤液。7. 根据权利要求1所述的防风中升麻素苷和5-0-甲基维斯阿米醇苷的测定方法，其特 征在于，液相色谱分析所用的仪器为安捷伦1200液相色谱仪。8. 根据权利要求1所述的防风中升麻素苷和5-0-甲基维斯阿米醇苷的测定方法，其特 征在于，所述的ASE萃取法所采用的仪器为ASE350快速溶剂萃取仪。
【专利摘要】本发明公开了一种防风中升麻素苷和5-O-甲基维斯阿米醇苷的测定方法，包括以下步骤：步骤1：将防风粉碎后采用ASE萃取法萃取得到萃取液；步骤2：将萃取液稀释过滤后，得到上清液；步骤3：将上清液采用液相色谱法进行分析。本发明提供了一种防风中升麻素苷和5-O-甲基维斯阿米醇苷的测定方法，该方法操作简单，检测精度高。
【IPC分类】G01N30/06, G01N30/02
【公开号】CN105675765
【申请号】CN201610235064
【发明人】陈学松, 王丽丽, 韦涛, 梁美艳, 黄新惠
【申请人】广西壮族自治区梧州食品药品检验所
【公开日】2016年6月15日
【申请日】2016年4月15日