手柄；
[0035]步骤305、从手拧接头处插入萃取剂毛细管，调节毛细管插入样品内部的深度；
[0036]步骤306、将手拧接头与萃取剂通道连接，通过连接器将萃取剂通道的萃取剂毛细管与手拧接头连接，固定内部萃取电离源于精细调控装置上，向内部萃取电喷雾电离源装置内部通入萃取剂；
[0037]步骤307、进样泵控制微量进样器；
[0038]其中，可设定流速为0.1?3 μ L/min。
[0039]步骤308、向引入萃取剂的萃取剂通道口的金属针头上施加直流电压，使萃取剂萃取出的样品内部物质得以电离；
[0040]其中，直流电压设为为4?7kV。
[0041]步骤309、调节内部萃取电喷雾电离源装置与质谱仪进样口之间的角度和位置；
[0042]步骤310、打开质谱仪扫描系统，获取检测结果。
[0043]如图4所示，本发明将内部萃取电喷雾电离源装置与质谱仪配合使用，通过电喷雾内部萃取电离质谱(Internal Extractive Electrospray 1nizat1n MassSpectrometry, iEES1-MS)技术，能够直接获取凝聚态样品内部及表面信息，同时具有电喷雾萃取电离质谱(EES1-MS)技术分析速度快、基体耐受性好等优点，因此，iEES1-MS特别适用于分析样品深层次的信息。陈焕文等人采用iEES1-MS技术分析了草莓、大蒜、萝卜、动物和人体组织等样品，充分证明了其设计合理性。然而应用中，iEESI也存在着样品引入量不确定、引入效率低、被分析时组织样品的喷雾方向受样品纹路或血管等影响分析效果的不足，因此为获得可靠的分析结果，需要增加样品的分析数量，增添了工作量。
[0044]下面介绍应用本发明内部萃取电喷雾电离源进行质谱法分析人体肺癌组织的案例如下:
[0045]在外科手术中，能够准确快速判定肿瘤边缘，保证能够完全切除恶性肿瘤，又不过多地切除正常组织，可以有效地提高癌症病人的生存效率，具有良好的预期社会效益。传统的切除手术如何确定切除范围完全由医生根据自身经验进行判断，因此，受人为经验的影响很大，过多的组织切除会对患者健康和术后恢复造成影响，而如果病变组织未能够被完全切除，有癌症复发的可能。考虑到肉体组织的特性，如肺部组织正常色红，触之质软，有捻发感；病变组织颜色各异，有白色、暗红色等，触之较硬，因此如何取得固定形状和大小的组织是一个需要解决的问题。
[0046]采用常压质谱分析的方法，快速确定病变组织和癌旁正常组织的指纹谱图，手术中通过对组织的持续检测，以确定病变组织能够被完全切除，而癌旁正常组织能够最大程度的被保留，对于手术有十分重要的临床意义。
[0047]如图7所示为本案例中iEESI源主要结构及工作原理图，实验中，用取样器手柄配合定量取样器对人体肺组织样品进行按压切割，切割后按入毛细管固定器中，按照权利要求书中的方法组装内部萃取电喷雾电离源。选用丙酮/水/乙酸(50:50: l，v/v/v)做为萃取剂，施加5kV的高电压，以2 μ L/min的流速通入人体肺组织中，对癌症组织和癌旁组织分别进行快速质谱分析，获得了两种组织的质谱指纹谱图(图5为肺癌组织谱图，图6为癌旁组织谱图)分析结果具有明显的差异性，为了对分析结果进行确定，对实验进行了多次重复，实验结果具有一致性，验证了该分析方法的可重复性。
[0048]以上实验表明，本发明利用内部萃取电喷雾电离质谱法(iEES1-MS)，由于使用定量采样技术，能够对复杂基体生物样品内部物质进行稳定可靠的检测，大大扩展了质谱分析的应用范围。同时，将微量取得的块状组织，用结构简单、操作方便、高灵敏度、无损、无污染、实时在线检测的直接电离技术iEESI耦合不同型号的质谱仪器，为不规则块状组织采样与检测等领域的研宄提供了一种实时在线、获取样品信息全面的分析技术。该技术可广泛适用于食品安全、成分分析、生物医药、临床诊断等领域。
[0049]以上对本发明进行了详细介绍，本文中应用了具体个例对本发明的原理及实施方式进行了阐述，以上实施例的说明只是用于帮助理解本发明的方法及其核心思想；同时，对于本领域的一般技术人员，依据本发明的思想，在【具体实施方式】及应用范围上均会有改变之处，综上所述，本说明书内容不应理解为对本发明的限制。
【主权项】
1.一种内部萃取电喷雾电离源装置，其特征在于，由取样器手柄(11)、定量取样器(12)、毛细管固定器(13)、固定器内套管(14)、萃取剂毛细管(15)、手拧接头(16)和萃取剂通道(17)构成，所述取样器手柄(11)与定量取样器(12)构成取样装置，定量取样器(12)、毛细管固定器(13)、固定器内套管(14)、萃取剂毛细管(15)和手拧接头(16)顺序连接，并与萃取剂通道(17)连接。2.根据权利要求1所述的内部萃取电喷雾电离源装置，其特征在于，所述取样器手柄(11)设有防滑套，与定量取样器(12)连接口既能保证结合紧密，又能保证定量取样器(12)方便脱离，取样器手柄(11)材质可按需选择。3.根据权利要求1所述的内部萃取电喷雾电离源装置，其特征在于，定量取样器(12)由不锈钢制成，所述定量取样器(12)的样品切割端为锋利结构，而所述定量取样器(12)的电喷雾端成锥形，所述定量取样器(12)的内部靠近样品切割端为空心结构，可用于盛放样品，所述电喷雾端中心设有小孔且内部光滑。4.根据权利要求1所述的内部萃取电喷雾电离源装置，其特征在于，毛细管固定器(13)—端可与定量取样器(12)无缝隙紧密连接，另一端与手拧接头(16)紧密连接，毛细管固定器材质具有防裂功能。5.根据权利要求1所述的内部萃取电喷雾电离源装置，其特征在于，固定器内套管(14)与毛细管固定器(13)同轴紧密结合，中心小孔按需加工，便于不同尺寸毛细管从中心小孔通过并插入定量取样器(12)内样品中，其材质可为不带来污染的任意硬度大的材料。6.根据权利要求1所述的内部萃取电喷雾电离源装置，其特征在于，萃取剂毛细管(15)尺寸可按需选择，萃取剂毛细管(15)涂层稳定不解离，萃取剂毛细管(15)从手拧接头(16)卡头处插入至样品不外露。7.根据权利要求1所述的内部萃取电喷雾电离源装置，其特征在于，萃取剂通道(17)由微量进样器、进样泵和石英毛细管构成。8.根据权利要求1至7所述的内部萃取电喷雾电离源装置，其特征在于，手拧接头(16)内置毛细管卡头，细管卡头可根据萃取剂毛细管尺寸进行更换，手拧接头(16) —端与毛细管固定器(13)无缝隙紧密连接，另一端与萃取剂通道(17)连接。9.一种内部萃取电喷雾电离质谱分析方法，其特征在于，使用权利要求1至9任一所述内部萃取电喷雾电离源装置采集样品并将样品内部物质萃取离子化后将样品离子引入质谱分析。10.根据权利要求9所述的内部萃取电喷雾电离质谱分析方法，其特征在于，包括: 从毛细管固定器一端将固定器内套管装配于毛细管固定器中； 将毛细管固定器一端与手拧接头紧密连接； 将取样器手柄与定量取样器组合，对样品进行按压切割后完成取样； 将结合在取样器手柄上的携有样品的定量取样器按入毛细管固定器另一端，取下取样器手柄； 从手拧接头处插入萃取剂毛细管，调节毛细管插入样品内部的深度； 将手拧接头与萃取剂通道连接，通过连接器将萃取剂通道的萃取剂毛细管与手拧接头连接，固定内部萃取电离源于精细调控装置上，向内部萃取电喷雾电离源装置内部通入萃取剂； 进样泵控制微量进样器，设定流速为0.1?3 μ L/min ； 向引入萃取剂的萃取剂通道口的金属针头上施加直流电压，使萃取剂萃取出的样品内部物质得以电离，其中，直流电压为4?7kV ; 调节内部萃取电喷雾电离源装置与质谱仪进样口之间的角度和位置； 打开质谱仪扫描系统，获取检测结果。
【专利摘要】本发明涉及分析化学领域，公开了一种内部萃取电喷雾电离源及其质谱分析方法，该内部萃取电喷雾电离源由取样器手柄11、定量取样器12、毛细管固定器13、固定器内套管14、萃取剂毛细管15、手拧接头16和萃取剂通道17构成，所述取样器手柄11与定量取样器12构成取样装置，定量取样器12、毛细管固定器13、固定器内套管14、萃取剂毛细管15和手拧接头16顺序连接，并与萃取剂通道17连接。本发明保证分析结果的稳定性和可信度。该电离源装置内置电喷雾嘴，取样后可直接用于形成电喷雾，操作简便，并消除了由组织样品纹路或血管的差异带来的影响。本发明提高了iEESI-MS的稳定性、定量能力和分析速度，并扩展了iEESI-MS的应用范围。
【IPC分类】H01J49/10, G01N27/62
【公开号】CN104966658
【申请号】CN201510394288
【发明人】陈焕文, 周炜, 刘坤, 魏益平, 朱亮, 徐建军, 王志豪
【申请人】东华理工大学, 南昌大学第二附属医院
【公开日】2015年10月7日
【申请日】2015年7月7日