一种含升麻的植物组合物提取方法和应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及中药制剂技术领域，具体涉及一种含升麻的植物组合物提取方法及应 用。
【背景技术】
[0002] 含升麻的植物组合物由升麻100份，牛耳岩白菜40份、毛叶轮环藤50份、芦子兰 40份作为原料药制成，目前的提取方法是加水煎煮二次，每次2-3小时，合并煎液，滤过，浓 缩成稠膏，制粒，干燥，包糖衣，即得。
[0003] 现有技术中，尚未有含升麻的植物组合物在提取制备方面采用微波技术的报道， 而采用水煎煮的方法，工艺粗糙、落后，杂质多，导致患者用量过大，不方便服用，严重影响 了本品在临床上应用。
【发明内容】
[0004] 发明目的：为了解决上述问题，本发明的目的在于提供一种含升麻的植物组合物 提取方法。
[0005] 本发明的另一个目的在于提供一种含升麻的植物组合物在制备抑制大鼠肾上腺 嗜铬细胞瘤PC-12细胞增殖药物中的应用。
[0006] 技术方案：本发明的目的是通过如下的方案实现的：
[0007] -种含升麻的植物组合物提取方法，植物组合物由升麻100份，牛耳岩白菜40份、 毛叶轮环藤50份、芦子兰40份作为原料药制成，制备方法由下列步骤组成：取上述原料药， 粉碎，加入2L的70%乙醇，投入微波萃取装置中进行微波萃取，萃取功率为400-600W，萃取 2次，每次4-8分钟，合并萃取液，浓缩，加到DlOl大孔吸附树脂柱上，50%乙醇洗脱，收集5 倍量柱体积洗脱液，减压回收乙醇，浓缩并干燥，得微波提取物，加常规辅料制备成片剂、胶 囊或颗粒剂。
[0008] 上述一种含升麻的植物组合物提取方法，制备方法中微波萃取功率为500W，每次 萃取6分钟。
[0009] -种含升麻的植物组合物在制备抑制大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤PC-12细胞增殖药 物中的应用，含升麻的植物组合物由升麻100份，牛耳岩白菜40份、毛叶轮环藤50份、芦子 兰40份作为原料药制成，制备方法由下列步骤组成：取上述原料药，粉碎，加入2L的70% 乙醇，投入微波萃取装置中进行微波萃取，萃取功率为400-600W，萃取2次，每次4-8分钟， 合并萃取液，浓缩，加到DlOl大孔吸附树脂柱上，50%乙醇洗脱，收集5倍量柱体积洗脱液， 减压回收乙醇，浓缩并干燥，得微波提取物，加常规辅料制备成片剂、胶囊或颗粒剂。
[0010] 上述一种含升麻的植物组合物在制备抑制大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤PC-12细胞增 殖药物中的应用，制备方法中所述微波萃取功率为500W，每次萃取6分钟。
[0011] 现有技术中，含升麻的植物组合物每片0. 4g，每次4片，一日3次，采用本发明制备 成的含升麻的植物组合物每片〇. 4g，但含有的药材量是原来的2倍，因此每次仅需2片，一 日服用3次，在具有更多活性成分的条件下大大减少了服用量。
【具体实施方式】
[0012] 以下通过实施例形式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明，但不应将此 理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例，凡基于本发明上述内容所实现的技术均 属于本发明的范围。
[0013] 实施例1
[0014] 取升麻100份，牛耳岩白菜40份、毛叶轮环藤50份、芦子兰40份，粉碎，加入2L 的70 %乙醇，投入微波萃取装置中进行微波萃取，萃取功率为400-600W，萃取2次，每次4-8 分钟，合并萃取液，浓缩，加到DlOl大孔吸附树脂柱上，50%乙醇洗脱，收集5倍量柱体积洗 脱液，减压回收乙醇，浓缩并干燥，得微波提取物，加常规辅料制备成片剂，每片〇. 4g。
[0015] 实施例2
[0016] 取升麻100份，牛耳岩白菜40份、毛叶轮环藤50份、芦子兰40份，粉碎，加入2L 的70 %乙醇，投入微波萃取装置中进行微波萃取，萃取功率为400-600W，萃取2次，每次4-8 分钟，合并萃取液，浓缩，加到DlOl大孔吸附树脂柱上，50%乙醇洗脱，收集5倍量柱体积洗 脱液，减压回收乙醇，浓缩并干燥，得微波提取物，加常规辅料制备成胶囊。
[0017] 实施例3
[0018] 取升麻100份，牛耳岩白菜40份、毛叶轮环藤50份、芦子兰40份，粉碎，加入2L 的70 %乙醇，投入微波萃取装置中进行微波萃取，萃取功率为400-600W，萃取2次，每次4-8 分钟，合并萃取液，浓缩，加到DlOl大孔吸附树脂柱上，50%乙醇洗脱，收集5倍量柱体积洗 脱液，减压回收乙醇，浓缩并干燥，得微波提取物，加常规辅料制备成颗粒剂。
[0019] 牛耳岩白菜为苦苣苔科唇柱苣苔属植物牛耳朵Chirita eburnea Hance，以根或 全草入药。四季可采。补虚，止咳，止血，除湿。用于阴虚咳嗽，肺结核咳血，红崩，白带。外 用治外伤出血，痈疮。本发明以根入药。
[0020]毛叶轮环藤，拉丁名为Cycleabarbata(Wall. )Miers，毛茛目，防已科，散热解毒， 散淤止痛。用于急性扁桃体炎，咽喉炎，牙痛，胃痛，腹痛，胃肠炎，疟疾，跌打损伤。本发明 以全草入药。
[0021] 芦子兰，胡椒科胡椒属植物荨麻叶胡椒，以全株入药。全年可采，切片晒干。理气 止痛。用于感冒，胃痛，痛经，跌打损伤，风湿骨痛。
[0022] 实施例4 :含升麻的植物组合物抑制大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤PC-12细胞增殖的实 验研究资料
[0023] 1实验材料
[0024] I. 1实验用细胞株
[0025] 大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤PC-12细胞，南京医科大学实验动物中心实验室细胞库， DMEM+10% FBS常规培养。
[0026] 1. 2实验药物
[0027] 研究药物：本发明含升麻的植物组合物：按实施例1方法制备。
[0028]药液储液：称取IOOmg含升麻的植物组合物，溶于5ml无水乙醇中，0. 2ym滤器过 滤，500yIdoff管分装，-20°C存储，同时0.2ym滤器过滤无水乙醇以备对照组之用。
[0029] I. 3实验试剂
[0030] DMEM(GIBC0 公司 Cat. No. 12100-061Lot. No. 758137);胎牛血清（浙江天 杭生物科技有限公司Lot. No. 100419) ;NaHC03 (上海久亿化学试剂有限公司Cat. No.11810-033Lot. No. 1088387) Jrypsin(AMRESC0 公司批号：2010/04) ;EDTA(AMRESC0 公司批号：2009/10) !Penicillin G Sodium Salt(AMRESC0公司批号：2010242); Str印tomycin Sulfate (AMRESC0公司批号：2010382);无水乙醇（南京化学试剂有限公司 批号：080310182) ;MTT(Biosharp 批号：0793) ;PBS(实验室自配）；
[0031] 1.4实验器材
[0032] 莱卡倒置显微镜（德国Leica型号：DMlL);可见-紫外光微孔板检测仪（美国MD 公司型号：SPECTRA MAX 190) ;C02培养箱（FORMA型号：3111);超净台（苏净集团安泰公 司制造型号：SW-CJ-ZFD);纯水仪（美国Spring公司型号：S/N 020579);精密移液器（法 国吉尔森公司型号：P2);电子天平（德国赛多利斯有限公司型号：BT323S);全自动高压灭 菌锅（日本SANYO公司型号：MLS-3020);台式电热鼓风干燥箱（上海精密实验设备公司型 号：DHG9123A);冰箱（西门子公司型号：KG18V21TI);液氮罐（CBS型号：2001);低速离心 机（上海安亭科学仪器厂型号：KA-1000) ;0? 2ym滤器（MILLIP0RE型号：SLGP033RB) ;10cm 培养皿（NEST公司）、96孔培养板（NEST公司）；细胞计数板；离心管、移液管、Tips若干。
[0033] 2实验方法
[0034] 1)大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤PC-12细胞用DMEM+10% FBS于37°C、5% C02进行常 规培养（10cm培养皿），当细胞生长至对数期时，收集细胞，弃去培养液，PBS轻洗3遍，加入 3ml 0. 25%胰蛋白酶-0. 04% EDTA，37°C消化2min后，向其中加入5ml完全培养基中和反 应，吹打细胞后将其转入离心管中，1000 rpm离心5min，调整细胞悬液浓度3X IO4个/ml。
[0035]2)将细胞种入96孔培养板中，每孔加入细胞悬液180 y 1，培养板放入细胞培养箱 中（37°C，5% C02)常规培养。
[0036] 3)根据细胞生长情况，一般长至50 % -70 %，加入含升麻的植物组合物溶液，继续 培养24h。
[0037]4) 24h 后加入 20 y I MTT 溶液（5mg/ml，即 0? 5 % MTT)，继续培养 4h。
[0038] 5)4h后扣板法倒去上清，用吸水纸轻轻拍干，每孔加入200 y 1二甲基亚砜，置摇 床上低速振荡l〇min，使结晶物充分溶解。在酶联免疫检测仪490nm处测量各孔的吸光值。
[0039] 6)同时设置本底（不加细胞，只加培养液），对照孔（细胞、相同浓度的药物溶解 介质、培养液、MTT、二甲基亚砜），每组设定6个复孔。
[0040] 7)结果以药物对细胞的抑制率表示：
[0041] 细胞增值抑制率（％ )=(对照孔OD值-给药孔OD值）/对照孔OD值X 100 %。 实验重复3次。
[0042] 3统计处理
[0043] 采用Microsoft Excel 2003软件中的相关分析和Student t检验，数据以 mean iS. D.表不。
[0044] 4实验结果
[0045] MTT法实验后统计结果显示，与对照组比较，当剂量达到5mg/ml时，对大鼠肾上腺 嗜铬细胞瘤PC-12细胞增殖抑制有差异（P〈0. 05)，剂量在lOmg/ml时该差异具有显著性 (P〈0. 01)，当剂量达到15-20mg/ml时有极显著性差异（P〈0. 001)。
[0046] 表1含升麻的植物组合物对大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤PC-12细胞增殖抑制影响研究 这土SD)
[0047]
[0048] 注：与对照组比较，*P〈0. 01 ;#P〈0. 001
[0049] 5实验结论
[0050] 含升麻的植物组合物可以抑制大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤PC-12细胞增殖，减少大鼠 肾上腺嗜铬细胞瘤PC-12细胞的细胞生长数目，该作用呈剂量依赖性。
【主权项】
1. 一种含升麻的植物组合物提取方法，其特征在于植物组合物由升麻100份，牛耳岩 白菜40份、毛叶轮环藤50份、芦子兰40份作为原料药制成，制备方法由下列步骤组成：取 上述原料药，粉碎，加入2L的70%乙醇，投入微波萃取装置中进行微波萃取，萃取功率为 400-600W，萃取2次，每次4-8分钟，合并萃取液，浓缩，加到DlOl大孔吸附树脂柱上，50 % 乙醇洗脱，收集5倍量柱体积洗脱液，减压回收乙醇，浓缩并干燥，得微波提取物，加常规辅 料制备成片剂、胶囊或颗粒剂。2. 根据权利要求1所述一种含升麻的植物组合物提取方法，其特征在于制备方法中微 波萃取功率为500W，每次萃取6分钟。3. -种含升麻的植物组合物在抑制大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤PC-12细胞增殖药物中的 应用，其特征在于含升麻的植物组合物由升麻100份，牛耳岩白菜40份、毛叶轮环藤50份、 芦子兰40份作为原料药制成，制备方法由下列步骤组成：取上述原料药，粉碎，加入2L的 70%乙醇，投入微波萃取装置中进行微波萃取，萃取功率为400-600W，萃取2次，每次4-8分 钟，合并萃取液，浓缩，加到DlOl大孔吸附树脂柱上，50%乙醇洗脱，收集5倍量柱体积洗脱 液，减压回收乙醇，浓缩并干燥，得微波提取物，加常规辅料制备成片剂、胶囊或颗粒剂。4. 根据权利要求3所述一种含升麻的植物组合物在抑制大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤PC-12 细胞增殖药物中的应用，其特征在于制备方法中所述微波萃取功率为500W，每次萃取6分 钟。
【专利摘要】本发明提供一种含升麻的植物组合物提取方法，由升麻100份，牛耳岩白菜40份、毛叶轮环藤50份、芦子兰40作为原料药制成，采用微波提取方法制备而成，使得含量有很大提高，用量减少，本发明还提供了含升麻的植物组合物在制备抑制大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤PC-12细胞增殖药物中的应用。
【IPC分类】A61P35/00, A61K36/71
【公开号】CN105193967
【申请号】CN201510580453
【发明人】赵明亮
【申请人】南京正亮医药科技有限公司
【公开日】2015年12月30日
【申请日】2015年9月12日