专利名称：有机化合物的制作方法
技术领域：
本发明涉及新的2-(任选地杂)芳基甲基-3-(任选地杂)芳基氨基-[2用-吡唑并[3，4-dl嘧啶-4，6(5好,7i/)-二酮化合物、它们的制备方法、它们作为药物的用途以及包含它们的药物组合物。特别感兴趣的是可用作磷酸二酯酶1(PDE1)抑制剂、例如可用于治疗涉及多巴胺D1受体细胞内途径障碍的疾病如帕金森病、抑郁、发作性睡眠和认识功能损害(例如精神分裂症中的认知功能损害)或可通过增强孕酮信号发送途径而被改善的障碍例如女性性功能障碍的新化合物。
背景技术：
已经鉴定了H"—族磷酸二酯酶(PDE)，但是已经表明仅第I族的PDE、即Ca、钩调蛋白-依赖性磷酸二酯酶(CaM-PDE)同时介导钙和环核苷酸(例如cAMP和cGMP)信号发送途径。三种已知的CaM-PDE基因、即PDE1A、 PDE1B和PDE1C均在中枢神经系统组织中表达。PDE1A在整个脑中表达，在海马和小脑的CA1至CA3层中表达水平较高，在紋状体中表达水平低。PDE1A也在肺和心脏中表达。PDE1B主要在紋状体、齿状回、嗅束和小脑中进行表达，并且其表达与具有高水平多巴胺能神经分布的脑区域相关。虽然PDE1B主要在中枢神经系统中表达，但是在心脏中也可检测到PDE1B。 PDE1C主要在嗅上皮、小脑颗粒细胞和紋状体中表达。PDE1C也在心脏和血管平滑肌中表达。
环核苷酸磷酸二酯酶通过将这些环核苷酸水解成其各自无活性的5，-一磷酸类(5，AMP和5，GMP)而降低细胞内cAMP和cGMP信号发送。CaM-PDE在介导脑细胞中、特别是被称为基底神经节或紋状体的脑区域内的信号转导中起重要作用。例如，NMDA-型谷氨酸受体活化和/或多巴 胺D2受体活化造成细胞内钩浓度增加，从而导致效应器如钩调蛋白-依赖 性激酶II (CaMKII)和钙调磷酸酶的活化和CaM-PDE的活化，从而造成 cAMP和cGMP减少。另一方面，多巴胺Dl受体活化导致核苷酸环化酶 的活化，从而造成cAMP和cGMP增加。这些环核苷酸又活化蛋白激酶A (PKA; cAMP-依赖性蛋白激酶)和/或蛋白激酶G (PKG; cGMP-依赖性蛋白 激酶)，其磷酸化下游信号转导途径元件如DARPP-32 (多巴胺和cAMP-调 控的磷蛋白)和cAMP反应元件结合蛋白(CREB)。磷酸化的DARPP-32又 抑制蛋白磷酸酯-l(PP-l)的活性，从而增加底物蛋白如孕酮受体(PR)的磷酸 化状态，从而导致生理学反应的诱导作用。用啮齿类动物进行的研究已经 表明通过活化多巴胺Dl或孕酮受体来诱导cAMP和cGMP合成增强与多 种生理学反应有关的孕酮信号发送，所述生理学反应包括与一些啮齿类动 物对交配的感受性有关的脊柱前凸反应。参见Mani等人，Science (2000) 287:1053，将其内容引入本文作为参考。
因此，CaM-PDE能影响基底神经节(纹状体)中多巴胺-调控的和其它 的细胞内信号发送途径，包括但不限于一氧化氮、去甲肾上腺素能、神经 降压肽、CCK、 VIP、血清素、谷氨酸(例如NMDA受体、AMPA受体)、 GABA、乙酰胆碱、腺苷(例如A2A受体)、大麻素受体、利尿钠肽(例如 ANP、 BNP、 CNP)、 DARPP-32和内啡肽细胞内信号发送途径。
磷酸二酯酶(PDE)活性、特别是磷酸二酯酶l (PDE1)活性在脑组织中 作为活动能力(locomotor activity)和学习及记忆的调节物发挥作用。PDE1 是调节细胞内信号发送途径的治疗靶标，所述细胞内信号发送途径优选在 神经系统中，包括但不限于多巴胺D1受体、多巴胺D2受体、 一氧化氮、 去甲肾上腺素能、神经降压肽、CCK、 VIP、血清素、谷氨酸(例如NMDA 受体、AMPA受体)、GABA、乙酰胆碱、腺苷(例如A2A受体)、M素受 体、利尿钠肽(例如ANP、 BNP、 CNP)、内啡肽细胞内信号发送途径和孕 酮信号发送途径。例如，抑制PDE1B将通过保护cGMP和cAMP不被降 解而发挥作用以增强多巴胺Dl激动剂的作用，并且应通过抑制PDE1活
9性抑制多巴胺D2受体信号发送途径。细胞内钙水平的长期升高与许多障 碍、特别是神经变性疾病如阿尔茨海默病、帕金森病和亨廷顿舞蹈病中以 及导致中风和心肌梗塞的循环系统障碍中的细胞死亡有关。因此，PDE1 抑制剂可能用于以多巴胺Dl受体信号发送活性降低为特征的疾病，如帕 金森病、多动腿综合征、抑郁、发作性睡眠和认知功能损害。PDE1抑制 剂还可用于可通过增强孕酮-信号发放而被减轻的疾病如女性性功能障碍。 因此，需要选择性抑制PDE1活性、尤其是PDE1B活性的化合物。
发明概述
本发明提供了游离形式、盐形式或前体药物形式的新的2-(任选地杂) 芳基甲基-3-(任选地杂)芳基氨基-[2用-吡唑并p，4-dl嘧咬-4，6(5仏7H)-二酮 (在下文被称为"本发明的化合物")。2-位上的(任选的)杂芳基部分优选是 相对于连接点被芳基或杂芳基对位取代、例如被苯基、吡咬基或噻二唑基 取代的千基或吡咬基甲基。令人吃惊地发现这些化合物选择性抑制磷酸二 酯酶1 (PDE1)活性，例如PDE1A、 PDE1B和PDE1C活性，尤其是PDE1B 活性。
本发明的化合物优选是游离形式、盐形式或前体药物形式的式I的吡 唑并3，4-d嗜咬-4，6(5ff， 7⑦-二酮
R5
R2
式I
其中
(i) R,是H或烃基(例如甲基)；
(ii) R2是H、烃基(例如异丁基、2-曱基丁基、2，2-二甲基丙基)、环烃基
10(例如环戊基、环己基)、卣代烃基(例如三氟甲基、2，2,2-三氟乙基)、烃 基氨基烃基(例如2-(二曱氨基)乙基)、羟基烃基(例如3-羟基-2-甲基丙 基)、芳基烃基(例如苄基)、杂芳基烃基(例如吡咬基甲基)或烃氧基芳基 烃基(例如4-甲氧基苄基)；
(iii) R3是被取代的杂芳基烃基，例如被卣代烃基取代 或者
R3与式1的吡唑并部分上的氮原子之一相连并且是式A的部分
其中X、 Y和Z独立地是N或C， R8、 R9、 Ru和Ri2独立地是H或卤素(例 如C1或F); R,o是卤素、烃基、环烃基、卤代烃基(例如三氟甲基)、芳基(例 如苯基)、杂芳基(例如吡咬基(例如吡啶-2-基)或例如噻二唑基(例如1，2，3-漆二哇_4-基)、二唑基、三唑基(例如1，2，4-三唑-1-基)、四唑基(例如四唑-5-基)、烃鳴二唑基(例如5-甲基-l，2,4-噁二唑)、吡唑基(例如吡唑-l-基)、烃 基磺酰基(例如甲基磺酰基)、芳基羰基(例如苯甲酰基)或杂芳基羰基、烃氧
基羰基(例如甲氧基羰基)、氨基羰基；优选苯基或吡吱基，例如2-吡咬基；
前提是当X、 Y或X是氮时，R8、 R9或R^分别不存在；
(iv) R4是芳基(例如苯基)或杂芳基；和
(v) Rs是H、烃基、环烃基(例如环戊基)、杂芳基、芳基、对-苄基芳 基(例如联笨-4-基甲基)；
其中"烃"或"烃基"是指Q-6烃基，"环烃基，，是指C3—6环烃基。
本发明进一步提供了如下的式I化合物 l.l其中Ri是甲基的式I; 1.2其中R2是Q-6烃基的式I或1.1;1.3其中R2是异丁基、2，2-二甲基丙基或2-甲基丁基的式1.2;
1.4其中R2是羟基d.6烃基的式I或1.1;
1.5其中R2是3-羟基-2-甲基丙基的式I或1.1;
1.6其中R2是d—6烃氧基-节基的式I或1.1;
1.7其中R2是对-甲氧基节基的式l,6;
1.8其中议2是(:3.6环烃基的式1或1.1;
1.9其中R2是环戊基或环己基的式1.8;
1.10其中R2是C,-6卤代烃基的式I或1.1;
1.11其中R2是2,2，2-三氟乙基的式1.10;
1.12前式中的任何一种，其中R3是其中R8、 R9、 Rn和Ru各自是H且 R,o是苯基的式A的部分；
1.13前面式1-1.11中的任何一种，其中R3是其中Rs、 R9、 Ru和Ru各自 是H且R^)是吡咬基或噻二唑基的式A的部分；
1,14式1.13，其中R3是其中Rs、 R" Ru和Ru各自是H且Rn)是2-吡啶 基的式A的部分；
1.15前式中的任何一种，其中R4是苯基； 1.16前式中的任何一种，其中Rs是H; 1.17前式中的任何一种，其中X、 Y和Z均是C; 1.18前式中的任何一种，其中R2是四氢呋喃-2-基甲基； 1.19前式中的任何一种，其中Rw是嘧咬基； 1.20式1.19的化合物，其中所述嘧"^&是5-氟嘧^; 1.21前式中的任何一种，其中Rw是吡唑-l-基； 1.22前式中的任何一种，其中Rm是l，2，4-三唑-l-基； 1.23前式中的任何一种，其中Rw是氨基羰基； 1.24前式中的任何一种，其中Rw是甲基磺酰基； 1.25前式中的任何一种，其中R,o是5-甲基-1，2，4-哺、二唑-3-基； 1.26前式中的任何一种，其中Rw是5-氟嘧啶-2-基； 1.26前式中的任何一种，其中R4是4-氟苯基；1.27前式中的任何一种，其中R,o是三氟甲基；
1.28前式中的任何一种，其中R3是式A的部分，X和Z是C，且Y是N; 1.29化合物，其选自下面实施例l-24的化合物；和/或 1.30前式中的任何一种，其中所述化合物抑制磷酸二酯酶-介导的(例如， PDEl-介导的，尤其是PDElB-介导的)cGMP水解，例如，在固定的金属 亲和颗粒试剂PDE测定法(例如，如实施例25所述)中其具有低于1jiM、 优选低于25 nM的IC50;
前式中任何一种所述的该类化合物是游离形式、盐形式或前体药物形式。
在一个尤其优选的实施方案中，本发明的化合物是游离形式或盐形式 的式I的化合物，其中
(i) R,是曱基；
(ii) R2是d-6烃基；
(iii) R3是式A的部分，其中X、 Y和Z均是C， R8、 R9、 Ru和Ru 各自是H， Rh)是笨基、吡咬基(例如吡啶-2-基)或噻二唑基(例如1，2，3-噢二唑-4-基)；
(iv) Rt是苯基；和
(v) Rs是H。
例如，本发明优选的化合物包括游离形式、盐形式或前体药物形式的 式II的化合物
式II<formula>formula see original document page 13</formula>其中
R2是H、烃基(例如异丁基、2-曱基丁基、2，2-二甲基丙基)、环烃基(例 如环戊基、环己基)、杂芳基(例如吡咬基)、芳基(例如苯基)、囟代烃基(例 如三氟甲基、2，2，2-三氟乙基)、烃基氨基烃基(例如2-(二甲氨基)乙基)、羟 基烃基(例如3-羟基-2-曱基丙基)、芳基烃基(例如节基)或烃氧基芳基烃基 (例如4-甲氧基千基)；
其中"烃"或"烃基，，是指q—6烃基；和
Rio是苯基、吡咬基(例如吡咬-2-基)或噻二唑基(例如1,2，3-噻二唑-4-基)。
在某些实施方案中，本发明的化合物是游离形式、盐形式或前体药物 形式的式II的化合物，其中
R2是H、烃基(例如异丁基、2-甲基丁基、2，2-二甲基丙基)、环烃基(例 如环戊基、环己基、四氲呋喃-2-基甲基)、杂芳基(例如吡咬基)、芳基(例如 苯基)、卤代烃基(例如三氟曱基、2，2，2-三氟乙基)、烃基氨基烃基(例如2-(二 曱氨基)乙基)、羟基烃基(例如3-羟基-2-曱基丙基)、芳基烃基(例如苄基)或 烃氧基芳基烃基(例如4-甲氧基苄基)； 和
Rk)是笨基、吡喷差(例如吡咬-2-基)、嘧突基(例如5-氟嘧咬-2-基)、吡 唑基(例如吡唑-l-基)、噻二唑基(例如1，2，3-噻二唑-4-基)、面代烃基(例如三 氟甲基)、烃基磺酰基(例如甲基磺酰基)、碌、二唑基(例如5-甲基-1，2，4-嗜、二 峻-3-基)、氨基羰基(例如，从而形成4-苯甲酰胺结构)、三唑基(例如1,2,4-三唑-l-基)；
其中"烃"或"烃基"是指C"烃基。
如果上下文没有少见定或没有清楚说明，则本文的下列术语具有下面的 含义
(a)本文所用的"烃基"是饱和或不饱和的烃部分，优选是饱和的， 优选具有1至6个碳原子，其可以是直链或支链的，并且可任选地被 单-、二-或三-取代，例如被卣素(例如氯或氟)、幾基或M取代。(b) 本文所用的"环烃基，，是饱和或不饱和的非芳族烃部分，优选是
饱和的，优选包含3至9个碳原子，其中至少一些碳原子形成非芳族 的单环或二环或桥连的环状结构，并且其可任选地被取代，例如被囟
素(例如氯或氟)、羟基或羧基取代。在某些实施方案中，环烃基可任 选地在其环部分或连接部分中包含一个或多个杂原子例如氮、氧或硫， 例如四氢呋喃基曱基。
(c) 本文所用的"芳基"是单环或二环的芳族烃，优选苯基，其任选 地被取代，例如被烃基(例如甲基)、闺素(例如氯或氟)、卣代烃基(例 如三氟甲基)、羟基、羧基或另外的芳基或杂芳基(例如联苯基或吡啶 基苯基)取代。
(d) 本文所用的"杂芳基"是其中组成芳族环的一个或多个原子是石克 或氮而非碳的芳族部分，例如吡咬基或噻二唑基，其可任选地被取代， 例如被烃基、卣素、卣代烃基、羟基或羧基取代。
(e) 为了便于参考，除非另有说明，否则按照式I中所迷的编号对本 发明的化合物的吡唑并嘧咬核进行编号。
本发明的化合物可以以游离形式或盐形式存在，例如以酸加成盐形式 存在。在本说明书中，除非另有说明，否则措辞如"本发明的化合物"应 理解为包括任何形式例如 游离形式或酸加成盐形式的化合物，或者在化合 物包含酸性取代基的情况中，包括碱加成盐形式的化合物。本发明的化合 物被用作药物，因此优选药学上可接受的盐。不适合药用的盐也可能是有 用的，例如用于分离或纯化游离的本发明的化合物或其药学上可接受的盐， 因此也被包括在本发明中。
本发明的化合物在一些情况中也可以以前体药物形式存在。前体药物 形式是在体内转化成本发明的化合物的化合物。例如，当本发明的化合物 包含羟基或g取代基时，这些取代基可形成生理学可水解和可接受的酯。 本文所用的"生理学可水解和可接受的酯"是指可在生理条件下水解产生 酸(在具有羟基取代基的本发明的化合物的情况中)或醇(在具有羧基取代基 的本发明的化合物的情况中)的本发明的化合物的酯，其本身在施用剂量下是生理学可耐受的。如将意识到的那样，该术语因此包括常规的药用前体 药物形式。
本发明还提供了制备本发明的化合物的方法、可用于制备本发明的化 合物的新中间体以及用本发明的化合物治疗下述疾病和障碍(尤其是治疗
以多巴胺D1受体信号发送活性降低为特征的疾病，如帕金森病、图雷特 综合征、孤独症、脆性X染色体综合征、ADHD、多动腿综合征、抑郁和 精神分裂症的认知功能损害)的方法。
发明详述
新务叔鄉合#財法
式I的化合物以及其药学上可接受的盐可以通过本文所述和所例举的 方法和通过与其类似的方法以及通过化学领域已知的方法来制备。该类方 法包括但不限于下面所述的那些方法。如果不能商购获得，则用于这些方 法的起始材料可以用选自化学领域的操作使用与已知化合物的合成类似或 相似的技术来制备。本文所引用的所有参考资料在此均被全部引入作为参 考。
本发明的化合物包括其对映异构体、非对映异构体和外消旋物以及其 多晶型物、水合物、溶剂化物和复合物。本发明的范围内的一些个别化合 物可包含双键。本发明中双键的描述包括双键的E和Z异构体。此外，本 发明范围内的 一些化合物可包含一个或多个不对称中心。本发明包括任何 光学纯的立体异构体以及立体异构体的任何组合的使用。
熔点是未校正的，(dec)表示分解。温度是以摄氏度(。C)为单位给出的； 除非另有说明，否则操作是在室温或环境温度下、即在18-25。C范围内的温 度下进行的。色谱法是指硅胶快速色谱法；薄层色谱法(TLC)是在硅胶板 上进行的。NMR数据是以主要特征质子的8值给出的，单位是相对于作 为内标的四甲^烷(TMS)的百万分数(ppm)。使用信号形式的常规缩写。 偶合常数(J)是以Hz为单位给出的。对于质谱(MS)而言，在同位素分裂产 生多重质谱峰的情况中，报告了分子的最低质量主要离子。溶剂混合组合物是以体积百分比或体积比的形式给出的。在NMR语复杂的情况中，仅 报告特征信号。
术语和缩写 But()H=炎-丁醇， CAN -硝酸铈(IV)铵， DIPEA= 二异丙基乙基胺， DMF = N，N-二曱基曱酰胺， DMSO= 二曱基亚砜， Et20=乙醚， EtOAc=乙酸乙酯， equiv.=当量， h=小时，
HPLC =高效液相色语法， K2C03=碳酸钾， MeOH=甲醇， NaHC03=碳酸氬钠， NH4OH=氬氧化铵， PMB=对-甲氧基千基， POCl3=三氯氧化磷， SOCl2=亚石克酰氯， TFA=三氟乙酸， THF=四氢吹喃。
下面对本发明的合成方法进行阐述。除非另有说明，否则基团R的含 义如上面式I中所述。
在本发明的一个方面，式lib的中间体化合物可以通过使式IIa的化 合物与二羧酸、乙酸酐和乙酸混合物在加热下反应约3小时、然后冷却来
合成0
9 h。 。 ac0h r1、n hnjlnh + + (ch3c。)2o -^—^ 丄
3 , U ^ 9。。c 。<^y》0
("a> (lib) 其中w是H或Cw烃基例如甲基l。
中间体lie可以通过例如使lib的化合物与例如氯化化合物如POCl3
反应(有时具有少量水)并加热约4小时、然后冷却来制备
o 9
R1 义 Ri
、N^ 0°C,滴加 ^ 、7
o人人o+p0c'3 + H2。 然后80 °C,-" (ANAC|
h h
(lib) (llc) 。
中间体lid可以通过使lie的化合物与例如在溶剂如DMF中的P、X 和碱如K2C03在室温下或在加热下反应来形成
o
R1、人 k2c03 、
，ll + p1-x
、Am人 DMF
+' " 07 、N' 、ci
0, 、NT 、Cl p， (lie) ("d)
其中P!是保护基团例如^"-甲氧基苄基(PMB)j; X是离去基团如卤素、甲 磺酸基(mesylate)或甲苯磺酸基(tosylate)。
中间体lie可以通过使IId的化合物与肼或水合肼在溶剂如甲醇中反应 并回流约4小时、然后冷却来制备
R、入 MeOH R1、N\
N1 +NH2NH2H2。 -^ 丄JL NH
一 一 h
(lid) ("e) 。
中间体IIf可以通过使化合物lie与例如异硫氰酸或异氰酸芳基酯在溶 剂如DMF中反应并在110。C下加热约2天、然后冷却来合成
18<formula>formula see original document page 19</formula>
其中W是(杂)芳基或(杂)芳基甲基[例如笨基或苄基]。
中间体IIg可以通过使化合物IIf与例如在溶剂如DMF中的R3-X和 碱如K2C03在室温或加热下反应来形成
<formula>formula see original document page 19</formula>
其中RS如前面所定义[例如任选地被取代的爷基];X是离去基团如卤素、 曱磺酸基或甲M酸基。
中间体Ilh可以通过用适宜的方法除去保护基团P1由化合物IIg来合 成。例如，如果P是对-曱氧基苄基，则可以用AlCb在存在茴香醚的情况 下在室温下将其除去
<formula>formula see original document page 19</formula>
化合物I可以通过使化合物Ilh与例如在溶剂如DMF中的R2-X和/ 或R5-X和碱如K2C03在室温或加热下反应来形成<formula>formula see original document page 20</formula>
其中W和R5如前面所定义[例如环戊基];X是离去基团如卣素、曱磺酸 基或曱苯磺酸基。
还有一种合成化合物I的供替代选捧的方法。
中间体Ilia可以通过使化合物lie与例如在溶剂如DMF中的R2-X和 碱如K2C03在室温或加热下反应来形成<formula>formula see original document page 20</formula>
中间体IIIb可以通过使化合物Ilia与肼或水合肼在溶剂如甲醇中反应 并加热约数小时、然后冷却来制备<formula>formula see original document page 20</formula>
中间体nic可以通过使化合物nib与例如异硫氰酸或异氰酸芳基酯在
溶剂如DMF中反应并在110。C下加热约2天、然后冷却来合成
<formula>formula see original document page 20</formula>化合物I可以通过使化合物IIIc与例如在溶剂如DMF中的R3-X和碱 如K2C03在室温或加热下反应来形成。可使所获得的产物I (R5 = H)进一 步与例如R5-X在碱性条件下反应，从而得到化合物I:
<formula>formula see original document page 21</formula>因此，本发明提供了制备上文所述的本发明的化合物的方法，例如， 其包括
(i)使2H-吡唑并[3，4-dl嘧啶-4，6(5H，7H)-二酮与其中X是离去基团例如卤 素、甲磺酸基或甲苯磺酸基且W是任选地被取代的芳基烃基或杂芳基烃 基、例如其中113是如上面所定义的式A的被取代的苄基的式X-R3的化合 物反应，例如，在碱性条件下反应，例如其中所述2H-吡唑并[:Vi-d嘧啶 -4,6(5H，7H)-二酮是式IIIc的化合物
9 <formula>formula see original document page 21</formula>其中Rp R2和R4如上文所定义，例如参见式I;和/或 (ii)使2H-吡唑并[3，4-d嘧咬-4，6(5H，7H)-二酮与其中X是离去基团例如卤 素、曱磺酸基或甲笨磺酸基且112是烃基、环烃基、芳基烃基或杂环烃基、 例如其中R2是异丁基的式X-I^的化合物反应，例如在碱性条件下反应， 例如其中所述2H-吡唑并[3，4-dl嘧咬-4，6(5H，7H)-二酮是式IIh的化合物
<formula>formula see original document page 21</formula>其中R!、 R;j和R4如上文所定义，例如参见式I。炎^本^:效^^合游的才法
本发明的化合物可用于治疗以cAMP和cGMP介导的途径的破坏或损 害为特征的疾病，例如所述cAMP和cGMP介导的途径的破坏或损害是由 PDE1的表达增加或cAMP和cGMP的表达减少导致的，而cAMP和cGMP 的表达减少是环核苷酸合成诱导物如多巴胺和一氧化氮(NO)被抑制或水 平P争低造成的。通过阻止PDE1B对cAMP和cGMP的降解、从而增加 cAMP和cGMP的细胞内水平，本发明的化合物增强环核苷酸合成诱导物 的活性。
本发明提供了治疗下列病症中的任何一种或多种的方法
(i) 神经变性疾病，包括帕金森病、多动腿(restlessleg)、震颤、运 动障碍、亨廷顿舞蹈病、阿尔茨海默病和药物诱导的运动失调；
(ii) 精神障碍，包括抑郁、注意力缺陷障碍、注意缺陷多动症、双 相性障碍(bipolarillness)、焦虑、睡眠障碍例如发作性睡眠、认 知功能损害、痴呆、图雷特综合征、孤独症、脆性X染色体综 合征、精神兴奋剂戒断和药物成瘾；
(iii) 循环和心血管障碍，包括脑血管疾病、中风、充血性心脏病、 高血压、肺动脉高压和性功能障碍；
(iv) 呼吸和炎性障碍，包括哮喘、慢性阻塞性肺病和变应性鼻炎以 及自身免疫性和炎性疾病；
(v) 以表达PDE1的细胞中低水平的cAMP和/或cGMP(或者cAMP 和/或cGMP信号发送途径抑制)为特征的任何疾病或病症；和/ 或
(vi) 以多巴胺Dl受体信号发送活性降低为特征的任何疾病或病症， 其包括给需要其的人或动物患者施用有效量的本发明的化合物，例如式 1-1.30中任意一项或式II的化合物。
在一个尤其优选的实施方案中，本发明提供了治疗或预防发作性睡眠 的方法。在该实施方案中，PDE l抑制剂可用作唯一的治疗剂，但是也可 以与其它活性剂组合使用或共同施用。因此，本发明进一步包括治疗发作性睡眠的方法，其包括给需要其的人或动物患者同时(simultaneously)、相 继或并行(contemporaneously)施用治疗有效量的
(i) PDE 1抑制剂，例如式1-1.30中任意一项或式II的化合物，和
(ii) 促进觉醒或调控睡眠的化合物，例如其选自(a)中枢神经系统兴奋 剂-笨丙胺类和苯丙胺样化合物，例如哌甲酯、右旋苯丙胺、去氧麻黄碱 和匹莫林；(b)莫达非尼，(c)抗抑郁药，例如三环类(包括丙咪嗪、去甲丙 咪溱、氯丙咪嗪和普罗替林)和选择性血清素再摄取抑制剂(包括氟西汀和 舍曲林)；和/或(d)Y羟基丁酸盐(GHB)。
在另一个实施方案中，本发明进一步提供了治疗或预防可通过增强孕 酮信号发送而被咸轻的病症的方法，其包括给需要其的人或动物患者施用 有效量的本发明的化合物，例如式1-1.30中任意一项或式II的化合物。可 通过增强孕酮信号发送而被改善的疾病或病症包括但不限于女性性功能障 碍、继发性闭经(例如运动性闭经、无排卵、绝经、绝经期症状、甲状腺功 能减退症)、经前期综合征、早产、不孕例如由于重复流产造成的不孕、不 规则月经周期、异常子宫出血、骨质疏松、自身免疫性疾病、多发性硬化、 前列腺肿大(prostate enlargement),前列腺癌和曱状腺功能减退症。例如， 通过增强孕酮信号发送，PDE l抑制剂可用于通过影响子宫内层来促进排 植入和帮助由于对妊娠或低孕酮功能发生免疫反应而易于流产的女性维持 妊娠。新PDE 1抑制剂、例如本文所述的新PDE 1抑制剂还可用于在绝经 后女性中增强激素替代疗法的有效性，例如可以与雌激素/雌二醇/雌三醇和 /或孕酮/孕激素类组合施用，以及用于雌激素-诱导的子宫内膜增生和癌， 本发明的方法还可用于动物繁殖，例如以诱导待繁殖的非人雌性哺乳动物 的性感受性和/或动情期。
在该实施方案中，PDE l抑制剂可作为唯一的治疗剂用于前面的治疗 或预防方法中，但是也可以与其它活性剂组合使用或共同施用，例如与激 素替代疗法联合。因此，本发明进一步包括治疗可通过增强孕酮信号发送 而被改善的障碍的方法，其包括给需要其的人或动物患者同时、相继或并 行施用治疗有效量的(i) PDEl抑制剂，例如式1-1.30中任意一项或式II的化合物，和
(ii) 激素，例如其选自雌激素和雌激素类似物(例如雌二醇、雌三醇、 雌二醇酯类)以及孕酮和孕酮类似物(例如孕激素类)。
本发明还提供了增强或加强细胞或组织中多巴胺Dl细胞内信号发送 活性的方法，其包括使所述细胞或组织与足以抑制PDE1B活性的量的本 发明的化合物接触。
本发明还提供了增强或加强细胞或组织中孕酮信号发送活性的方法， 其包括使所述细胞或组织与足以抑制PDE1B活性的量的本发明的化合物 接触。
本发明还提供了在需要其的患者中治疗与PDE1有关的、尤其是与 PDE1B有关的障碍、多巴胺D1受体细胞内信号发送途径障碍或可通过增 强孕酮信号发送途径而被减轻的障碍的方法，其包括给所述患者施用有效 量的抑制PDE1B的本发明的化合物，其中PDE1B活性调节DARPP-32 和/或GluRl AMPA受体的磷酸化。
本发明还提供了
(i) 用作药物、例如用于上文所述的任何方法或用于治疗上文所述的任何疾 病或病症的本发明的化合物，
(ii) 本发明的化合物在制备用于治疗上文所述的任何疾病或病症的药物中 的用途，
(iii) 包含本发明的化合物以及与之組合或联合的药学上可接受的稀释剂或 载体的药物组合物，和
组合或联合的药学上可^受的i释剂或载体的药物组合物。'一 、 因此，措辞"治疗，，应理解为包括预防和治疗或改善疾病的症状以及 治疗疾病的原因。
本发明的化合物特别是可用于治疗帕金森病、发作性睡眠和女性性功 能障碍。
本发明的化合物可用作唯一的治疗剂，但是也可以与其它活性剂组合使用或共同施用。例如，因为本发明的化合物加强Dl激动剂如多巴胺的 活性，因此它们可以与常规多巴胺能药物如左旋多巴和左旋多巴助剂 (adjunct)(卡比多巴、COMT抑制剂、MAO-B抑制剂)、多巴胺激动剂和 抗胆碱能药同时、相继或并行施用，例如在患有帕金森病的患者的治疗中。 此外，新PDE 1抑制剂、例如本文所述的新PDE 1抑制剂还可以与雌激素 /雌二醇/雌三醇和/或孕酮/孕激素类组合施用以增强激素替代疗法的有效
性或治疗雌激素诱导的子宫内膜增生或癌。
实施本发明所用的剂量当然将根据例如所治疗的具体疾病或病症、所 用的具体的本发明的化合物、施用方式和所需的治疗而变化。本发明的化 合物可通过任何适宜的途径(包括口服、胃肠外、透皮或吸入)施用，但是 优选口服施用。 一般而言，表明以约0.01至2.0 mg/kg的剂量口服施用可 获得令人满意的结果，例如对于上文所述的疾病的治疗而言。因此，在较 大的哺乳动物例如人中，适用的口服施用的日剂量将为约0.75至150 mg， 方便地每天施用一次或以分剂量施用2至4次或者以持续释放形式施用。 因此，口服施用的单位剂型例如可包含约0.2至75或150mg、例如约0.2 或2.0至50、 75或100 mg本发明的化合物以及药学上可接受的稀释剂或 载体。
包含本发明的化合物的药物组合物可以用盖仑制剂领域中已知的常规 的稀释剂或赋形剂和技术来制备。因此，口服剂型可包括片剂、胶嚢剂、 溶液剂、混悬剂等。
实施例
实施例1:
2-(联苯-4-基甲基)-7-异丁基-5-曱基-3-(苯基氨基)-:2H-吡唑并[3，4-d]嘧啶 -4，6(5H,7H)-二酮(a) 1-甲基嘧梵-2，4，6(1仏3仏5 >三酮
向70。C的丙二酸(80 g， 0,79 mol)和曱脲(50 g， 0.68 mol)在180 ml乙酸 中的溶液中緩慢加入乙酸酐(130 ml， 1.37 moi)。在完全加入后，将反应混 合物在卯。C下搅拌3小时，然后冷却至室温。减压除去溶剂，将残余物 用350 mL乙醇处理，沉淀出微黄色固体。将该固体用乙醇重结晶，得到 63.1 g结晶性固体形式的产物(收率65.8%)。 m.p. = 131.2-133.1。C[文献卜 m.p. = 130_131.5°C]。
(b) 6-氯-3-甲基嘧淀-2，4(l仏3^)-二酮
在0。C下，将水(2.7 mL)滴加到1-甲基嘧淀-2，4，6(1仏3仏5/0-三酮(14.2 g， 100 mol)在P0C13(95 mL)中的混悬液中。然后将反应混合物在80'C下加 热5小时。将所得的微棕色溶液冷却，减压蒸发掉POCl3。将残余物用 MeOH处理，将所得的固体用乙醇重结晶，得到11.5 g产物(收率71.6%)。 m.p. = 279-282 t:(dec)[文献2: 280-282 "C] 。 NMR (400 MHz, DMSO-d6) S 3.10(S， 3H)， 5.90(S， 1H)， 12.4(br， 1H)。
(c) 6-氯-l-异丁基-3-甲基嘧啶-2，4(lH，3H)-二酮
将6-氯-3-曱基嘧淀-2，4(1仏3司-二酮(3 g， 18.8 mmol)、异丁基碟(5 mL， 43.5 mmol)和碳酸钾(5.3 g, 38.4 mmol)在无水DMF(200 mL)中的混合物在 50。C下加热8小时。加入另外的异丁基碘(4.3 mL， 37.5 mmol)，将反应混 合物在50。C下加热24小时。在热过滤后，将滤液减压蒸发至千。将所得 的油状物进一步用硅胶快速色谱法进行纯化，得到2.1 g纯产物(收率: 52%)。
(d) 6-肼基-l-异丁基-3-曱基嘧，-2,4(lH,3H)-二酮
向6-氯-l-异丁基-3-甲基嘧啶-2,4(lH,3H)-二酮(2.0 g 9.3 mmol)在 EtOH(8 mL)中的溶液中緩慢加入在EtOH(3 mL)中的肼一水合物(l.3 mL)。将反应混合物回流5小时，然后冷却。向反应混合物中加入大量 AcOEt,然后冷却，过滤，得到1.95g微黄色固体形式的产物(收率100%)。
(e) 7-异丁基-5-曱基-3-(苯基氨基)-2H-吡唑并[3,4-dl嘧梵-4，6(5H,7H)-二酮
将异硫氰酸苯酯(0.17 mL， 1.4 mmol)加入到6-肼基-1-异丁基-3-甲基嘧啶-2，4(lH，3H)-二酮(31 mg， 0.47 mmol)在DMF(IO mL)中的溶液中。将反应
混合物在120。C下加热6小时，然后减压蒸发以除去溶剂。将残余物进一
步用硅胶快速色谱法进行纯化，得到20 mg产物(收率41。/。)JHNMR (400
MHz, DMSO-d6) 8 0.95(s， 3H)， 0.97(s， 3H)， 2.30(m， 1H)， 3.37(s， 3H)， 3.77(d，
2H)， 7.16-7.43(m， 5H)， 7.61(s， 1H)。 MS (FAB) m/z 314.3 [M+H广
(f) 2-(联苯-4-基甲基)-7-异丁基-5-甲基-3-(苯基氨基)-2H-吡唑并3，4-d嘧啶
-4，6(5H，7H)-二酮
将7-异丁基-5-曱基-lH-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4,6(5H，7H)-二酮(12.0 g， 0.0383 mmol)、对-联苯基甲基溴(9.46 mg， 0.0383 mmol)和碳酸钾(5.3 mg， 0.0383 mmol)在丙酮(2.5 mL)中的混合物在室温下搅拌过夜。减压蒸发掉溶 剂。将残余物直接用色镨法进行纯化，得到7.0 mg白色固体形式的产物(收 率38.0%)。力NMR (400 MHz, CDC13) 8 0.97(s, 3H)， 0.99(s， 3H)， 2J3(m, 1H)， 3.34(s， 3H)， 3.85(d， 2H)， 4.99(s， 2H)， 6.76(s, 1H)， 6.91-7.56(m， 13H)。 MS (FAB) m/z 480.3 [M+H+。
实施例2
2-(联苯-4-基曱基)-7-(4-甲氧基苄基)-5-甲基-3-(苯基氨基)-m-吡唑并[3，4-(1
嘧啶-4，6(5H，7H)-二酮
其合成方法与实施例l相似，其中在步骤(c)中加入对-甲氧基节基氯来 代替异丁^ 典。TLC Rf = 0.61 (AcOEt:己烷=1:1)。 NMR (CDC13) S 3.31(s， 3H)， 3.71(s， 3H)， 4.99(s， 2H)， 5.10(s， 2H)， 6.75画7.57(m， 19H)。 MS (FAB) m/z 544.4 [M+HI+实施例3
2-(联苯-4-基甲基)-3-((联苯-4-基甲基)沐基)氨基)-7-(4-曱氧基苄基)-5-曱基 -2H-吡唑并[3，4-dl嘧啶-4，6(5H，7H)-二酮
其合成方法与实施例1相似，其中在步骤(c)中加入对-曱氧基苄基氯来 代替异丁基》典。TLC Rf = 0.81 (AcOEt:己烷=1:1)。 ^ NMR (CDC13) 8 3.38(s， 3H), ;3.68(s， 3H)， 4.99(s， 2H)， 5.10(s， 2H), 5.20(s， 2H)， 6.70-7.57(m， 27H)。 MS (FAB) m/z 710.5 [M+H十
实施例4
7-(4-甲氧基苄基)-5-甲基-3-(苯基氨基)-2-(4-(三氟甲基)苄基HH-吡唑并 [3，4-d嘧啶-4，6(5H，7H)-二酮
其合成方法与实施例1相似，其中在步骤(c)中加入对-甲氧基苄基氯来 代替异丁基碘；在步骤(f)中加入对-三氟曱基苄基溴来代替对-联苯基曱基 溴(收率80%)。 MS (ESI) m/z 536.5 [M+H+
实施例5
7-(4-曱氧基节基)-5-甲基-3-(苯基氨基)-2-(4-(吡啶-2-基)苄基)-2H-吡唑并 [3,4-d]嘧咬画4，6(5H，7H)-二酮其合成方法与实施例1相似，其中在步骤(C)中加入对-曱氧基节基氯来
代替异丁基碘；在步骤(f)中加入对-(吡啶-2-基)苄基溴来代替对-联苯基曱基
溴(收率60%)' MS (ESI) m/z 545.M+H广 实施例6
5-曱基-3-(苯基氨基)-2-(4-(吡啶-2-基)节基)-2H-吡唑并3，4-d嘧啶 -4，6(5H，7H)-二酮
在氩气下，将A1C13(0.733 g， 5.50 mmol)加入到7-(4-甲氧基苄基)-5-曱 基-3-(苯基氨基)-2-(4-(吡啶-2-基)千基)-2H-吡唑并[3,4-dl嘧啶-4，6(5H，7H)-二酮(1.08 g， 1.98 mmol)和茴香醚(mL)在1，2-二氯乙烷(15 mL)中的溶液中。 将反应混合物在室温下搅拌过夜，然后在冷却的情况下用水淬灭。将所得 的混悬液用20。/oNaOH(70mL)处理，然后用二氯甲烷萃取5次。将有机相 合并并蒸发至干。将残余物进一步用色谱法进行纯化，得到751 mg纯产物 (收率89%)。 MS (FAB) m/z 425,M+H+。
实施例7
7-环戊基-5-甲基-3-(苯基氨基)-2-(4-(吡咬-2-基)千基)-2H-吡唑并[3，4-d嘧啶 -4，6(5H，7H)-二酮<formula>formula see original document page 30</formula>将甲基乙基酮(1.2 mL)加入到0.5 5 mL包含5-甲基-3-(苯基氨 基)-2-(4-(吡啶-2-基)节基)-2H-吡唑并[3,4-d嘧啶4，6(5H，7H)-二酮(25 mg， 0.0589 mmol)、碘代环戊烷(8.2 pL， 0.0707 mmol)和K2C03(9.8 mg， 0.0707 mmol)的反应容器中。将密封了的容器放到Biotage微波仪中并在140。C下 进行微波反应1小时。然后将所得的粗产物用硅胶快速色谱法进行纯化， 得到14.9 mg纯产物(收率51.4%)。 TLC Rf = 0.72 (AcOEt:己烷=2:1)。 MS (ESI) m/z 493.4 [M+H]+
实施例8
3-(环戊基(苯基)氨基)-5-曱基-2-(4-(吡啶-2-基)苄基)-2H-吡唑并[3,4-d嘧啶 -4,6(5H，7H)-二酮<formula>formula see original document page 30</formula>将甲基乙基酮(1.2 mL)加入到0.5~5 mL包含5-甲基-3-(苯基氨 基)-2-(4-(吡啶-2-基)节基)-2H-吡唑并[3，4-d嘧啶-4，6(5H，7H)-二酮(25 mg， 0.0589 mmol)、碘代环戊烷(8.2 |aL， 0.0707 mmol)和K2C03(9.8 mg， 0.0707mmo)的反应容器中。将密封了的容器放到Biotage微波仪中并在140。C下 进行微波反应l小时。然后将所得粗产物用硅胶快速色镨法进行纯化，得 到5.2 mg纯产物(收率17.9%)。 TLC Rf = 0.50 (AcOEt:己烷=2:1)。 MS (ESI) m/z 493.4 [M+H+
实施例9
7-异丁基-5-曱基-3-(苯基氨基)-2-(4-(吡啶-2-基)苄基)-2H-吡唑并3，4-dl嘧啶 -4，6(5H，7H)-二酮
<formula>formula see original document page 31</formula>
其合成方法与实施例7相似，其中加入异丁基碘来代替碘代环戊烷(收 率95.8%)。 MS (ESI)m/z 481.4 [M+HI+
实施例10
7-环己基-5-甲基-3-(苯基氨基)-2-(4-(吡啶-2-基)苄基)-2H-吡唑并3+dj嘧咬 -4，6(5H，7H)-二酮
<formula>formula see original document page 31</formula>其合成方法与实施例7相似，其中加入碘代环己烷来代替碟代环戊烷 (收率10%)。 MS (ESI) m/z 507,4 [M+H]十
实施例11
5-曱基-7-新戊基-3-(苯基氨基)-2-(4-(吡啶-2-基)爷基)-2H-吡唑并[3，4-d嘧啶 -4，6(5H，7H)画二酉同
<formula>formula see original document page 32</formula>
其合成方法与实施例7相似，其中加入l-碘-2，2-二曱基丙烷来代替碘 代环戊烷(收率4.1%)。 MS (ESI) m/z 495.4 [M+H+
实施例12
(S)-5-曱基-7-(2-曱基丁基)-3-(苯基氨基)-2-(4-(吡啶-2-基)苄基)-2H-吡唑并 [3，4-dl嘧啶-4，6(5H，7H)-二酮
<formula>formula see original document page 32</formula>
其合成方法与实施例7相似，其中加入(S)-l-碘-2-甲基丁烷来代替橫代 环戊烷(收率81,8%)。 MS (ESI) m/z 495.4 [M+H+实施例13
5-甲基-3-(苯基氨基)-2-(4-(吡啶-2-基)苄基)-7-(2，2,2-三氟乙基)-2H-吡唑并3，4-d嘧啶-4，6(5H，7H)-二酮
其合成方法与实施例7相似，其中1，1，1-三氟-2-碘乙烷来代替碘代环 戊烷(收率14.8%)。 MS (ESI) m/z 507.M+H广
实施例14
(及)-7-(3-羟基-2-甲基丙基)-S-曱基-3-(苯基氨基)-2-(4-(吡啶-2-基)苄基)-2H-吡唑并[3，4-(1]嘧啶-4，6(511，711)-二酮
其合成方法与实施例7相似，其中加入(S)-3-溴-2-甲基丙-l-醇来代替 碘代环戊烷(收率86.3%)。 MS (ESI) m/z 497.4 [M+H]十
实施例15
7-(2-(二甲氨基)乙基)-5-甲基-3-(苯基氨基)-2-(4-(吡啶-2-基)苄基)-2H-吡唑 并[3,4-d嘧咬-4，6(5H，7H)-二酮其合成方法与实施例7相似，其中加入溴化2-溴-N，N-二甲基乙铵来代 替硤代环戊烷(收率64.4%)。 MS (ESI) m/z 496.3 [M+H广
实施例16
2-(4-(lH-吡唑-1-基)千基)-7-异丁基-5-甲基-3-(苯基氨基)-2H-吡唑并 [3,4-dl嘧梵-4，6(5H，7H)-二酮
其合成方法与实施例1相似，其中在步骤(f)中加入l-(4-(溴曱基)苯 基)-lH-吡唑来代替对-联苯基曱基溴。MS (ESI) m/z 470.M+H]+
实施例17
2-(4-(lH-l，2，4-三唑-l-基)卡基)-7-异丁基-5-曱基-3-(苯基氨基)-2H-吡唑并3，4-d嘧啶-4，6(5H，7H)-二酮
其合成方法与实施例1相似，其中在步骤(f)中加入l-(4-(溴甲基)苯基)-lH-l，2，4-三唑来代替对-联苯基甲基溴(收率89.2%)。 MS (ESI) m/z 471.M+H+
实施例18
4-((7_异丁基-5-甲基-4，6-二氧代_3-(苯基氨基)-4，5，6，7-四氢吡唑并3，4-d]嘧 啶-2-基)甲基)苯甲酰胺
其合成方法与实施例1相似，其中在步骤(f)中加入4-(氯甲基)苯甲酰 胺来代替对-联苯基甲基溴。MS (ESI) m/z 447.1 [M+H+
实施例19
7-异丁基-5-曱基-2-(4-(曱基磺酰基)苄基)-3-(苯基氛基)-2H-吡唑并[3，4-d嘧 啶-4，6(5H，7H)-二酮
其合成方法与实施例l相似，其中在步骤(f)中加入l-(溴甲基)-4-(甲基 磺酰基)苯来代替对-联苯基曱基溴。MS (ESI) m/z 482.1 [M+H+
实施例20
7-异丁基-5-曱基-2-(4-(5-甲基-l,2，4-喁二唑-3-基)苄基)-3-(苯基氨基)-2H-吡 唑并[3，4-d嘧淀-4,6(5H，7H)-二酮其合成方法与实施例1相似，其中在步骤(f)中加入3-(4-(溴甲基)苯 基)-5-甲基-l，2,4- 恶二唑来代替对-联苯基甲基溴。MS (ESI) m/z 486.1 [M+H十
实施例21
2-(4-(5-氟嘧啶-2-基)苄基)-7-异丁基-5-曱基-3-(苯基氨基)-211-吡唑并[3,4-(1
嘧啶-4,6(5H，7H)-二酮
■F
其合成方法与实施例1相似，其中在步骤(f)中加入2-(4-(溴曱基)苯 基)-5-氟嘧啶来代替对-联苯基甲基溴。MS (ESI) m/z 500.0 [M+H]+
实施例22
5-甲基-3-(苯基氨基)-2-(4-(吡啶-2-基)苄基)-7-((四氢呋喃-2-基)甲基)-2H-吡 唑并[3,4-dj嘧啶-4,6(5H，7H)-二酮
其合成方法与实施例7相似，其中加入2-(溴甲基)-四氬呋喃来代替硤代环戊烷。MS (ESI) m/z 509.M+H〗+ 实施例23
5_曱基-7-新戊基-3-(苯基氨基)-2-((6-(三氟曱基)吡啶-3-基)甲基)-2H-吡唑并 [3，4-d]嘧啶-4，6(5H，7H)-二酮
其合成方法与实施例1相似，其中在步骤(c)中加入l-碘-2，2-二曱基丙 烷来代替异丁基硤;在步骤(f)中加入5-(溴曱基)-2-(三氟曱基)吡啶来代替对 -联苯基曱基澳。MS (ESI) m/z 487.M+H+
实施例24
3-(4-氟苄基氨基)-7-异丁基-5-曱基-2-(4-(三氟甲基)苄基)-2H-吡唑并[3，4-d
嘧啶-4，6(5H，7H)-二酮
其合成方法与实施例7相似，其中加入3-(4-氟千基氨基)-5-甲基 -2-(4-(三氟曱基)节基)-2H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4，6(5H，7H)-二酮来代替5-曱 基-3-(苯基氨基)-2-(4-(吡啶-2-基)千基)-2H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4，6(5H，7H)-二酮，加入异丁基硤来代替碘代环戊烷。MS (ESI) m/z 490.2 [M+H广
实施例25
用IMAP磷酸二酯酶测定法试剂盒体外测量PDE1B抑制
37磷酸二酯酶1B(PDE1B)是一种钩M弓调蛋白依赖性磷酸二酯酶，其将环 鸟嘌呤核苷单磷酸(cGMP)转化成5'-鸟噤呤核苷单磷酸(5，-GMP)。 PDE1B 还可以将修饰的cGMP底物如荧光分子cGMP-荧光素转化成相应的GMP-荧光素。可以用例如IMAP(分子仪器公司(Molecular Devices), Sunnyvale, CA)固定的金属亲和颗粒试剂来对由cGMP-荧光素产生GMP-荧光素进行 定量。
简言之，IMAP试剂以高亲合力与在GMP-荧光素中存在但在cGMP-荧光素中不存在的游离5，-磷酸结合。所得的GMP-荧光素-IMAP复合物 比cGMP-荧光素大。因为其发荧光所发射的光子保留了与激发荧光所用光 子相同的极性，在大的緩慢翻转的复合物中结合的小荧光团可以与未结合 的荧光团相区别。
在该磷酸二酯酶测定法中，不能与IMAP结合并因此保留了微小焚光 偏振的cGMP-荧光素被转化成GMP-荧光素，当与IMAP结合时，该GMP-荧光素在荧光偏振(Amp)方面产生大的增加。因此，以Amp的减少来检测 磷酸二酯酶的抑制。 酶测定法
材料除IMAP试剂(反应緩冲剂，结合緩冲剂，FL-GMP和IMAP 小珠)外，所有化学物质均得自西格玛奥德里奇公司(Sigma-Aldrich)(St, Louis， MO)， IMAP试剂得自分子仪器公司(Sunnyvale, CA)。
测定法用50%甘油将3，，5，-环-核苷酸特异性牛脑磷酸二酯酶(西格玛 公司(Sigma)， St. Louis, MO)重构成2.5 U/ml。 一个单位的酶在pH 7.5、 30 "C下每分钟将1.0 pmol 3，,5，-cAMP水解成5'-AMP。向1999份反应緩冲剂 (30 pM CaCl2, 10 U/ml铞调蛋白(西格玛公司P2277), lOmM Tris-HCl pH 7.2， 10mM MgCl2， 0.1% BSA, 0.05% NaN3)中加入一份酶，从而获得 1.25mU/ml的终浓度。将99 |al被稀释的酶溶液加入到平底96孔聚苯乙烯 板的各孔中，向其中加入1 pl溶解于100% DMSO中的供试化合物。将化 合物与酶混合并在室温下预孵育IO分钟。
在384孔微量滴定板中，通过将4份酶和抑制剂混合物与1份底物溶液(0.225 pM)合并来开始FL-GMP转化反应。将该反应在黑暗中在室温下 孵育15分钟。通过向384孔板的各孔中加入60 pl结合试剂(1:400 IMAP 小珠在补加了 1:1別0消泡剂稀释液的结合緩冲剂中的稀释液)来停止反应。 将板在室温下孵育1小时以使IMAP结合进行完全，然后^L置到Envision 多模式微量滴定板读数器(站金埃尔默公司(PerkinElmer)， Shelton， CT)中， 以测量荧光偏振(Amp)。
以Amp降低形式测得的GMP浓度的降低表示PDE活性的抑制。通 过在存在0.0037 nM至80,000 nM范围内的8至16个化合物浓度的情况 下测量酶活性、然后用药物浓度-AmP作图来测定ICso值，其使得可以用 非线性回归软件(XLFit; IDBS， Cambridge, MA)来估算ICso值。
实施例26
PDE1抑制剂对雌性大鼠性反应的影响
如Mani等人，Science (2000) 287: 1053中所述的那样来测量PDE1抑 制剂对雌性大鼠脊柱前凸反应的影响。将卵巢切除和插套管的野生型大鼠 用2iig雌激素灌注，然后M小时后脑室内(icv)注射孕酮(21^)、本发明的 PDEl抑制剂(0.1mg， l.Omg或2.5mg)或芝麻油介质(对照)。测试这些大鼠 在存在雄性大鼠情况下的脊柱前凸反应。用脊柱前凸商(LQ-脊柱前凸数 /10登骑(mounts) x IOO)来定量脊柱前凸反应。接受化合物1或2、甚至在 0.1 mg下的雌激素-灌注的雌性大鼠的LQ高于75，与接受孕酮的雌激素 灌注的大鼠相似并显著高于(pO.001)接受基质的雌激素-灌注的大鼠。
权利要求
1. 游离形式、盐形式或前体药物形式的2-(任选地杂)芳基甲基-3-(任选地杂)芳基氨基-[2H]-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4，6(5H，7H)-二酮。
2. 根据权利要求1所述的化合物，其是游离形式、盐形式或前体药物形式的式I的化合物<formula>formula see original document page 2</formula>(i) R是H或烃基；(ii) R2是H、烃基、环烃基、卤代烃基、烃基氨基烃基、羟基烃基、芳基烃基、杂芳基烃基或烃氧基芳基烃基；(iii) R3是杂芳基曱基或式A的被取代的千基<formula>formula see original document page 2</formula>其中Rs、 R9、 Rn和Ru独立地是H或卤素；R^是卤素、烃基、环烃基、卣代烃基、芳基、杂芳基、芳基羰基或杂芳基羰基、烃氧基羰基、氨基羰基;(iv) R4是芳基或杂芳基；和(v) Rs是H、烃基、环烃基、杂芳基、芳基、对-节基芳基；其中"烃"或"烃基"是指Cw烃基，"环烃基"是指C3-6环烃基。
3.根据权利要求2所述的化合物，其是游离形式、盐形式或前体药 物形式的式ii的化合物R，o式ii其中Ri是曱基；R2是H、烃基、环烃基、杂芳基、芳基、卤代烃基、烃基氨基烃基、 羟基烃基、芳基烃基或烃氧基芳基烃基； R4是苯基； Rs是H;和Rjo是苯基、吡咬基、嘧"纽、吡唑基、噻二唑基、卤代烃基、烃基磺 酰基、i懲二唑基、氨基羰基或三唑基； 其中"烃"或"烃基"是指C^烃基。
4.化合物，其选自a. 2-(联苯-4-基甲基)-7-异丁基-5-甲基-3-(苯基氨基)-2H-吡唑并 [3，4-d嘧啶-4，6(5H，7H)-二酮b. 2-(联苯-4-基曱基)-7-(4-甲氧基苄基)-5-甲基-3-(苯基氨基)-2H-吡 唑并[3,4-d嘧啶-4，6(5H，7H)-二酮c. 2-(联苯-4-基甲基)-3-((联苯-4-基甲基)(苯基)氨基)-7-(4-曱氧基苄 基)-5-甲基-2H-吡唑并[3，4-dj嘧啶-4，6(5H，7H)-二酮d. 7-(4-曱氧基千基)-5-甲基-3-(苯基氨基)-2-(4-(三氟曱基)苄基)-2H-吡唑并[3，4-dj嘧啶-4,6(5H，7H)-二酮e. 7-(4-甲氧基节基)-5-甲基-3-(苯基氨基)-2-(4-(吡啶-2-基)节基)-211-吡唑并3，4-d嘧啶-4，6(5H，7H)-二酮f. S-曱基-3-(苯基^J0-2-(4-(吡啶-2-基)节基)-2H-吡唑并[3，4-dl嘧啶 -4，6(5H，7H)-二酮g. 7-环戊基-5-甲基-3-(苯基氨基)-2-(4-(吡啶-2-基)千基)-2H-吡唑并 [3，4-d]嘧淀-4，6(5H，7H)-二酮h. 3-(环戊基(苯基)氨基)-S-甲基-;2-(4-(吡啶-2-基)千基)-2H-吡唑并 [3，4-dl嘧啶-4，6(5H，7H)-二酮i. 7-异丁基-5-曱基-3-(苯基氨基)-2-(4-(吡啶-2-基)苄基)-2H-吡唑并 [3,4-dl嘧啶-4，6(5H,7H)-二酮j.7-环己基-S-曱基-3-(苯基氨基)-2-(4-(吡啶-2-基)节基)-211-吡唑并[3，4-d嘧啶-4，6(5H，7H)-二酮 k. 5-曱基-7-新戊基-3-(苯基氛基)-2-(4-(吡啶-2-基)千基)-2H-吡唑并[3，4-d嘧啶-4，6(5H，7H)-二酮 1.(S)-5-甲基-7-(2-甲基丁基)-3-(苯基氨基)-2-(4-(吡啶-2-基)苄基)-2H-吡唑并[3，4-d嘧咬-4，6(5H,7H)-二酮 m. 5-曱基-3-(苯基氨基)-2-(4-(吡啶-2-基)苄基)-7-(2，2，2-三氟乙基)-2H-吡唑并3，4-d嘧啶-4，6(5H,7H)-二酮 n. (R)-人(3-羟基-2-曱基丙基)-5-甲基-3-(苯基氨基)-2-(4-(吡啶-2-基)千基)-2H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4，6(5H，？H)-二酮 o.7-(2-(二甲氨基)乙基)-5-甲基-3-(苯基氨基)-2-(4-(吡啶-2-基)苄基)-2H-吡唑并[3，4-d嘧啶-4，6(5H，7H)-二酮 p. 2-(4-(lH-吡唑-l-基)苄基)-7-异丁基-5-甲基-3-(苯基氨基)-2H-吡唑并[3，4-d嘧啶-4，6(5H，7H)-二酮 q, 2-(4-(lH-l，2，4-三唑-1-基)千基)-7-异丁基-5-曱基各(苯基氨基)-2H-吡唑并[3，4-d]嘧咬-4，6(5H，7H)-二酮 r. 4-((7-异丁基-5-甲基-4，6-二氧代-3-(苯基氨基)-4，5，6，7-四氢吡唑并3，4-dl嗜啶-2-基)甲基)苯甲酰胺s, 7-异丁基-5-甲基-2-(4-(甲基磺酰基)节基)-3-(苯基氨基)-2H-吡唑并3，4-d]嘧淀-4，6(5H，7H)-二酮 t. 7-异丁基-5-曱基-2-(4-(5-曱基-l，2，4-喁二唑-3-基)苄基)-3-(苯基氨基)-2H-吡唑并[3，4-dj嘧梵-4，6(5H，7H)-二酮 u. 2-(4-(5-氟嘧啶-2-基)卡基)-7-异丁基-5-甲基-3-(苯基氨基)-2H-吡唑并[3 ，4-d嘧啶-4，6(5H，7H)-二酮 v.5-甲基-3-(苯基氨基)-2-(4-(吡啶-2-基)节基)-7-((四氢呋喃-2-基)甲基)-2H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4，6(5H，7H)-二酮 w. 5-甲基-7-新戊基-3-(苯基氨基)-2-((6-(三氟甲基)吡啶-3-基)曱基)-2H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4，6(5H，7H)-二酮 x. 3-(4-氟苄基氨基)-7-异丁基-5-曱基-2-(4-(三氟曱基)苄基)-2H-吡唑并[3，4-d嘧啶-4，6(5H，7H)-二酮 其是游离形式或药学上可接受的盐形式。
5. 药物组合物，其包含权利要求1、 2、 3或4中任意一项所述的化合 物以及药学上可接受的稀释剂或载体。
6. 治疗下列病症中任何一种的方法帕金森病、多动腿、震颤、运 动障碍、亨廷顿舞蹈病、阿尔茨海默病和药物诱导的运动失调；抑郁、注 意力缺陷障碍、注意缺陷多动症、双相性障碍、焦虑、睡眠障碍、发作性 睡眠、认知功能损害、痴呆、图雷特综合征、孤独症、脆性X染色体综合 征、精神兴奋剂戒断和/或药物成瘾；脑血管疾病、中风、充血性心脏病、 高血压、肺动脉高压和/或性功能障碍；哞喘、慢性阻塞性肺病和/或变应性 鼻炎以及自身免疫性和炎性疾病；和/或女性性功能障碍、运动性闭经、无 排卵、绝经、绝经期症状、甲状腺功能减退症、经前期综合征、早产、不 孕、不规则月经周期、异常子宫出血、骨质疏木h多发性硬化、前列腺肿 大、前列腺癌、甲状腺功能减退症、雌激素-诱导的子宫内膜增生或癌；和/或以表达PDE1的细胞中低水平的cAMP和/或cGMP(或者cAMP和/或 cGMP信号发送途径抑制)和/或多巴胺D1受体信号发送活性降低为特征的 任何疾病或病症；和/或可通过增强孕酮信号发送而被改善的任何疾病或病症；所述方法包括给需要该类治疗的患者施用有效量的权利要求1、 2、 3 或4中任意一项所述的化合物或权利要求5所述的药物组合物。
7. 根据权利要求6所述的方法，其中所述病症是帕金森病。
8. 根椐权利要求6所述的方法，其中所述病症是认知功能损害。
9. 根据权利要求6所述的方法，其中所述病症是发作性睡眠。
10. 根据权利要求9所述的方法，其进一步包括给需要其的患者施用 选自中枢神经系统兴奋剂、莫达非尼、抗抑郁药和y羟基丁酸盐的一种或 多种化合物。
11. 根据权利要求6所述的方法，其中所述病症是女性性功能障碍。
12. 根据权利要求11所述的方法，其进一步包括给需要其的患者施用 选自雌二醇、雌三醇、雌二醇酯类、孕酮和孕激素类的一种或多种化合物。
13. 制备权利要求1、 2、 3或4所述的化合物的方法，其包括使吡唑并 [3，4-司嘧啶-4，6(511， 7H)-二酮与其中X是离去基团且R3是任选地被取代的 节基的式X-R3的化合物反应和分离由此获得的权利要求1、 2、 3或4所迷 的化合物。
14. 根据权利要求13所述的方法，其中所述吡唑并[3，4-d嘧咬-4，6(5H， 7H)-二酮是式IIIC的化合物其中Ri、 R2和R4如权利要求2或3中针对式I或II所定义。
15. 制备权利要求l、 2、 3或4所述的化合物的方法，其包括使吡唑并 卩，4-d嘧咬-4，6(5H， 7H)-二酮与其中X是离去基团且R2如权利要求2或3 中针对式I所定义的式X-R2的化合物反应和分离由此获得的权利要求1、 2或3所述的化合物。
16. 根据权利要求15所述的方法，其中所述吡唑并3，4-dl嘧啶-4，6(5H， 7H)-二酮是式IIh的化合物 HN"R4(llhl其中R,、 R3和R4如权利要求2或3针对式I或II所定义,
全文摘要
游离形式、盐形式或前体药物形式的2-(任选地杂)芳基甲基-3-(任选地杂)芳基氨基-[2H]-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4，6(5H，7H)-二酮可用作药物，特别是用作磷酸二酯酶1抑制剂。
文档编号A01N43/90GK101460058SQ200780020593
公开日2009年6月17日 申请日期2007年6月6日 优先权日2006年6月6日
发明者L·P·文诺格勒, P·李 申请人:细胞内治疗公司