一种米斛的育种方法
【专利摘要】本发明公开了一种米斛的育种方法，包括以下步骤：(1)将成熟后的米斛种子采收、晒干，放于阴凉、干燥通风处保存；(2)在播种大棚的上部覆盖活动遮阴网，播种大棚的四周覆盖薄膜，播种床离地面高度为35?55cm；(3)将培植基铺在以油毡布做托底的播种床上，得到厚度为5?15cm的种植层；(4)将米斛种子播于种植层上进行种植，然后浇水至种植层含水量为75?90wt％。本发明米斛的育种方法，采用米斛的种子和培植基进行种子的繁殖培育，种子通过吸收培植基提供的养料，能够快速萌发，长成具有茎和叶的种苗。本发明提高了种子的发芽率，同时解决了野外的种植环境因素制约，如受气候影响较大，且病虫害严重且难以防治的问题，保护了米斛的繁殖。
【专利说明】
一种米斛的育种方法
技术领域
[0001] 本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种米斛的育种方法。
【背景技术】
[0002] 米斛，又称：霍山石斛，学名：Dendrobium huoshanense C.Z.Tang et S. J.Cheng， 为兰科多年生附生草本植物，形曲不直，似蚱蜢髀，是米斛中的极品，为我县独有，拥有原产 地地理保护标志和濒临灭绝的国家级珍惜名贵中药材，是国家野生中药材二级保护品种， 有"植物大熊猫"之称，《本草纲目》记载:米斛生于悬崖峭壁之间、性微寒，有养胃生津、滋阴 除热、补肾益精、明目之功效。以之代茶可开胃健脾，霍山米斛具有益精填髓、补五脏内绝不 足，平胃气、长肌肉、益智除烦、清虚热、轻身延年之功效，清赵学敏、赵学凯《本草纲目拾遗》 《百草经》语曰：米斛近时有一种形短祗寸许细如灯芯，色青黄、嚼之味甘，微有滑涎。
[0003] 世界上有1500多种石斛，中国有76种石斛，霍山生长着中国最好的石斛，六万寨海 拔644米，群山环绕，植被茂盛，常年云雾缭绕，气候独特。常年平均气温在14.2-16.1摄氏 度，气候温暖湿润，有利于霍山石斛的生长和石斛多糖、生物碱成分的有效积累；常年降水 在1100-1600_之间，雨量充沛，适合石斛喜阴喜湿的生长特性。其次，六万寨方圆几十里群 山环绕，包含有2500多种野生植物，这些植物每天都向空气中排放氧气和大量的微量元素， 使得六万寨的空气达到了天然氧吧的标准。而霍山石斛就是靠根部吸收空气中的水分和氧 气来生长的，因此，吸收了六万寨这么优质的空气后，使得石斛中石斛多糖和生物碱的成分 更加的生态和天然化;除此之外，这里的山泉水Ph值在6.6到7.0之间，有利于石斛的生长。
[0004] 米斛一般生长在海拔100-3000米高度之间，常附生于树上或岩石上，喜温暖、湿润 和半阴环境，不耐寒。米斛的自然繁殖能力低、生长缓慢。而目前在米斛人工育种过程中，种 子发芽率往往不足20%，移植后的存活率也不到60%。这极大地限制了米斛的栽培。
[0005] 本发明的目的是，针对米斛组培繁殖中面临的步骤多、操作繁琐、成本高的问题， 进行研究和改进，提出一种米斛育种的快速繁殖方法。
【发明内容】
[0006] 针对现有技术中存在的上述不足，本发明所要解决的技术问题是提供一种米斛的 育种方法。
[0007] 本发明目的是通过如下技术方案实现的：
[0008] -种米斛的育种方法，包括以下步骤：
[0009] (1)将成熟后的米斛种子采收、晒干，放于阴凉、干燥通风处保存；
[0010] (2)在播种大棚的上部覆盖活动遮阴网，播种大棚的四周覆盖薄膜，播种床离地面 高度为35-55cm;
[0011] (3)将培植基铺在以油毡布做托底的播种床上，得到厚度为5-15cm的种植层；
[0012] (4)将米斛种子播于种植层上进行种植，然后浇水至种植层含水量为75_90wt%， 种植条件:每日光照10-15小时，光照度1000-30001x，温度为20-27°C，空气湿度为80-90%。
[0013] 优选地，所述步骤(2)中的播种大棚的上部覆盖活动遮阴网的面积占播种大棚总 面积的70-80%，播种大棚的四周覆盖薄膜的面积占播种大棚总面积的20-30%。
[0014] 优选地，所述步骤（3)中的培植基，由下述重量份的原料制备而成：花生麸15-25 份、菜籽柏5-15份、木糠65-75份、硫酸镁0.5-3份、重过磷酸钙1-5份、硝酸钾1-5份、硼酸 0.1-0.5份、酶0.2-2份、酶保活剂0.5-5份。
[0015] 优选地，所述的酶为枯草杆菌蛋白酶、尿素酶、木瓜蛋白酶中一种或多种的混合 物。
[0016] 更优选地，所述的酶由枯草杆菌蛋白酶、尿素酶、木瓜蛋白酶混合而成，所述枯草 杆菌蛋白酶、尿素酶、木瓜蛋白酶的质量比为(1-3) :(1-3): (1-3)。
[0017] 优选地，所述的酶保活剂为果糖、异麦芽糖、棉籽糖中一种或多种的混合物。
[0018] 更优选地，所述的酶保活剂由果糖、异麦芽糖、棉籽糖混合而成，所述果糖、异麦芽 糖、棉籽糖的质量比为(1-3) :(1-3): (1-3)。
[0019] 优选地，所述步骤(4)中的浇水采用雾化器喷水。
[0020] 本发明米斛的育种方法，采用米斛的种子和培植基进行种子的繁殖培育，种子通 过吸收培植基提供的养料，能够快速萌发，长成具有茎和叶的种苗。本发明提高了种子的发 芽率，同时解决了野外的种植环境因素制约，如受气候影响较大，且病虫害严重且难以防治 的问题，保护了米斛的繁殖。
【具体实施方式】
[0021] 下面结合实施例对本发明做进一步的说明，以下所述，仅是对本发明的较佳实施 例而已，并非对本发明做其他形式的限制，任何熟悉本专业的技术人员可能利用上述揭示 的技术内容加以变更为同等变化的等效实施例。凡是未脱离本发明方案内容，依据本发明 的技术实质对以下实施例所做的任何简单修改或等同变化，均落在本发明的保护范围内。
[0022] 实施例中各原料介绍：
[0023] 硫酸镁，CAS 号：7487-88-9。
[0024] 重过磷酸钙，CAS 号：65996-95-4。
[0025] 硝酸钾，CAS 号：7757-79-1。
[0026] 硼酸，CAS 号：10043-35-3
[0027]枯草杆菌蛋白酶，CAS: 9014-01-1，上海宝曼生物科技有限公司提供，酶活200U/ mg 〇
[0028] 尿素酶，CAS号:9002-13-5，上海宝曼生物科技有限公司提供，酶活200U/mg。
[0029] 木瓜蛋白酶，CAS号:900卜73-4,郑州康源化工产品有限公司提供，酶活200U/mg。
[0030] 果糖，CAS 号：7660-25-5。
[0031] 异麦芽糖，CAS 号:499-40-1。
[0032]棉籽糖，CAS 号：512-69-6。
[0033] 木肩，含碳量48.47%，含氮量0.3430 %。
[0034]菜籽柏，含碳量22.36 %，含氮量0.3422 %。使用预压浸出工艺对油菜籽进行榨油 中的副产物，优选为200型菜籽柏。
[0035] 花生麸，含碳量43.10 %，含氮量0.4788 %。
[0036] 实施例1
[0037] 米斛的育种方法，包括以下步骤：
[0038] (1)将成熟后的米斛种子(采摘自霍山县六万寨海拔644米的米斛种植基地)采收、 晒干，放于阴凉、干燥通风处保存，防止发霉变质；
[0039] (2)在播种大棚的上部覆盖活动遮阴网，播种大棚的四周覆盖薄膜，其中，播种大 棚的上部覆盖活动遮阴网的面积占播种大棚总面积的75%，播种大棚的四周覆盖薄膜的面 积占播种大棚总面积的25% ;播种床离地面高度为40cm;
[0040] (3)将培植基铺在以油毡布做托底的播种床上，铺的厚度为8cm，做种植层;得到厚 度为8cm的种植层；
[0041] (4)将米斛种子播于种植层上进行种植，每平方米种植层播种米斛种子100棵，然 后用雾化器浇水至种植层含水量为SOwt %，种植期间及时浇水保持种植层含水量为 80wt %，每日光照12小时，光照度20001x，控制温度为22°C，空气湿度为85% ;种植6周后得 到米斛幼苗。
[0042]所述步骤(3)中的培植基原料(重量份）：花生麸20份、菜籽柏10份、木糠70份、硫酸 镁1份、重过磷酸钙2.5份、硝酸钾3.5份、硼酸0.2份、枯草杆菌蛋白酶0.3份、尿素酶0.3份、 木瓜蛋白酶〇. 3份、果糖0.4份、异麦芽糖0.4份、棉籽糖0.4份。
[0043]培植基制备:将花生麸、菜籽柏、木糠粉分别碎至10目，再混合均匀，然后加热至90 °C保持5分钟进行高温消毒，得到混合料;将硫酸镁、重过磷酸钙、硝酸钾、硼酸加入混合料 中混合均匀，再将果糖、异麦芽糖、棉籽糖加入混合料中混合均匀，最后将枯草杆菌蛋白酶、 尿素酶、木瓜蛋白酶加入混合料中混合均匀，得到培植基。
[0044] 实施例2
[0045] 与实施例1基本相同，区别仅仅在于：
[0046]所述步骤(3)中的培植基原料(重量份）：花生麸20份、菜籽柏10份、木糠70份、硫酸 镁1份、重过磷酸钙2.5份、硝酸钾3.5份、硼酸0.2份、枯草杆菌蛋白酶0.45份、尿素酶0.45 份、果糖0.4份、异麦芽糖0.4份、棉籽糖0.4份。
[0047]培植基制备:将花生麸、菜籽柏、木糠粉分别碎至10目，再混合均匀，然后加热至90 °C保持5分钟进行高温消毒，得到混合料;将硫酸镁、重过磷酸钙、硝酸钾、硼酸加入混合料 中混合均匀，再将果糖、异麦芽糖、棉籽糖加入混合料中混合均匀，最后将枯草杆菌蛋白酶、 尿素酶加入混合料中混合均匀，得到培植基。
[0048] 实施例3
[0049] 与实施例1基本相同，区别仅仅在于：
[0050] 所述步骤(3)中的培植基原料(重量份）：花生麸20份、菜籽柏10份、木糠70份、硫酸 镁1份、重过磷酸钙2.5份、硝酸钾3.5份、硼酸0.2份、枯草杆菌蛋白酶0.45份、木瓜蛋白酶 〇. 45份、果糖0.4份、异麦芽糖0.4份、棉籽糖0.4份。
[0051 ]培植基制备:将花生麸、菜籽柏、木糠粉分别碎至10目，再混合均匀，然后加热至90 °C保持5分钟进行高温消毒，得到混合料;将硫酸镁、重过磷酸钙、硝酸钾、硼酸加入混合料 中混合均匀，再将果糖、异麦芽糖、棉籽糖加入混合料中混合均匀，最后将枯草杆菌蛋白酶、 木瓜蛋白酶加入混合料中混合均匀，得到培植基。
[0052] 实施例4
[0053]与实施例1基本相同，区别仅仅在于：
[0054]所述步骤(3)中的培植基原料(重量份）：花生麸20份、菜籽柏10份、木糠70份、硫酸 镁1份、重过磷酸钙2.5份、硝酸钾3.5份、硼酸0.2份、尿素酶0.45份、木瓜蛋白酶0.45份、果 糖〇. 4份、异麦芽糖0.4份、棉籽糖0.4份。
[0055]培植基制备:将花生麸、菜籽柏、木糠粉分别碎至10目，再混合均匀，然后加热至90 °C保持5分钟进行高温消毒，得到混合料;将硫酸镁、重过磷酸钙、硝酸钾、硼酸加入混合料 中混合均匀，再将果糖、异麦芽糖、棉籽糖加入混合料中混合均匀，最后将尿素酶、木瓜蛋白 酶加入混合料中混合均匀，得到培植基。
[0056] 实施例5
[0057] 与实施例1基本相同，区别仅仅在于：
[0058]所述步骤(3)中的培植基原料(重量份）：花生麸20份、菜籽柏10份、木糠70份、硫酸 镁1份、重过磷酸钙2.5份、硝酸钾3.5份、硼酸0.2份、枯草杆菌蛋白酶0.3份、尿素酶0.3份、 木瓜蛋白酶〇. 3份、果糖0.6份、异麦芽糖0.6份。
[0059]培植基制备:将花生麸、菜籽柏、木糠粉分别碎至10目，再混合均匀，然后加热至90 °C保持5分钟进行高温消毒，得到混合料;将硫酸镁、重过磷酸钙、硝酸钾、硼酸加入混合料 中混合均匀，再将果糖、异麦芽糖加入混合料中混合均匀，最后将枯草杆菌蛋白酶、尿素酶、 木瓜蛋白酶加入混合料中混合均匀，得到培植基。
[0060] 实施例6
[0061] 与实施例1基本相同，区别仅仅在于：
[0062]所述步骤(3)中的培植基原料(重量份）：花生麸20份、菜籽柏10份、木糠70份、硫酸 镁1份、重过磷酸钙2.5份、硝酸钾3.5份、硼酸0.2份、枯草杆菌蛋白酶0.3份、尿素酶0.3份、 木瓜蛋白酶〇. 3份、果糖0.6份、棉籽糖0.6份。
[0063]培植基制备:将花生麸、菜籽柏、木糠粉分别碎至10目，再混合均匀，然后加热至90 °C保持5分钟进行高温消毒，得到混合料;将硫酸镁、重过磷酸钙、硝酸钾、硼酸加入混合料 中混合均匀，再将果糖、棉籽糖加入混合料中混合均匀，最后将枯草杆菌蛋白酶、尿素酶、木 瓜蛋白酶加入混合料中混合均匀，得到培植基。
[0064] 实施例7
[0065] 与实施例1基本相同，区别仅仅在于：
[0066]所述步骤(3)中的培植基原料(重量份）：花生麸20份、菜籽柏10份、木糠70份、硫酸 镁1份、重过磷酸钙2.5份、硝酸钾3.5份、硼酸0.2份、枯草杆菌蛋白酶0.3份、尿素酶0.3份、 木瓜蛋白酶〇. 3份、异麦芽糖0.6份、棉籽糖0.6份。
[0067]培植基制备:将花生麸、菜籽柏、木糠粉分别碎至10目，再混合均匀，然后加热至90 °C保持5分钟进行高温消毒，得到混合料;将硫酸镁、重过磷酸钙、硝酸钾、硼酸加入混合料 中混合均匀，再将异麦芽糖、棉籽糖加入混合料中混合均匀，最后将枯草杆菌蛋白酶、尿素 酶、木瓜蛋白酶加入混合料中混合均匀，得到培植基。
[0068] 测试例1
[0069] 对实施例1-7的种子发芽率进行统计，具体结果见表1。
[0070] 表1:发芽率结果表
[0072]比较实施例1与实施例2-4,实施例1(枯草杆菌蛋白酶、尿素酶、木瓜蛋白酶复配） 发芽率明显高于实施例2_4(枯草杆菌蛋白酶、尿素酶、木瓜蛋白酶中任意二者复配）；比较 实施例1与实施例5-7,实施例1(果糖、异麦芽糖、棉籽糖复配)发芽率明显高于实施例5-7 (果糖、异麦芽糖、棉籽糖中任意二者复配）。
[0073] 测试例2
[0074]对实施例1-7的米斛幼苗移栽到大田里，统计存活率，具体结果见表2。
[0075] 表2:存活率结果表
[0077] 比较实施例1与实施例2-4,实施例1(枯草杆菌蛋白酶、尿素酶、木瓜蛋白酶复配） 存活率明显高于实施例2_4(枯草杆菌蛋白酶、尿素酶、木瓜蛋白酶中任意二者复配）；比较 实施例1与实施例5-7,实施例1(果糖、异麦芽糖、棉籽糖复配)存活率明显高于实施例5-7 (果糖、异麦芽糖、棉籽糖中任意二者复配）。
[0078] 测试例3
[0079] 对实施例1-7的米斛幼苗进行营养成分和植株粗细测试，具体结果见表3。 「00801 弃A.音差:成/4^和纟亩減細细[侧试：结里弃
L0082J 比较买施例1与买施例2-4,买施例1(枯旱杆菌蛍白酶、尿素酶、木瓜蛍白酶复配） 营养成分和植株粗细明显优于实施例2_4(枯草杆菌蛋白酶、尿素酶、木瓜蛋白酶中任意二 者复配）；比较实施例1与实施例5-7，实施例1 (果糖、异麦芽糖、棉籽糖复配)营养成分和植 株粗细明显优于实施例5-7(果糖、异麦芽糖、棉籽糖中任意二者复配）。
【主权项】
1. 一种米斛的育种方法，包括以下步骤： (1) 将成熟后的米斛种子采收、晒干，放于阴凉、干燥通风处保存； (2) 在播种大棚的上部覆盖活动遮阴网，播种大棚的四周覆盖薄膜，播种床离地面高度 为35_55cm; (3) 将培植基铺在以油毡布做托底的播种床上，得到厚度为5-15cm的种植层； (4) 将米斛种子播于种植层上进行种植，然后浇水至种植层含水量为75-90wt%，种植 条件:每日光照10-15小时，光照度1000-30001x，温度为20-27°C，空气湿度为80-90%。2. 如权利要求1所述的米斛的育种方法，其特征在于： 所述步骤(3)中的培植基，由下述重量份的原料制备而成:花生麸15-25份、菜籽柏5-15 份、木糠65-75份、硫酸镁0.5-3份、重过磷酸钙1 -5份、硝酸钾1 -5份、硼酸0.1-0.5份、酶0.2-2份、酶保活剂0.5-5份。3. 如权利要求2所述的米斛的育种方法，其特征在于:所述的酶为枯草杆菌蛋白酶、尿 素酶、木瓜蛋白酶中一种或多种的混合物。4. 如权利要求3所述的米斛的育种方法，其特征在于:所述的酶由枯草杆菌蛋白酶、尿 素酶、木瓜蛋白酶混合而成，所述枯草杆菌蛋白酶、尿素酶、木瓜蛋白酶的质量比为（1-3): (1-3):(1 -3)。5. 如权利要求1-4中任一项所述的米斛的育种方法，其特征在于:所述的酶保活剂为果 糖、异麦芽糖、棉籽糖中一种或多种的混合物。6. 如权利要求5所述的米斛的育种方法，其特征在于:所述的酶保活剂由果糖、异麦芽 糖、棉籽糖混合而成，所述果糖、异麦芽糖、棉籽糖的质量比为(1-3) :(1-3): (1-3)。7. 如权利要求1-6中任一项所述的米斛的育种方法，其特征在于:所述步骤(2)中的播 种大棚的上部覆盖活动遮阴网的面积占播种大棚总面积的70-80%，播种大棚的四周覆盖 薄膜的面积占播种大棚总面积的20-30%。8. 如权利要求1-7中任一项所述的米斛的育种方法，其特征在于:所述步骤(4)中的浇 水采用雾化器喷水。
【文档编号】A01G31/00GK105941111SQ201610305097
【公开日】2016年9月21日
【申请日】2016年5月6日
【发明人】陈昌全
【申请人】安徽山珍藏生态农业有限公司