一种采用胚胎生物技术超常规繁育良种奶牛的方法
【专利摘要】本发明涉及一种采用胚胎生物技术超常规繁育良种奶牛的方法，选择优秀且适宜母奶牛作为供体，所述方法包括以下步骤：a、超数排卵，b、人工授精，c、冲胚，d、胚胎的检查，e、胚胎冷冻，f、胚胎解冻，g、胚胎分离，h、胚胎移植。采取上述方法，可以有效地控制母犊的出生率，而且降低了生产成本，提高了奶牛以及牛奶的品质，达到了超常快速繁育母奶牛的目的。
【专利说明】一种采用胚胎生物技术超常规繁育良种奶牛的方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种生物工程技术，具体为一种采用胚胎生物技术超常规繁育良种奶 牛的方法。
【背景技术】
[0002] 牛奶作为一种营养最全面和完善的食品之一，历来被人们所重视。特别是随着人 们生活水平的提高和膳食结构的不断改善，牛奶的社会需求不断增加，按照常规的奶牛繁 育发展速度，难以满足人们对牛奶日益增长的需求。如何利用高新技术超常规繁育奶牛是 摆在广大科技工作者特别畜牧工作者面前的一项重要而紧迫的任务。
[0003] 我国从70年代开始对胚胎生物工程技术进行研究，80年代后研究发展速度加快， 近年来，在胚胎生物工程单项技术方面取得了可喜的研究成果。特别是超数排卵、体外受 精、胚胎收集、性别鉴定、胚胎分割、胚胎克隆、胚胎冷冻保存及胚胎移植等工程技术方面， 有了较大突破和进展，在一定程度上加速了奶牛的繁殖和品质的改良，但在控制奶牛出生 性别技术方面，无法突破，将严重制约着奶牛超常超繁育的发展速度。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的是提供一种采用胚胎生物技术超常规繁育良种奶牛的方法，本发明 是通过以下技术来实现的： 一种采用胚胎生物技术超常规繁育良种奶牛的方法，选择优秀且适宜母奶牛作为供 体，所述方法包括以下步骤： a、 超数排卵：在所选母奶牛发情的前4d，即发情周期的第16天或第17天，在肌肉或皮 下注射 PMSG1500-3000IU ; b、 人工授精：经过超数排卵处理的母奶牛发情后，选择优良公牛的的精液，在适宜时间 进行人工授精； c、 冲胚：利用二路式导管冲卵器，将冲洗液通过内管注入子宫角内，然后导出冲洗液， 及可获得所需胚胎冲洗液； d、 胚胎的检查：把步骤c收集到的冲洗液，静置lOmin，待胚胎下沉后，移去上层液，放 在显微镜下检查数量和发育情况； e、 胚胎冷冻：把胚胎放在含有防冻剂的杜氏培养液中采取缓慢降温冷冻； f、 胚胎解冻：可直接放在室温中解冻，解冻清除掉防冻剂； g、 胚胎分离：利用显微操作仪对胚胎进行半胚以上分割； h、 胚胎移植：采用非手术移植，一只手伸入直肠，检查黄体位于哪一侧和发育情况，然 后握住子宫颈，另一手将移植管插入与黄体同侧的子宫角内，注入胚胎。
[0005] 所述步骤a中一次肌注上述量的PMSG，隔日再注射PGF2a3(T40mg。
[0006] 所述步骤b中，人工授精应使用活率高密度大的精液，而且将授精次增加到2次或 3次，两次间隔8~10h。
【权利要求】
1. 一种采用胚胎生物技术超常规繁育良种奶牛的方法，选择优秀且适宜母奶牛作为供 体，其特征在于：所述方法包括以下步骤： a、 超数排卵：在所选母奶牛发情的前4d，即发情周期的第16天或第17天，在肌肉或皮 下注射 PMSG1500-3000IU ; b、 人工授精：经过超数排卵处理的母奶牛发情后，选择优良公牛的的精液，在适宜时间 进行人工授精； c、 冲胚：利用二路式导管冲卵器，将冲洗液通过内管注入子宫角内，然后导出冲洗液， 及可获得所需胚胎冲洗液； d、 胚胎的检查：把步骤c收集到的冲洗液，静置lOmin，待胚胎下沉后，移去上层液，放 在显微镜下检查数量和发育情况； e、 胚胎冷冻：把胚胎放在含有防冻剂的杜氏培养液中采取缓慢降温冷冻； f、 胚胎解冻：可直接放在室温中解冻，解冻清除掉防冻剂； g、 胚胎分离：利用显微操作仪对胚胎进行半胚以上分割； h、 胚胎移植：采用非手术移植，一只手伸入直肠，检查黄体位于哪一侧和发育情况，然 后握住子宫颈，另一手将移植管插入与黄体同侧的子宫角内，注入胚胎。
2. 根据权利要求1所述一种采用胚胎生物技术超常规繁育良种奶牛的方法，其特征在 于：所述步骤a中一次肌注上述量的PMSG，隔日再注射PGF2a3(T40mg。
3. 根据权利要求1所述一种采用胚胎生物技术超常规繁育良种奶牛的方法，其特征在 于：所述步骤b中，人工授精应使用活率高密度大的精液，而且将授精次增加到2次或3次， 两次间隔8~10h。
4. 根据权利要求1所述一种采用胚胎生物技术超常规繁育良种奶牛的方法，其特征在 于：步骤c中所述冲洗液为杜氏磷酸盐缓冲液。
5. 根据权利要求1所述一种采用胚胎生物技术超常规繁育良种奶牛的方法，其特征在 于：所述冲胚一般在人工授精6~8d进行。
6. 根据权利要求1所述一种采用胚胎生物技术超常规繁育良种奶牛的方法，其特征在 于：所述步骤e，在冷冻前需先依次经过含有由低浓度到高浓度防冻剂的杜氏培养液，防冻 剂的最高梯度为1. (Tl. 5mol/l，每种深度中停留5~10min，在最后一种深度中降温冷冻。
7. 根据权利要求1所述一种采用胚胎生物技术超常规繁育良种奶牛的方法，其特征在 于：所述步骤e，在冷冻时必须采取缓慢降温，由室温降至-5°C ~_7°C，每分钟降1 °C，在此温 度下进行诱发结冰，然后按每分钟降〇. 3°C ~0. 5°C的速度降至-33°C ~-38°C，此后可直接浸 入液氮保存。
8. 根据权利要求1所述一种采用胚胎生物技术超常规繁育良种奶牛的方法，其特征在 于：所述步骤f，解冻后加入蔗糖液稀释。
9. 根据权利要求1所述一种采用胚胎生物技术超常规繁育良种奶牛的方法，其特征在 于：所述步骤h，胚胎移植的受体可以选择黄牛或其它种牛。
10. 根据权利要求1所述一种采用胚胎生物技术超常规繁育良种奶牛的方法，其特征 在于：为了控制和提商奶牛母续的出生率，将提供精液的公牛右辜丸带阳性精子的输精管 人工结扎，确保左睾丸排出带阴性的X精子，以及将供体母牛右卵巢输卵管进行结扎，确保 左卵管排出带阴性的X卵。
【文档编号】A61D19/00GK104042355SQ201410281737
【公开日】2014年9月17日 申请日期:2014年6月23日 优先权日:2014年6月23日
【发明者】不公告发明人 申请人:南通惠然生物科技有限公司