专利名称：苋菜在植物病害防治中的应用的制作方法
技术领域：
本发明属于蔬菜应用领域，具体涉及一种苋菜对植物病害的防治作用，更具体地说，是涉及一种苋菜对西瓜细菌性果斑病、柑橘溃疡病及水稻纹枯病的防治作用。
背景技术：
苋菜是苋科苋属的草本植物，主要是食用，但其抗氧化、抗癌、保护肝脏的医疗作用正在不断挖掘。近年来，随着苋菜研究地不断深入，发现苋菜提取物对食品腐生菌如:沙门菌(Salmonella spp.)、大肠杆菌(E.coli)、金黄色葡萄球菌(S.aureus)、李斯特菌(L.monocytogenes)等具有抑制作用。种子提取物对蒸枝酸腐病菌(Geotrichumcandidum)、爺病键刀菌(Fusrium solani)、产黄青霉(Penicillium chryso-genum)、亮白曲霉(Aspergillus candidus)等真菌具有抑制作用。但是，有关觅菜对植物病原菌的抑制作用以及对植物病害的防治作用未见研究报道。利用植物开发生物农药，不仅安全、高效、低毒、无污染，而且可解决化学农药开发周期长，费用高，抗药性等问题，是目前新农药创制研究的热点，具有广阔的发展前景。已有丁香、薄荷、银杏、香樟、大蒜、洋葱、姜、万寿菊、白芍等多种植物对植物病原菌具有抑菌活性的报道，但未见有苋菜的报道。西瓜细菌性果斑病菌(Acidovoraxavenae subsp.citrulli Willems)主要侵染西瓜幼苗和果实，田间依靠种子带菌传播，由该病菌侵染的西瓜几乎没有任何价值。因此，搞好西瓜细菌性果斑病的防控，可保障西瓜的安全生产。在生产上，可采取加强检疫、无菌种子、合理灌溉、种植抗病品种、轮作、药剂防治等措施。由于药剂防治具有省时、省力、快捷、方便等优点，仍是防治西瓜细菌性果斑病菌的主要手段。目前，主要依赖铜制剂或抗生素，如:铜制剂的氢氧 化铜、嘉赐铜及四环霉素、多保链霉素、链四环霉素等。然而，长期施用铜制剂易污染环境，破坏生态平衡，而且过量施用抗生素也易诱导病菌产生耐药性或抗药性，降低防治效果。柑橘溃瘍病是由地毪草黄单胞柑橘致病变种(Xanthomonas axonopodispv.citri)引起的一种严重危害柑橘枝、叶及果实的细菌性病害。该病在我国一些柑橘产区均有发生，尤其以广东、广西、湖南、福建等省(区)受害严重，造成落叶、枯梢，削弱树势，严重的可引起落果，影响柑橘产量和果品质量。由于该病害为检疫性病害，目前发达国家多采用大面积焚毁根除法，但此种方法成本很高，在我国柑橘产区实施起来比较困难，柑橘溃疡病的防治仍然是柑橘产业的重要问题，得不到有效根治。我国疫区以化学防治为主，辅以加强肥水管理、控梢、冬季清园等的综合防治措施，尽管如此，溃疡病仍然年年发生。目前，防治溃疡病的常规药剂主要以铜制剂为主，包括有波尔多液、氢氧化铜、氧氯化铜、焦氨铜、可杀得等，然而，铜制剂的长期使用导致土壤和环境中铜的累积，造成对环境的污染。因此，探索新的防治方法十分必要。水稻纹枯病(Rhizoctonia solani)是影响水稻增产的重要因素之一，由其造成的损失可达10-30%。近年来，随着高产、矮杆、多蘖良种的推广以及直接抛秧等栽培技术的改进，致使纹枯病的发生日益严重。在生产上，过去主要采用化学农药防治，但因易造成农药残留、污染环境、破坏生态平衡等问题，现在主要施用井R霉素，然而长期、大量、单一施用井冈霉素，会导致纹枯病菌产生抗药性，而且，欧盟也将井R霉素列为危险性药剂。目前，利用天然植物源活性物质防治水稻纹枯病已成为研究的热点。在蔬菜大田品比试验中，本发明人观察到，几十种蔬菜在生长过程中均会发生不同程度的病害，唯有苋菜没有病菌侵染。根据这种现象，发明人推测苋菜中可能含有一些抑制病菌的物质。因此，本发明进行了苋菜对西瓜细菌性果斑病、柑橘溃疡病、水稻纹枯病的防治作用研究，旨在发现苋菜防治植物病害的新功能；并为生物防控植物病害提供新途径和新思路。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是:针对苋菜防治植物病害技术上的空白，提供了一种苋菜植物病害防治中的应用，具体为在防治西瓜细菌性果斑病、柑橘溃疡病及水稻纹枯病中的应用。为了解决上述技术问题，本发明所采用的技术方案是:一种苋菜在防治植物病害中的应用。具体地，该植物病害为西瓜细菌性果斑病、柑橘溃疡病或水稻纹枯病。本发明以苋菜为原料，用有机溶剂对苋菜叶进行提取，获得苋菜叶提取物。该有机溶剂可为乙酸乙酯、无水乙醇或丙酮。当然，无论采用何种技术，只要能获得苋菜叶提取物即行，本发明中只是以乙酸乙酯为例对苋菜叶提取物的制备进行说明，具体过程如下:取苋菜叶洗净后，晒干至含水量为0.5-3.5%，以8000-12000r/min的转速粉碎至100-120目细粉；再采用分析纯乙酸乙酯对苋菜叶粉末进行浸提，苋菜叶粉末一次性加入，乙酸乙酯分3次加入，每次按Ig苋菜叶粉末加10-20mL乙酸乙酯的比例加入后，于摇床上在20-25°C下以90-120r/min振摇24_36h，过滤，收集滤液，合并3次滤液；将所得滤液置入旋转浓缩蒸发仪，在0.09-0.1MPa压力、水浴温度为40_43°C、冷凝温度为8_10°C及转速为80-120r/min下,浓缩至膏状。本发明的苋菜叶提取物对西瓜细菌性果斑病菌、柑橘溃疡病菌及水稻纹枯病菌具有抑制作用；而且离体与盆栽试验也表明苋菜叶提取物对西瓜细菌性果斑病、柑橘溃疡病及水稻纹枯病有一定的防治效果。表明苋菜具有防治植物病害的功能；同时本发明的实现，为开发利用苋菜叶天然活性物质以及研究与开发新生物农药提供了科学依据。
图1是苋菜叶提取物对西瓜细菌性果斑病菌的抑制效果图。其中:1代表乙酸乙酯提取物；2代表乙酸乙酯。图2是苋菜叶提取物对柑橘溃疡病菌的抑制效果图。其中:1代表乙酸乙酯提取物；2代表乙酸乙酯。图3是苋菜叶提取物对水稻纹枯病菌的抑制效果图。其中:1代表乙酸乙酯提取物；2代表乙酸乙酯。
具体实施例方式下面结合具体试验 和实施例对本发明的技术方案作进一步说明。
以下实施例中用到的西瓜果斑病菌(Pseudomonas pseudoalcaligenes subsp.citrulli)、柑橘溃瘍病菌(Xanthomonas axonopodis pv.citri)、水稻纹枯病菌(Rhizoctonia solani)由湖南农业大学植物病理学实验室提供。西瓜细菌性果斑病菌和柑橘溃疡病菌菌种的活化是:采用接种环，刮取3环菌种接入牛肉膏蛋白胨斜面培养基(NA)，28°C下培养24h ;水稻纹枯病菌的活化是:将菌饼直接接种至马铃薯葡萄糖琼脂培养基上(PDA)，25-28 °C 下培养 72h。实施例1苋菜叶提取物的制备(以乙酸乙酯为提取溶剂进行说明)取苋菜叶洗净后晒干至含水量为3%，于常温下，经高速粉碎机以8000_12000r/min的转速粉碎至100-120目细粉，获得苋菜叶粉末；取IOg苋菜叶粉，加入分析纯乙酸乙酯180mL，在20-25°C下以90-120r/min在摇床上振摇30h，过滤，收集过滤液；滤渣重新加入乙酸乙酯180mL，在20-25°C下以90_120r/min在摇床上振摇30h，过滤，收集过滤液；滤渣如此重复I次，合并3次过滤液即为提取液；将所得滤液置入旋转浓缩蒸发仪，在
0.09-0.1MPa压力、水浴温度为40-43°C、冷凝温度为8-10°C及转速为80-120r/min下，浓缩至膏状，得提取物。实施例2苋菜叶提取物对西瓜细菌性果斑病菌和柑橘溃疡病菌的抑制作用取Ig苋菜叶提取物加分析纯乙酸乙酯5-10mL溶解，获得待测活性物。采用平皿打孔法检测抑菌作用。分别将西瓜细菌性果斑病菌悬浮液和柑橘溃疡病菌悬浮液(1父1080血/!^)6(^1^均匀涂布于嫩平板，然后在平板中央一侧打孔(Φ=5πιπι)，注入待测活性物，在平板中央另一侧对称打孔并注入乙酸乙酯为对照，每孔50yL，28°C培养24-48h，观察抑菌情况。每个处理3次重复。通过观察可知，苋菜叶提取物对西瓜细菌性果斑病菌和柑橘溃疡病菌均 具有抑制作用，见图1和图2，而对照乙酸乙酯对两种病菌均无抑制作用。说明苋菜叶中存在抑菌活性物质，可用来防治植物细菌病害。实施例3苋菜叶提取物对水稻纹枯病菌的抑制作用取Ig苋菜叶提取物加分析纯乙酸乙酯5-10mL溶解，获得待测活性物。采用打孔法检测提取物对水稻纹枯病菌的抑制活性。在PDA平板的中央置水稻纹枯病菌，于两侧Icm处打孔，一侧注入待测活性物，另一侧注入乙酸乙酯作对照，每处理3次重复，置于25-28°C培养箱中，培养48h，观察有无抑菌现象。通过观察可知，苋菜提取物对水稻纹枯病菌具有抑制作用，见图3，而对照乙酸乙酯对纹枯病菌无抑制作用。说明苋菜叶中存在抑菌活性物质，也可用来防治植物真菌病害。实施例4不同溶剂溶解苋菜叶提取物的抑制细菌活性及稳定性检测取Ig觅菜提取物分别加无水乙醇、无菌水、无菌水和无水乙醇的混合物5-10mL,获得苋菜叶提取物溶解物。采用平皿打孔法检测苋菜提取物溶解物的抑菌活性及稳定性。分别将西瓜细菌性果斑病菌悬浮液和柑橘溃疡病菌悬浮液(I X 108cfu/mL)60 μ L均匀涂布于NA平板，然后在平板中央打孔(Φ =5mm)，将50 μ L待测提取物注入孔内，并分别在另一平板内以无水乙醇、无菌水、无菌水和无水乙醇的混合物为对照，28 0C培养24-72h，每个处理3次重复，观察并测量24h、48h、96h抑菌圈大小，以检测苋菜叶提取物溶解物的抑菌活性及稳定性。结果与分析:苋菜叶提取物溶解物对西瓜细菌性果斑病菌和柑橘溃疡病菌均具有抑制作用，而不同溶剂对照对西瓜细菌性果斑病菌和柑橘溃疡病菌无抑制作用。结合下表I和表2可知，不同溶剂溶解物对西瓜细菌性果斑病菌和柑橘溃疡病菌的抑制活性从大到小依次均为:无菌水和无水乙醇的混合物〉无菌水〉无水乙醇。随着时间的延长，不同溶剂溶解物对西瓜细菌性果斑病菌和柑橘溃疡病菌的抑制效果逐渐减弱，其中，24h抑菌效果最好，抑菌圈直径最大，48h的抑菌效果次之，96h的抑菌效果弱，但抑菌效果可持续I个月，说明其具有稳定性。表I不同溶剂溶解物对西瓜果斑病菌的抑制效果
权利要求
1.一种苋菜在防治植物病害中的应用。
2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述植物病害为西瓜细菌性果斑病、柑橘溃疡病或水稻纹枯病。
3.—种苋菜在抑制植物病菌中的应用。
4.如权利要求3所述的应用，其特征在于，所述植物病菌指西瓜细菌性果斑病菌、柑橘溃疡病菌或水稻纹枯病菌。
5.一种苋菜在制备防治植物病害生物农药中的应用。
6.一种苋菜在制备抑 制植物病菌生物农药中的应用。
全文摘要
本发明提供一种苋菜在植物病害防治中的应用。本发明以苋菜叶为原料，采用有机溶剂浸提获得提取物，选择西瓜细菌性果斑病菌、柑橘溃疡病菌、水稻纹枯病菌为作用靶标，进行室内抑菌作用和离体、盆栽防效研究，发现苋菜叶提取物对西瓜细菌性果斑病菌、柑橘溃疡病菌、水稻纹枯病菌具有抑制作用，而且离体与盆栽试验也表明苋菜叶提取物对西瓜细菌性果斑病、柑橘溃疡病、水稻纹枯病有一定的防治效果。表明苋菜除具有食用和医用价值外，还具有对植物病害的防治作用。该研究发现拓展了蔬菜功能，同时为研究和开发生物农药防治植物病害提供了新思路和新途径。
文档编号A01P1/00GK103238634SQ20131020642
公开日2013年8月14日 申请日期2013年5月29日 优先权日2013年5月29日
发明者廖晓兰, 张亚, 苏品, 黄璜, 刘双清, 夏日照, 仇佳伟, 尹伟 申请人:湖南农业大学