专利名称：一种用于增强免疫的珠母贝糖胺聚糖软胶囊及其制备方法
技术领域：
本发明涉及一种糖胺聚糖软胶囊及其制备方法，具体涉及一种用于增强免疫的珠 母贝糖胺聚糖软胶囊及其制备方法，属于保健食品生产技术领域，是一种从马氏珠母贝中 分离得到的活性物质制备具有增强免疫功能的软胶囊产品的方法。
背景技术：
马氏珠母贝(Pinctada martensii (Dunder))是我国南海珠母贝的主要贝种, 在广东、广西部分地区养殖量极大。珠农采珠后，所余珠母贝全脏器资源量约达3500 4000吨/年，珠母贝全脏器俗称珍珠贝肉，价格低廉(约3 4元/kg)，在珍珠养殖地区 如广东省的雷州市及徐闻县、广西壮族自治区的北海市及钦州市、海南省的部分地区，大 部分仅作为饲料和饵料，造成资源的巨大浪费，急待开发利用。据文献报道，许多海洋贝 类多糖可刺激机体的各种免疫活性细胞的成熟、分化和繁殖，增加巨噬细胞非特异性细胞 毒，诱导白细胞介素-1、白细胞介素_2、肿瘤坏死因子、干扰素等细胞因子的产生和细胞 因子受体的表达，促进抗体形成，活化补体系统的经典途径及变更途径等作用。糖胺聚糖 (glycosaminoglycan)就是其中多糖之一，其曾称粘多糖(mucopolysaccharide),氨基多糖 和酸性多糖，为杂多糖的一种，主要存在于高等动物结缔组织中，植物中也有发现；糖胺聚 糖是由重复的二糖单位构成的长链多糖，其二糖单位之一是氨基己糖(氨基葡萄糖或氨基 半乳糖)，故称糖胺聚糖；另一个是糖醛酸。珠母贝糖胺聚糖是一种天然来源的具有增强免 疫功能的生物活性多糖，毒副作用小、不损伤正常细胞、安全性高、疗效显著、不会引起药源 性疾病等优点，具有广阔的市场前景。同时用珠母贝提取糖胺聚糖，可以解决资源浪费的问 题，充分利用沿海地区的资源，具有非常重要的意义。发明内容
本发明的目的是提供一种用于增强免疫的珠母贝糖胺聚糖软胶囊，解决马氏珠母 贝资源浪费的环境问题，同时将其综合利用，制成有益于人类的产品。
本发明的另一个目的是提供一种用于增强免疫的珠母贝糖胺聚糖软胶囊的制备 方法。
为实现上述发明的目的，本发明采取的技术方案如下本发明是从马氏珠母贝全脏器中分离得马氏珠母贝糖胺聚糖，其糖胺聚糖含量为 30% 42%。以马氏珠母贝糖胺聚糖为基料，制备成具有增强免疫功能的软胶囊产品。
本发明提供了马氏珠母贝糖胺聚糖免疫增强软胶囊产品的制备方法，具体步骤如 下(I)将马氏珠母贝全脏器(湿重)加水匀浆，贝肉与水的质量比为1: O. 5或1:1，按质量 比加入胰酶1% 2%(w/w)和枯草杆菌中性蛋白酶O. 5% l%(w/w)，于pH 7. O, 50°C恒温水 浴3 h 5 h，高温100°C灭酶并冷却，4000rpm离心5min，取上清液按质量比2%加入吸附 剂(活性碳娃藻土 =3 :2),65°C恒温50min,纱布过滤后，4000rpm离心IOmin取上清液,加入95%食品级酒精进行醇沉，上清液与酒精体积比为1: (O. 5 1. 5)，4°C沉淀24h，取沉淀用无水乙醇与丙酮交替洗涤3遍，收集沉淀物加水溶解，调等电点pH2. O离心去蛋白，再经超滤得到糖胺聚糖，将糖胺聚糖制成粉末备用；(2)马氏珠母贝糖胺聚糖粉末加入药用级PEG400稀释剂按糖胺聚糖粉末质量计算(以下相同)200% 400%，同时加入助悬剂PEG6000 8% 12%，丙二醇7% 10%，充分混合均匀后，制成软I父囊；广品中糖胺聚糖含量为19-32mg/粒。
本发明的马氏珠母贝糖胺聚糖增强免疫软胶囊有以下特点(I)采用该方法制备的珠母贝糖胺聚糖是一种天然来源的具有增强免疫功能的生物活性多糖，毒副作用小、安全性高、增强机体免疫功能的作用显著等优点，具有广阔的市场前旦-5^ O
(2)该方法工艺简单，操作方便，生产的产品质量高。
下面通过实例对本发明做进一步详细说明，这些实例仅用来说明本发明，并不限制本发明的范围。
实施例1将马氏珠母贝全脏器500g (湿重)加水250g匀浆，按质量比加入胰酶1% (w/w)和枯草杆菌中性蛋白酶O. 5% (w/w)，于pH 7. O, 50°C恒温水浴3 h，高温100°C灭酶并冷却， 4000rpm离心5min，取上清液按质量比2%加入吸附剂(活性碳硅藻土 =3 :2)，65°C恒温 50min,纱布过滤后，4000rpm离心IOmin取上清液，加入95%食品级酒精进行醇沉，上清液与酒精体积比为1: O. 5，4°C沉淀24h，取沉淀用无水乙醇与丙酮交替洗涤3遍，收集沉淀物加水溶解，调等电点PH2. O离心去蛋白，再经超滤得到糖胺聚糖(即软胶囊原料)。马氏珠母贝糖胺聚糖粉末IOOmg加入稀释剂200mg PEG400,同时加入8mg PEG6000, 7mg丙二醇，充分混合均匀后，上软胶囊成型机，制成软胶囊，平均装量315mg/粒，产品中糖胺聚糖含量为31. 7 mg/粒。
实施例2将马氏珠母贝全脏器500g(湿重)加水500g匀浆，按质量比加入胰酶1% 2% (w/w)和枯草杆菌中性蛋白酶l%(w/w)，于pH 7. 0，50°C恒温水浴5 h，高温100°C灭酶并冷却，4000rpm 离心5min，取上清液按质量比2%加入吸附剂(活性碳硅藻土 =3 :2)，65°C恒温50min，纱布过滤后，4000rpm离心IOmin取上清液，加入95%食品级酒精进行醇沉，上清液与酒精体积比为1:1. 5，4°C沉淀24h，取沉淀用无水乙醇与丙酮交替洗涤3遍，收集沉淀物加水溶解，调等电点PH2. O离心去蛋白，再经超滤得到糖胺聚糖糖胺聚糖精制品(即软胶囊原料)。马氏珠母贝糖胺聚糖粉末IOOmg加入药用级PEG400稀释剂按质量计算(以下相同)400mg,同时加入助悬剂PEG6000 12mg，丙二醇10mg，充分混合均匀后，制成软胶囊。平均装量522mg/ 粒，产品中糖胺聚糖含量为19.1mg/粒。
珠母贝糖胺聚糖已完成增强免疫功能的测试，测试结果见表I。根据中华人民共和国卫生部《保健食品检验与评价技术规范》的规定，在单核-巨噬细胞功能、细胞免疫实验、体液免疫实验、NK细胞活性四个方面任两个方面结果为阳性，可判定该受试物具有增强免疫力功能。其中，两个单核-巨噬细胞实验(碳廓清实验、腹腔巨噬细胞吞噬实验)均为阳性或其中一个实验的两个以上剂量组为阳性，两个细胞免疫实验(脾淋巴细胞增殖实验、迟发型变态反应实验)均为阳性或者其中一个实验的两个以上剂量组为阳性，两个体液免疫实验(抗体生成细胞数实验、血清溶血素含量测定实验)均为阳性或者其中一个实验的两个以上剂量组为阳性，NK细胞实验的一个以上剂量组为阳性，可判断此实验结果为阳性。依据该原则，对珠母贝糖胺聚糖的免疫功能测试结果可判断为珠母贝糖胺聚糖具有显著增强小鼠机体免疫功能的作用。
表I 珠母贝糖胺聚糖对小鼠机体免疫功能影响的实验结果
权利要求
1.一种用于增强免疫的珠母贝糖胺聚糖软胶囊制备方法，其特征在于包括如下步骤(1)将马氏珠母贝全脏器加水匀浆，原料与水的质量比为1:O.5或1: 1，按质量比加入胰酶和枯草杆菌中性蛋白酶，于PH 7. O, 50°C恒温水浴3 h 5 h，高温100°C灭酶并冷却， 4000rpm离心5min,取上清液按质量比加入吸附剂，65°C恒温50min,纱布过滤后，4000rpm 离心IOmin取上清液，加入95%食品级酒精进行醇沉，4°C沉淀24h，取沉淀用无水乙醇与丙酮交替洗涤3遍，收集沉淀物加水溶解，调等电点pH2. O离心去蛋白，再经超滤得到糖胺聚糖，将糖胺聚糖制成粉末备用；(2)马氏珠母贝糖胺聚糖粉末加入药用级PEG400稀释剂，同时加入助悬剂PEG6000和丙二醇，充分混合均匀后，制成软胶囊；产品中糖胺聚糖含量为19-32mg/粒。
2.根据权利要求1所述的一种用于增强免疫的珠母贝糖胺聚糖软胶囊制备方法，其特征在于所述的胰酶的加入量为衆料重量的1% 2%(w/w)。
3.根据权利要求1所述的一种用于增强免疫的珠母贝糖胺聚糖软胶囊制备方法，其特征在于所述的枯草杆菌中性蛋白酶的加入量为浆料重量的O. 5% l%(w/w)。
4.根据权利要求1所述的一种用于增强免疫的珠母贝糖胺聚糖软胶囊制备方法，其特征在于所述的吸附剂的加入量为浆料重量的2-3%。
5.根据权利要求1或4所述的一种用于增强免疫的珠母贝糖胺聚糖软胶囊制备方法， 其特征在于所述的吸附剂为活性炭和硅藻土混合物，其比例为活性碳硅藻土 =3 :2。
6.根据权利要求1所述的一种用于增强免疫的珠母贝糖胺聚糖软胶囊制备方法，其特征在于所述的食品级酒精的加入量为上清液与酒精体积比为1: (O. 5 1. 5)。
7.根据权利要求1所述的一种用于增强免疫的珠母贝糖胺聚糖软胶囊制备方法，其特征在于所述的PEG400稀释剂的加入量为糖胺聚糖粉末质量的200% 400%。
8.根据权利要求1所述的一种用于增强免疫的珠母贝糖胺聚糖软胶囊制备方法，其特征在于所述的助悬剂PEG6000的加入量为糖胺聚糖粉末质量的8% 12%。
9.根据权利要求1所述的一种用于增强免疫的珠母贝糖胺聚糖软胶囊制备方法，其特征在于所述的丙二醇的加入量为糖胺聚糖粉末质量的7% 10%。
10.一种采用权利要求1所述方法制备的用于增强免疫的珠母贝糖胺聚糖软胶囊。
全文摘要
本发明涉及一种用于增强免疫的珠母贝糖胺聚糖软胶囊及其制备方法，属于保健食品生产技术领域；该方法是将马氏珠母贝全脏器加水匀浆，加入胰酶和枯草杆菌中性蛋白酶，于pH7.0，50℃恒温水浴，高温灭酶并冷却，离心取上清液加入吸附剂，65℃恒温，纱布过滤后，离心取上清液，加入95%食品级酒精进行醇沉，取沉淀用无水乙醇与丙酮交替洗涤，收集沉淀物加水溶解，调等电点离心去蛋白，再经超滤得到糖胺聚糖，加入药用级PEG400稀释剂，同时加入助悬剂和丙二醇，充分混合均匀后，制成软胶囊；该软胶囊具有毒副作用小、安全性高、增强机体免疫功能的作用显著等优点；该方法工艺简单，操作方便，生产的产品质量高。
文档编号A23P1/04GK103039792SQ20131001149
公开日2013年4月17日 申请日期2013年1月14日 优先权日2013年1月14日
发明者吴红棉, 范秀萍, 钟敏, 胡雪琼, 吴文龙 申请人:广东海洋大学