本发明涉及一种紫斑牡丹初代培养愈伤组织诱导方法，属于牡丹繁殖技术领域。
背景技术：
‘紫斑’牡丹是野生种杨山牡丹的生产中常用到的栽培品种。‘紫斑’牡丹不仅具有很好的观赏与药用作用，还有较高的油用价值。近年来，相关调研发现‘紫斑’牡丹还可作为木本粮油植物资源进行开发利用，油用牡丹一般产油量是144斤/亩，远远高于芝麻、油茶等的产油量。‘紫斑’牡丹籽油中含有丰富的不饱和脂肪酸，亚麻酸、亚油酸和油酸，其中，α-亚麻酸含量高达42.34％～49％。α-亚麻酸是构成人体脑细胞和组织细胞的重要成分，是人体不可缺少的自身不能合成又不能替代的多不饱和脂肪酸，又有“血液营养素”、“维生素F”和“植物脑黄金”之称，有抗肿瘤、抗炎、改善心血管和调节免疫等功能。牡丹籽油多项指标都超过了以高档著称的橄榄油，是名副其实的高端食用油。
牡丹有性繁殖系数大，但实生苗变异大，不能较好的保存母本优良性状，而且种子的种皮的透水和透气性也影响种子的萌发，种子的上胚轴还具有休眠现象，即秋季生根，春季才发芽，而且种子萌发也不整齐，存在部分种子几年内一直是休眠状态。因而采用组织培养技术繁殖优质油用牡丹成为重要的良种繁育途径。
但目前由于采用鳞芽诱导愈伤时极易褐化，导致愈伤组织诱导率低。
技术实现要素：
发明目的：为了解决上述技术问题，本发明提供了一种紫斑牡丹初代培养愈伤组织诱导方法。
技术方案：为了实现上述发明目的，本发明公开了一种紫斑牡丹初代培养愈伤组织诱导方法，包括以下步骤：
(1)外植体选择：选择紫斑牡丹鳞芽为外植体，清洗，预冷24-48小时；
(2)消毒及接种：在无菌条件下，将步骤(1)所得鳞芽剥去鳞片，消毒，然后接种于愈伤组织诱导培养基上；
(3)愈伤组织诱导培养：将接种后的外植体放在培养室中培养，红光培养7-10天。
优选，所述紫斑牡丹为“紫斑”油用牡丹。
优选，所述步骤(1)中清洗方法为：用洗衣粉溶液浸泡2小时，再轻轻刷洗鳞芽外表面，然后放在自来水流水下冲洗24小时。
优选，所述步骤(1)中的预冷温度为0-4℃。
优选，所述步骤(2)中消毒方法为：先用75％酒精消毒20-30秒，再用0.1％升汞消毒10-15分钟，再用无菌水冲洗5-6次。
优选，所述步骤(2)中培养基的基础培养基为MS培养基，其中6-BA1-2mg/L，NAA0.3-0.5mg/L，硝酸银4-5mg/L，7g/L琼脂，30g/L蔗糖，pH调至5.8。
优选，所述步骤(3)中培养时的温度为25士2℃。
技术效果：相对于现有技术，本发明采用外植体预冷的方法，并且结合特定的培养基成分，最后再采用红光培养的方法，能够有效降低紫斑牡丹褐化率为0，无褐化现象发生，提高愈伤组织诱导率为100％，最终能获取数量多、质量好的丛生芽，从而满足继代增殖的需要，促进快繁体系的建立。
具体实施方式
实施例1
1、外植体选择：选择“紫斑”油用牡丹鳞芽为外植体，用洗衣粉溶液浸泡2小时，再软毛刷轻轻刷洗鳞芽外表面，然后放在流水下冲洗24小时，然后用纱布包起来放在冰箱中(0-4℃)预冷24小时。
2、外植体消毒及接种：将外植体转到无菌操作台上，将鳞芽剥去鳞片，先用75％酒精消毒20秒，再用0.1％升汞消毒10分钟，再用无菌水冲洗5次后，接种于愈伤组织诱导培养基上，每玻璃瓶接一个茎段。愈伤组织诱导培养基成分为MS培养基，6-BA1mg/L，NAA0.3mg/L，硝酸银4mg/L，7g/L琼脂，30g/L蔗糖；培养基pH调至5.8。
3、愈伤组织诱导培养：将接种后的外植体放在培养室适宜条件下培养。条件为温度25士2℃，进行红光培养7天。
4、结果：愈伤组织诱导率100％，褐化率为0，20天后不定芽分化率：85％，且不定芽生长健壮。
实施例2
1、外植体选择：选择“紫斑”油用牡丹鳞芽为外植体，用洗衣粉溶液浸泡2小时，再软毛刷轻轻刷洗鳞芽外表面，然后放在流水下冲洗24小时，然后用纱布包起来放在冰箱中(0-4℃)预冷48小时。
2、外植体消毒及接种：将外植体转到无菌操作台上，将鳞芽剥去鳞片，先用75％酒精消毒30秒，再用0.1％升汞消毒15分钟，再用无菌水冲洗5次后，接种于愈伤组织诱导培养基上，每玻璃瓶接一个茎段。愈伤组织诱导培养基成分为MS培养基，6-BA2mg/L，NAA0.3mg/L，硝酸银5mg/L，7g/L琼脂，30g/L蔗糖；培养基pH调至5.8
3、愈伤组织诱导培养：将接种后的外植体放在培养室适宜条件下培养。条件为温度25士2℃，进行红光培养10天。
4、结果：愈伤组织诱导率100％，褐化率为0，20天后不定芽分化率:88％，且不定芽生长健壮。
实施例3
1、外植体选择：选择“紫斑”油用牡丹鳞芽为外植体，用洗衣粉溶液浸泡2小时，再软毛刷轻轻刷洗鳞芽外表面，然后放在流水下冲洗24小时，然后用纱布包起来放在冰箱中(0-4℃)预冷36小时。
2、外植体消毒及接种：将外植体转到无菌操作台上，将鳞芽剥去鳞片，先用75％酒精消毒25秒，再用0.1％升汞消毒12分钟，再用无菌水冲洗5次后，接种于愈伤组织诱导培养基上，每玻璃瓶接一个茎段。愈伤组织诱导培养基成分为MS培养基，6-BA1.5mg/L，NAA0.4mg/L，硝酸银4.5mg/L，7g/L琼脂，30g/L蔗糖；培养基pH调至5.8
3、愈伤组织诱导培养：将接种后的外植体放在培养室适宜条件下培养。条件为温度25士2℃，进行红光培养9天。
4、结果：愈伤组织诱导率100％，褐化率为0，20天后不定芽分化率:87％，且不定芽生长健壮。
对照例1
1、外植体选择：选择“紫斑”油用牡丹鳞芽为外植体，用洗衣粉溶液浸泡2小时，再软毛刷轻轻刷洗鳞芽外表面，然后放在流水下冲洗24小时，然后用纱布包起来放在冰箱中(0-4℃)预冷12小时。
2、外植体消毒及接种：将外植体转到无菌操作台上，将鳞芽剥去鳞片，先用75％酒精消毒30秒，再用0.1％升汞消毒15分钟，再用无菌水冲洗5次后，接种于愈伤组织诱导培养基上，每玻璃瓶接一个茎段。愈伤组织诱导培养基成分为MS培养基，6-BA2mg/L，NAA0.3mg/L，硝酸银5mg/L，7g/L琼脂，30g/L蔗糖；培养基pH调至5.8。
3、愈伤组织诱导培养：将接种后的外植体放在培养室适宜条件下培养。条件为温度25士2℃，进行白光培养10天。
4、结果：愈伤组织诱导率65.2％，褐化率为24.8％，20天后不定芽分化率：70.6％，且不定芽生长瘦弱。
对照例2：
与实施例2方法相同，不同之处仅在于：不包含步骤1中的预冷步骤，培养结果如下：愈伤组织诱导率63.8％，褐化率为25.9％，20天后不定芽分化率：68.5％，且不定芽生长瘦弱。
对照例3：
与实施例2方法相同，不同之处仅在于：培养基中不包括硝酸银，培养结果如下：愈伤组织诱导率64.7％，褐化率为26.2％，20天后不定芽分化率：69.4％，且不定芽生长瘦弱。