无核葡萄快速育种方法
【专利摘要】本发明涉及葡萄的育种技术，特别是涉及一种无核葡萄快速育种方法；本发明采用步骤：A.父母本的选择，B.花粉的收集，C.母本去雄授粉，D.胚挽救培养及成苗，E.嫁接，F.当年结果鉴定；本发明通过胚培手段，可以采用有无核倾向的品种做母本，在胚发育到一定阶段，还没有退化之前取出，接种在外来培养基上进行诱导萌发，继代培养后成为正常的试管苗，从而提高无核几率，提高育种效率；将所得的试管苗继代培养，促进成熟，待基部几节半木质化后，嫁接在成龄葡萄树上，实现当年结果；通过鉴定果实的种子情况，确定杂交后代是否为无核，从而缩短育种年限3?4年。
【专利说明】
无核葡萄快速育种方法
技术领域
[0001]本发明涉及葡萄的育种技术，特别是涉及一种无核葡萄快速育种方法。
【背景技术】
[0002]无核葡萄可用于鲜食和制干，由于其具有良好的口感，因此市场发展前景非常广阔，是世界各国育种学家的育种方向。由于无核葡萄没有种子，不能用常规育种方法进行，只能通过幼胚挽救技术。
[0003]通过常规杂交手段培育无核葡萄品种，只能采用有核葡萄为母本，无核葡萄为父本进行杂交，获得种子后进行培养筛选出无核品种，这样获得无核几率很低，成本高。
[0004]本发明提供的胚挽救技术，通过胚培手段，可以采用有无核倾向的品种做母本，在胚发育到一定阶段，还没有退化之前将胚取出，接种在外来培养基上进行诱导萌发，继代培养后成为正常的试管苗，具有成苗率高的特点，且成苗后通过在试管内炼苗，将所得的试管苗继代培养，促进成熟，待基部几节半木质化后，嫁接在成龄葡萄上，通过特别的管理方式，促其当年结果，鉴定是否为无核品种，从而缩短育种年限3-4年。
【发明内容】
[0005]为了克服现有技术不足，本发明提供了一种无核葡萄快速育种方法，其特征在于，具体方法如下:
[0006](I)试管苗的获得
[0007]A:父母本的选择
[0008]选择有无核倾向的品种做母本，具有优良特点的品种做父本，如早熟、粒大、色艳、抗逆性强等;父本的花期最好早于母本，若晚于母本，可采取异地取粉.
[0009]B:花粉的收集
[0010]在选定的父本品种开花初期，采下发育正常的花序，去除顶部约三分之一发育不好的小花序和已经展开的花朵;将保留的健康花朵取下花冠及花药后用纱网过筛，在室温下凉干至花药裂开，装入处理干净的小瓶或光滑的纸袋中，封口，放在装有无水CaCO3的干燥器中，4°C低温保存，待用。
[0011]C:母本去雄授粉
[0012]选择母本树上发育一致的花序若干，开花前1-2天进行人工去雄，去雄时间最好是早晨或上午，并注意去除发育不良及已经打开的花朵，保证母本的纯度。之后立即套袋和挂牌标记，一般第二天柱头上开始分泌水滴状粘液，当出现有粘液时用脱脂棉蘸取备好的花粉点到柱头上，进行人工授粉，每天I次，连续授粉2-3次，注意授粉后立即套袋。
[0013]D:胚挽救培养及成苗
[0014]授粉40-55天后，视母本胚败育情况，从田间取回果穗，进行胚挽救培养;首先剥取胚珠:将果穗用流水冲洗3-5分钟，剪成3-5粒的小穗于烧杯中，置超净工作台上，用75 %乙醇浸泡约I分钟，无菌水冲洗3-5次，再用0.1%升汞消毒7分钟，无菌水冲洗3-5次，切开幼果取出胚珠接种于内装40mL培养基的10mL三角瓶中，每瓶接种10-20粒，胚珠培养基采用B5或Nistch为基本培养基，附加BA(6-苄氨基嘌呤)0.1-1.011^/1、144(吲哚乙酸)1.0-2.011^/1^、64(赤霉酸)0.3-0.811^/1、6%蔗糖、0.6%琼脂、0.1%活性炭;培养8周后，在无菌条件下剥取裸胚接种于胚萌发培养基中，以WP为基本培养基，附加0.1-0.5mg/L IBA(吲哚丁酸)、2 %蔗糖、0.6 %琼脂、0.1 %活性炭;继续培养10-15天，转移至成苗培养基进行继代培养，采用1/2MS为基本培养基，附加IBA(吲哚丁酸)0.1-0.5mg/L、2 %蔗糖、0.6 %琼脂、0.1 %活性炭，在成苗培养基中培养20-30天直至成苗，培养条件为温度25 °C ± 2°C，光照每天16h，光强度2000Lux。
[0015]E:嫁接
[0016]在3月将基部已经成熟的试管苗为接穗，枝条粗度1.5-2.0mm，长度3-4cm，砧木选择2-3年生且长势强的品种，采用常规劈接法进行嫁接，每株嫁接两个接穗，将接口用封口膜封严，在用小拱棚罩起，拱棚高度40cm左右;拱棚内要求温度20-30°C和饱和的湿度，天热时覆遮阴网；接后10-15天芽眼膨大，20天后萌发，40天后主梢高度可达20cm，50天后逐渐放风，遇阴雨天后去掉拱棚进行大田管理。
[0017]F:当年结果鉴定
[0018]当新梢长到40cm左右时，应及时摘心。每个主梢顶端留一个副梢继续生长，其余副梢均留2-3片叶摘心；6月上旬后，主梢高度在Im左右，在反复摘心1-2次后，6月下旬可出现花穗，这样按常规大田管理及时整形、施肥、浇水、打药，确保果实正常成熟，即可鉴定出是否为无核品种;该技术比常规育种缩短育种年限3-4年。
[0019]本发明的有益效果是:本发明采用一种无核葡萄快速育种方法，通过胚培手段，可以采用有无核倾向的品种做母本，在胚发育到一定阶段，还没有退化之前取出，接种在外来培养基上进行诱导萌发，继代培养后成为正常的试管苗，从而提高无核几率，再加上适当的嫁接和促结果技术，使嫁接苗当年结果，从而提高无核葡萄育种效率，可缩短育种年限3-4年。
【附图说明】
[0020]图1为本发明无核葡萄快速育种方法的流程示意图。
【具体实施方式】
[0021 ]下面结合附图对本发明作进一步说明。
[0022]其特征在于具体方法如下:
[0023](I)试管苗的获得
[0024]A:父母本的选择
[0025]选择有无核倾向的品种做母本，具有优良特点的品种做父本，如早熟、粒大、色艳、抗逆性强等;父本的花期最好早于母本，若晚于母本，可采取异地取粉。
[0026]B:花粉的收集
[0027]在选定的父本品种开花初期，采下发育正常的花序，去除顶部约三分之一发育不好的小花序和已经展开的花朵;将保留的健康花朵取下花冠及花药后用纱网过筛，在室温下凉干至花药裂开，装入处理干净的小瓶或光滑的纸袋中，封口，放在装有无水CaCO3的干燥器中，4°C低温保存，待用。
[0028]C:母本去雄授粉
[0029]选择母本树上发育一致的花序若干，开花前1-2天进行人工去雄，去雄时间最好是早晨或上午，并注意去除发育不良及已经打开的花朵，保证母本的纯度。之后立即套袋和挂牌标记，一般第二天柱头上开始分泌水滴状粘液，当出现有粘液时用脱脂棉蘸取备好的花粉点到柱头上，进行人工授粉，每天I次，连续授粉2-3次，注意授粉后立即套袋。
[0030]D:胚挽救培养及成苗
[0031]授粉40-55天后，视母本胚败育情况，从田间取回果穗，进行胚挽救培养;首先剥取胚珠:将果穗用流水冲洗3-5分钟，剪成3-5粒的小穗于烧杯中，置超净工作台上，用75 %乙醇浸泡约I分钟，无菌水冲洗3-5次，再用0.1%升汞消毒7分钟，无菌水冲洗3-5次，切开幼果取出胚珠接种于内装40mL培养基的10mL三角瓶中，每瓶接种10-20粒，胚珠培养基采用B5或Nistch为基本培养基，附加BA(6-苄氨基嘌呤)0.1-1.011^/1、144(吲哚乙酸)1.0-2.011^/1^、64(赤霉酸)0.3-0.811^/1、6%蔗糖、0.6%琼脂、0.1%活性炭;培养8周后，在无菌条件下剥取裸胚接种于胚萌发培养基中，以WP为基本培养基，附加0.1-0.5mg/L IBA(吲哚丁酸)、
2%蔗糖、0.6 %琼脂、0.1 %活性炭;继续培养10-15天，转移至成苗培养基进行继代培养，采用1/2MS为基本培养基，附加IBA(吲哚丁酸)0.1-0.5mg/L、2 %蔗糖、0.6 %琼脂、0.1 %活性炭，在成苗培养基中培养20-30天直至成苗，培养条件为温度25 °C ± 2°C，光照每天16h，光强度2000Lux。
[0032]E:嫁接
[0033]在3月将基部已经成熟的试管苗为接穗，枝条粗度1.5-2.0mm，长度3-4cm，砧木选择2-3年生且长势强的品种，采用常规劈接法进行嫁接，每株嫁接两个接穗，将接口用封口膜封严，在用小拱棚罩起，拱棚高度40cm左右。拱棚内要求温度20-30°C和饱和的湿度，天热时覆遮阴网；接后10-15天芽眼膨大，20天后萌发，40天后主梢高度可达20cm，50天后逐渐放风，遇阴雨天后去掉拱棚进行大田管理。
[0034]F:当年结果鉴定
[0035]当新梢长到40cm时，应及时摘心。每个主梢顶端留一个副梢继续生长，其余副梢均留2-3片叶摘心;6月上旬后，主梢高度在Im左右，在反复摘心1-2次后，6月下旬可出现花穗，这样按常规大田管理及时整形、施肥、浇水、打药，确保果实正常成熟，即可鉴定出是否为无核品种;该技术比常规育种缩短育种年限3-4年。
[0036]以上所述，仅为发明较佳的【具体实施方式】，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，可轻易想到的变化或替换，都应涵盖在本发明的保护范围之内。
【主权项】
1.无核葡萄快速育种方法，其特征在于，具体方法如下: (I)试管苗的获得 A:父母本的选择 选择有无核倾向的品种做母本，具有优良特点的品种做父本;父本的花期最好早于母本，若晚于母本，可采取异地取粉。 B:花粉的收集 在选定的父本品种开花初期，采下发育正常的花序，去除顶部约三分之一发育不好的小花序和已经展开的花朵;将保留的健康花朵取下花冠及花药后用纱网过筛，在室温下凉干至花药裂开，装入处理干净的小瓶或光滑的纸袋中，封口，放在装有无水CaCO3的干燥器中，4°C低温保存，待用。 C:母本去雄授粉 选择母本树上发育一致的花序若干，开花前1-2天进行人工去雄，去雄时间最好是早晨或上午，并注意去除发育不良及已经打开的花朵，保证母本的纯度;之后立即套袋和挂牌标记，一般第二天柱头上开始分泌水滴状粘液，当出现有粘液时用脱脂棉蘸取备好的花粉点到柱头上，进行人工授粉，每天I次，连续授粉2-3次，注意授粉后立即套袋。 D:胚挽救培养及成苗 授粉40-55天后，视母本胚败育情况，从田间取回果穗，进行胚挽救培养；首先剥取胚珠:将果穗用流水冲洗3-5分钟，剪成3-5粒的小穗于烧杯中，置超净工作台上，用75%乙醇浸泡约I分钟，无菌水冲洗3-5次，再用0.1%升汞消毒7分钟，无菌水冲洗3-5次，切开幼果取出胚珠接种于内装40mL培养基的10mL三角瓶中，每瓶接种10-20粒，胚珠培养基采用B5或Nistch为基本培养基，附加BA(6-苄氨基嘌呤)0.1-1.0mg/L、IAA(吲哚乙酸)1.0-2.0mg/L、GA(赤霉酸)0.3-0.8mg/L、6%蔗糖、0.6%琼脂、0.1%活性炭;培养8周后，在无菌条件下剥取裸胚接种于胚萌发培养基中，以WP为基本培养基，附加0.1-0.5mg/L IBA(吲哚丁酸)、2%蔗糖、0.6%琼脂、0.1%活性炭;继续培养10-15天，转移至成苗培养基进行继代培养，采用I/2MS为基本培养基，附加IBA(吲哚丁酸)0.1 -0.5mg/L、2 %蔗糖、0.6 %琼脂、0.1 %活性炭，在成苗培养基中培养20-30天直至成苗，培养条件为温度25 °C ± 2°C，光照每天16h，光强度2000Luxo E:嫁接 在3月将基部已经成熟的试管苗为接穗，枝条粗度1.5-2.0mm，长度3-4cm，砧木选择2-3年生且长势强的品种，采用常规劈接法进行嫁接，每株嫁接两个接穗，将接口用封口膜封严，再用小拱棚罩起，拱棚高度40cm左右;拱棚内要求温度20-30°C和饱和的湿度，天热时覆遮阴网；接后10-15天芽眼膨大，20天后萌发，40天后主梢高度可达20cm，50天后逐渐放风，遇阴雨天后去掉拱棚进行大田管理。 F:当年结果鉴定 当新梢长到39-41cm时，应及时摘心；每个主梢顶端留一个副梢继续生长，其余副梢均留2-3片叶摘心；6月上旬后，主梢高度在95-105cm，在反复摘心1-2次后，6月下旬可出现花穗，这样按常规大田管理及时整形、施肥、浇水、打药，确保果实正常成熟，即可鉴定出是否为无核品种。
【文档编号】A01H1/02GK105850710SQ201610188013
【公开日】2016年8月17日
【申请日】2016年3月30日
【发明人】亓桂梅, 董兴全, 张久慧, 李梓琳, 易黎, 李旋
【申请人】山东省葡萄研究院