专利名称：Prrsv的重组减毒的制作方法
技术领域：
本发明涉及通过在病毒蛋白特异性位点发生氨基酸突变而减毒的活PRRS病毒，其中所述病毒蛋白由选自ORF1a、ORF1b和/或ORF2的开放式阅读框编码。本发明还涉及编码所述病毒的核苷酸序列，产生所述病毒的方法和它们在制备用于预防和治疗PRRS感染的药物组合物中的用途。
背景技术：
一种神秘猪疾病，后来被重新命名为猪生殖和呼吸综合征(PRRS)，是由Arteriviridae病毒科的正链RNA包膜病毒引起的(E.J.Snijdet，1998)。约10-15年前，在美国和欧洲分别出现两种不同的PRRS病毒株。此病现已在北美、欧洲和亚洲的许多产猪国家局部流行。它一直是导致猪生殖力丧失和呼吸疾病的主要原因，据估计该病在美国的流行率高达70％。
该病毒通过吸入、摄食、交配、叮咬伤口或针刺的途径传播，并在粘膜、肺部或局部区域的巨噬细胞里复制。
这种疾病导致并临床隐性感染(resolution)或持续性感染。被持续感染的动物将病毒释放至口/咽的流体、血液、粪、尿和精液中。
母猪的临床症状涉及流产或存活力低的未成熟小仔猪、死产的猪和自溶胎儿。被感染的初生仔猪存在较高的死亡率或染上肺炎，肺炎及并发的细菌感染使得随后对猪的护理和饲养很困难，死亡率增加。公猪易于发烧和发生精子形态学的变化。
和所有arterivirus一样，PRRS病毒基因组是长约15kb的单链正链RNA分子。ORF(开放式阅读框)1a和1b编码复制酶，ORF2到5编码假定糖蛋白(gp1-4)，ORF6编码膜蛋白(M)和ORF7编码核壳体蛋白(N)。
对美国(分离物ATCC VR-2332，1991年7月18日保藏于美国典型培养物保藏中心，其在rockville，马里兰，美国，Genebank U87392 U00153)和欧洲(WO9221375，isolate Lelystad Agent(CDI-NL-2.91)，于1991年6月5日保藏于巴斯德研究所，巴黎，保藏号I-1102)的PRRS感染的最初描述鉴别了存在基因组和血清学差异的病毒。比较表明它们都有一个共同的祖先，该祖先在20世纪80年代后期临床症状被描述前已经分化。现已经报道了多种PRRS病毒的全长基因组序列及其蛋白编码区的完整结构(Snijder等，1998；Meulenberg等，1993b；Conzelmann等，1993；Murtaugh等，1995；Kapur等，1996)。PRRS病毒可以在体外的猪肺巨噬细胞、单核细胞、神经胶质细胞和两种MA-104细胞亚群(猴胚肾细胞)即所谓的CL-2621和MARC-145(K.D.Rossow，猪的生殖和呼吸综合征，Vet Pathol 351-20，1998)中进行复制。目前已有产生有传染力的PRRS克隆的重组方法(EP0839912A1)。
现已有市售PRRS减毒活疫苗(RespPRRS/IngelvacPRS MLV，Boehringer Ingelheim)用于保护猪。
在产生全面保护性免疫反应的功效上，即使是存在佐剂的情况下，死疫苗(灭活的全病毒)或亚单位疫苗(常规纯化或异源表达并纯化的病毒蛋白)通常不如活疫苗。对于PRRS来说已证实，相对于目前可得到的灭活疫苗，弱毒疫苗引起对疾病的免疫力更持久和有效(Snijder等，参考文献同上)。目前的活PRRS疫苗是根据常规的方法进行减毒，即连续地将病毒在适合的宿主细胞中传代直到致病性丧失(EP0529584B1)。目前的活PRRS疫苗仍然需要改进。第一，它们不能防止再感染，第二，它们不能使免疫接种的动物和感染野生病毒的动物在血清学上相区别。但最重要的一点是来自完整微生物的活疫苗虽然毒性减弱了，但可能伴随着严重的安全问题，特别是对于RNA病毒如PRRS病毒来说更是如此，这是因为认为RNA病毒由于缺乏RNA复制酶的校对导致对RNA基因组的不精确复制引起了高的突变率。
减毒活病毒潜在的回复可能造成对免疫动物的严重威胁。由常规多次传代方法得到的减毒病毒的分子来源和遗传稳定性仍然未知，而且回复体的形成是不可预知的。
因此，本发明要解决的技术问题是提供一种极少有可能回复成野生型病毒的PRRS病毒。
发明概述本发明涉及活的PRRS病毒，该病毒是通过对由选自ORF1a、ORF1b和/或ORF2的开放式阅读框(ORF)编码的病毒蛋白上的特异性位点进行氨基酸突变而减毒获得。本发明还涉及编码所述病毒的核苷酸序列，产生这种病毒的方法和它们在制备预防和治疗PRRS感染的药物组合物中的应用。
图1ATTC VR-2332的ORF1a的氨基酸序列，其中已标出了本发明优选的减毒位点。
图2ATTC VR-2332的ORF1b的氨基酸序列，其中已标出了本发明优选的减毒位点。
图3ATTC VR-2332的ORF2的氨基酸序列，其中已标出了本发明优选的减毒位点。
图4ATTC VR-2332的ORF1a的核苷酸序列，其中粗体表示本发明优选的减毒位点，下划线为最优选位点。
图5ATTC VR-2332的ORF1b的核苷酸序列，其中粗体表示本发明优选的减毒位点，下划线为最优选位点。
图6ATTC VR-2332的ORF2的核苷酸序列，其中粗体表示本发明优选的减毒位点，下划线为最优选位点。
发明详述由权利要求书限定了特征的本说明书和技术方案提供了解决上述技术问题的方法。
在描述本发明的技术方案之前，必需清楚的是本文和附的权利要求中使用的单词“a”、“an”和“the”包含了复数的意思，除非在文中清楚指明了其含义。因此，例如，“a PRRS virus”包括多种所述PRRS病毒，“cell”指一个或多个细胞及本领域的技术人员已知的等同物，等等。除非另外定义了，本文中使用的所有技术和科学术语具有本发明所属领域的技术人员通常所理解的相同含义。虽然在实践或检测本发明时可以使用与文中描述的相似或等同的方法和材料，但是在本发明中仍然描述了优选的方法、设备和材料。文中提及的所有出版物均引入本文作为参考，用来描述和公开这些出版物上报导的可用于本发明的细胞系、载体和方法。本发明公开的内容不会由于在前发明的这种公开导致丧失居前的权力。
发明人惊奇地发现PRRS病毒在某些开放式阅读框上含有特异性基因组位点，它们会顽固地回复成起始野毒株VR-2332在这些位点上的氨基酸。现在称为“毒力特异性位点”或简称为“本发明位点”或仅称为“位点”的这种位置上的进化压力是巨大的。有可能利用RespPRRS的两种回复株首次证实起始野毒株的这种毒力特异性位点上的氨基酸突变在美国和欧洲有地理性差异。具有作为本发明减毒基础的特定突变的活疫苗可以避免目前制备减毒疫苗的缺陷，所述减毒突变的另一优点在于它们的已知分子唯一性上，这种唯一性使得它们可以作为减毒病毒的显著标记并使得它们能与野生型病毒区别开来。
将常规减毒病毒RespPRRS的氨基酸和核苷酸序列与起始野毒株VR-2332的进行比较，为了鉴别出毒力特异性位点，对两种提及的毒力回复体之间及与VR-2332和RespPRRS之间分别进行了比较。
这样使得可以鉴别与PRRS病毒的毒力相关的每种病毒蛋白上的毒力特异性位点。
结果，本发明一方面涉及活的PRRS病毒，该病毒不是RespPRRS，并且要比PRRS病毒ATCC VR-2332毒性弱，其特征在于它含有一种由开放式阅读框(ORF)编码的蛋白，该开放式阅读框选自以下的组图1描述的所述VR-2332毒株的ORF1a，图2中描述的所述VR-2332株的ORF1b，和/或图3描述的所述VR-2332株的ORF2，其中在确定的毒力特异性位点的至少一个氨基酸不等同于VR-2332毒株在所述相应位置上的至少一个氨基酸。
氨基酸和核苷酸的编号方式依据VR-2332的数据记载。图1、2和3提供了代表所有PRRS毒株的信息，从而使得发明形象化，还可以鉴别进行不同编号的所有PRRS病毒中优选的氨基酸和优选的位点。鉴别这些位点可以通过以下方法进行鉴别目标PRRS病毒株和列出的参照病毒株中保守的特征相同的氨基酸，接着确定目标病毒上分别相应于图1、2和/或3中位点的位置。
已经鉴别出了图1、2和/或3所示VR-2332的ORF1a、ORF1b和/或ORF2编码的蛋白中的三个上述位点。
本发明的另一方面涉及活的减毒PRRS病毒，该病毒包含基本上如VR-2332而非RespPRRS中的ORF1a、ORF1b和ORF2，其特征在于ORF1a的321-341位的至少一个氨基酸不等同于图1中描述的VR-2332在所述相应位置上的氨基酸，和/或ORF1b的936-956位的至少一个氨基酸不等同于图2中描述的VR-2332在所述相应位置上的氨基酸，和/或ORF2的1-20位的至少一个氨基酸不等同于图3中描述的VR-2332在所述相应位置上的氨基酸。因此，在ORF1a的321-341位、ORF1b的936-956位和/或ORF2的1-20位(分别参见图4、5或6)的位置上，编码一个或多个氨基酸的核苷酸三联体发生变异，其导致所述位点的序列发生核苷酸水平或者另外还有并另外优选氨基酸水平的一或多种变化，以至于所述位点的所有核苷酸或氨基酸位置可以发生突变。本发明包括所述位点的一个或者两个或所有三个发生了突变的病毒。“突变”指一个氨基酸替换成另一个氨基酸或由另一个核苷酸替换编码核苷酸(如C替代为T)，即所谓的替代，优选其使编码的氨基酸被改变，或任何其它突变如“缺失”或“插入”。突变总是在编码核苷酸序列中进行。所述突变可以通过使用本领域标准方法进行，如Meulenberg等(Adv.Exp.Med.Biol，1998，440199-206)描述的对一个感染拷贝的定点诱变(参见如萨姆布鲁克等，1989，分子克隆试验指南，第二版，冷泉港实验室出版社，冷泉港实验室，纽约)。“基本上”指至少75％的序列，优选85％，更优选除了本发明所述“位点”外的所有序列等同于VR-2332，但也可以对本发明所述位点外的其它编码氨基酸的核苷酸进行突变。这类依据本发明所述的病毒仍符合本发明的标准，即不太可能回复成野生型且比VR-2332毒力弱。
根据本发明的活的PRRS病毒指如E.J.Snijder等(参考同上)定义的PRRS病毒，即能传染猪并能在猪中复制的病毒。常规减毒的RespPRRS病毒是特别要放弃的，它不属于本发明且不在本发明的保护范围内。RespPRRS病毒可以通过商业途径获得，如从Boehringer Ingelheim Vetmedica公司购得(Ingelvac@PRS MLV)，它的大部分序列也是公众可得到的(Genebank AJ223082).
对于本发明来说特别重要的位点和氨基酸决不局限于在VR-2332毒株中具体描述的位置，而是用于以一种可仿效的方式来指出在该位点或其它PRRS毒株中相应位点上的优选氨基酸。对于不同的PRRS病毒来说，优选氨基酸的位置编号方式可以不同，但作为Arteriviridae病毒科病毒的分子生物学领域的专家来说很容易通过这些优选氨基酸与所述蛋白的其它保守氨基酸的相关性来鉴别它们。
术语“比PRRS病毒VR-2332毒力弱”可以理解为是比较感兴趣病毒与VR-2332的临床症状。确定一种PRRS病毒是否比PRRS病毒VR-2332毒力弱的优选过程由实施例1阐述。并不是在毒力特异性位点的所有可能的优选氨基酸突变均可以导致毒力降低。实施例1的方法提供了精确和直接确定含有本发明所述蛋白的PRRS活病毒是否比野毒株VR-2332毒力弱的实验策略。
毒力特异性位点可以通过减毒病毒的至少一个氨基酸向VR-2332的氨基酸的回复来鉴别。该特异性氨基酸是更大的二级肽结构如α螺旋、β折叠或发夹β基序或其它结构的一部分。因此极有可能是相邻氨基酸也参与调节该蛋白的毒性，蛋白质化学领域的专家因此预计很可能在最初鉴定的氨基酸位点左右两侧的10个邻接氨基酸中鉴定出与毒力相关的其它氨基酸。10到20个氨基酸是蛋白中肽基序的典型范围。因此，本发明优选的病毒含有如图1例示的蛋白或其在其它病毒株中的相应蛋白，这些蛋白中的毒力特异性位点包括在最初鉴定的氨基酸位点上游的10个氨基酸和下游的10个氨基酸。更优选的如上所述的病毒，其中的毒力特异性位点包括在最初鉴定的氨基酸位点上游的5个氨基酸和下游的5个氨基酸。最优选的如上所述的病毒，其中的毒力特异性位点包括在最初鉴定的氨基酸位点上游的3个氨基酸和下游的3个氨基酸。
根据本发明的教导，通过对毒力特异性位点上的氨基酸进行突变有可能从野毒株产生减毒的PRRS毒株。然而，RNA病毒的高频突变所致的安全问题仍然存在。该问题可以通过缺失病毒蛋白的毒力特异性位点上的特异性氨基酸得到极大的缓解。因此本发明涉及上述的PRRS病毒，其特征在于该病毒蛋白的毒力特异性位点上至少一个氨基酸被缺失。术语“缺失”可以理解成图中所示一或多个位点上的相应氨基酸缺失。因此，根据本发明，“缺失”指移走一个或几个核苷酸或氨基酸。
在一个更优选的方案中，本发明涉及活的减毒PRRS病毒，其特征在于ORF1a的321-341位的至少一个氨基酸被缺失和/或ORF1b的936-956位的至少一个氨基酸被缺失和/或ORF2的1-20位的至少一个氨基酸被缺失。因此，不管在ORF1a的321-341位、ORF1b的936-956位或ORF2的1-20位，或编码一或多个氨基酸的核苷酸三联体的所有三个位点缺失导致了在所述位点的一个或多个缺失。仅缺失一个核苷酸或一个氨基酸的病毒和所述位点之一或全部缺失的病毒都包括在本发明中(分别参见图4、5或6)。
为了鉴定特定PRRS病毒蛋白上的毒力特异性位点，在优选实施例中已证实至少一个氨基酸是处于突变的高压力下并与野毒株VR-2332的回复体的毒力特性相关。这种个别氨基酸位点是本发明最优选的方案。
因此，在最优选的方案中，本发明涉及一种根据本发明的活的减毒病毒，该病毒不是RespPRRS并且毒力比ACTT VR-2332弱，其特征在于ORF1a第331位的氨基酸和/或ORF1b第946位的氨基酸和/或ORF2第10位氨基酸不等同于ACTT VR-2332毒株在相应位点上的氨基酸。因此，在ORF1a第321位、ORF1b第946位或ORF2第10位、或编码一个氨基酸的核苷酸三联体的所有三个位点、或在该氨基酸发生突变导致在所述位点的一至三种突变(分别参见图4、5或6)。
由于上述的理由，仅通过缺失易于回复的氨基酸就可以更安全和更好地避免改变的氨基酸回复成有毒力的类型。
因此，本发明在此最优选方案中涉及本发明的减毒PRRS活病毒，其特征在于ORF1a第331位的氨基酸和/或ORF1b第946位的氨基酸和/或ORF2第10位的氨基酸被缺失，即，与VR-2332的位点相比较时不存在。
另一最优选的方案是根据本发明的活的减毒PRRS病毒，其特征在于ORF1a第321位的氨基酸即其编码三联体缺失。另一最优选的方案是根据本发明的活的减毒PRRS病毒，其特征在于ORF1b第946位的氨基酸即其编码三联体缺失。另一最优选的方案是根据本发明的活的减毒PRRS病毒，其特征在于ORF2第10位的氨基酸即其编码三联体缺失(分别参见图4、5或6)。所述最优选的病毒在所有其它位点上等同于VR-2332。
本发明的教导使得专家可以重组产生PRRS病毒的感染性克隆，该克隆比VR-2332毒力弱并可用于制备一种活的药物组合物。所有产生正链RNA病毒的重组感染性克隆所需的所有信息可以从文献中轻易获得，尤其对于PRRSV更是如此。例如，Meulenberg等的欧洲专利申请EP0839912，该发明全文引入本文中作为参考，它提供了制备重组活PRRS病毒的清楚的教导。因此，在另一方面，本发明涉及编码依据本发明的病毒的核苷酸序列。由于遗传密码的简并性，多核苷酸变异体将导致等同氨基酸的翻译。本发明同样包括那些简并的变异体。
如介绍页中提及的一样，对猪的健康管理很重要，这样可以区别药物组合物中的弱毒力活疫苗株和野毒株病毒的感染。这常常是困难的，尤其是在野生型感染的临床症状不是那种特异性的或是与其它感染形成重叠感染或是观察和评估的时间太短的时候。目标病毒的重组产生使得在能建立血清学标记或毒力标记的遗传密码中导入修饰。血清学标记指抗原性可检测到的分子如肽、蛋白、糖蛋白等，这些可以从被感染的细胞或体液如但不局限于咽、鼻液或尿中分离出。毒力标记可以理解为在能被重组分析方法如但不局限于PCR和常规测序鉴别的遗传密码中的标记。因此，在一个优选方案中，本发明涉及根据本发明的核苷酸序列，其中该核苷酸序列被修饰成编码一种毒力标记和/或血清学标记。特别地，为了使毒力减弱而导入的突变或缺失可用于作为毒力和血清学标记。通过在已公开的毒力特异性位点上中监控这些突变，有可能在早期预测的可能的毒力回复体的出现。
更优选本发明的核苷酸序列中编码所述标记的核苷酸序列位于编码结构性病毒蛋白的任一开放式阅读框中。
本发明的另一方面涉及产生根据本发明的传染性减毒PRRS活病毒的方法，所述方法包括产生一种如上描述的包含至少一个全长DNA拷贝或体外转录的RNA拷贝或任一种的衍生物的重组核酸。
本发明另一个优选的方案涉及依据本发明的方法，其中用分子生物学方法引入特异性突变，其特征在于相应于ORF1a的氨基酸位点321-341位、相应于ORF1b的氨基酸位点936-956位和/或相应于ORF2的氨基酸位点1-20位的核酸发生突变，该突变是在所述位点的至少一个核苷酸发生取代或缺失。
本发明另一个重要的方面是含有根据发明的PRRS病毒和药学上可以接受载体的药物组合物。
“药物组合物”基本上由以下组成组成一种或多种改变接受了其给药的生物或生长于其中或其表面的生物的生理功能如免疫功能但不局限于抗生素或抗寄生虫剂的成分，和其它为了获得某些其它目标而加入的组分，它们不局限于加工特性、无菌性、稳定性、经过肠道或非肠道途径如口服、鼻内、静脉内、肌内、皮下、皮内或其它适合途径给药的可行性，及给药后的耐受力，和控制释放特性。
药学上可接受的载体可含有生理学上可接受的化合物，该化合物用于如稳定或增加吸收或成为根据本发明的PRRS病毒的缓慢释放制剂的一部分。这种生理学上可接受的化合物包括，例如碳水化合物，如葡萄糖、蔗糖或右旋糖苷，抗氧化剂如抗坏血酸或谷胱甘肽、螯合剂、低分子量蛋白或其它稳定剂或赋形剂(参见如Remington’s Pharmaceutical Sciences，1990，18thed.Mack Publ.，Easton)。本领域的技术人员知道如何选择一种药学上可接受的载体，包括如根据所述组合物的给药途径选择生理学可接受的化合物。
本发明的另一个方面涉及本发明病毒的应用。通过提供本发明的活的减毒PRRS病毒，现在有可能用它们制备用于预防和治疗PRRS感染的疫苗。它们在减毒作用方面特定的分子基础使得它们优于目前常规的减毒病毒。尤其优选使用根据本发明的在毒力特异性位点有缺失的病毒，因为缺失不易回复。
下列实施例用于进一步解释本发明，但不应理解为限制本文公开的本发明的保护范围。
参考文献1.Snijder E.J.，Meulenberg J.J.M.，1998.The molecular biology of arteriviruses，Journalof General Virology May 79(5)961-971.2.Meulenberg J.J.M.，Hulst，M.M.et al.，1993b.Lelystad virus，the causative agent ofporcine epidemic abortion and respiratory syndrome，Virology 192，62-72.3.Conzelmann K.K，Visser N.，Van Woensel P.，Thiel H.J.，1993.Molecularcharacterization of porcine reproductive and respiratory syndrome virus，a member of thearterivirus group，Virology 103，329-339.4.Murtaugh M.P.，Elam M.R.，Kakach L.T.，1995.Comparison of the structural proteincoding sequences of the VR-2332 and Lelystad virus strains of the PRRS virus，Archives ofVirology 140，1451-1460.5.Kapur V.，Elam M.R.，Pawtovich T.M.Murtaugh M.P.，1996.Genetic variation inporcine reproductive and respiratory sydrome virus isolates in the midwestem United States，Journal of General Virology 77，1271-1276.6.Rossow K.D.，1998.Porcine reproductive and respiratory syndrome，Vet Pathol 351-20.
实施例1 减毒的确立该实施例明确指示如何比较两种不同PRRS病毒株的毒力特性。
每一项实验中每组至少10只没有感染PRRS病毒的小母猪。
动物经检验不含PRRS病毒特异性血清抗体并对PRRSV呈阴性。
实验中的所有动物具有相同的来源和品种。动物分组是随机的。
怀孕90天时，在每个鼻孔内施用1ml 105TDCID50(第三代)的PRRSV，每套检测中至少三个组。
一VR-2332攻击组，一个用可能的减毒病毒进行攻击的组，一个严格对照组。
如果实验全程中严格对照组保持PRRS阴性，并且VR-2332攻击组中出生的生命健康的小母猪比严格对照组至少少25％，则实验是有效的。
减毒，或者说毒力低，被定义为一个或多个确定生殖性能的参数在统计学上的显著变化。
优选实验组有至少一个下列参数显著减少-死胎频率-在怀孕112天之时或之前的流产率-木乃伊化(mumified)小母猪的数量-存活和体弱小母猪的数量-断奶前死亡率或还优选实验组有至少一个下列参数显著增加-每只大母猪的断奶小母猪的数量-每只大母猪生出健康小母猪的数量与VR2332感染组相比较
权利要求
1.一种活的减毒PRRS病毒，该病毒包含基本上如VR-2332中的ORF1a、ORF1b和ORF2但并非RespPRRS，其特征在于ORF1a的321-341位的至少一个氨基酸不等同于VR-2332在所述相应位置上的氨基酸，和/或ORF1b的936-956位的至少一个氨基酸不等同于VR-2332在所述相应位置上的氨基酸，和/或ORF2的1-20位的至少一个氨基酸不等同于VR-2332在所述相应位置上的氨基酸。
2.一种如权利要求1所述的活的减毒PRRS病毒，其特征在于ORF1a的321-341位的至少一个氨基酸被缺失、和/或ORF1b的936-956位的至少一个氨基酸被缺失、和/或1-20位的至少一个氨基酸被缺失。
3.一种如权利要求1或2所述的活的减毒PRRS病毒，其特征在于ORF1a第331位的氨基酸和/或ORF1b第946位的氨基酸和/或ORF2第10位的氨基酸不等同于ACTT VR-2332病毒株在相应位点上的氨基酸。
4.一种如权利要求1到3任一项所述的活的减毒PRRS病毒，其特征在于ORF1a第331位的氨基酸和/或ORF1b第946位的氨基酸和/或ORF2第10位的氨基酸被缺失。
5.一种编码如权利要求1到4任一项所述病毒的核苷酸序列。
6.一种如权利要求5所述的核苷酸序列，其中该核苷酸序列被修饰成编码一种毒力标记和/或血清学标记。
7.一种如权利要求6所述的核苷酸序列，其中编码所述标记的核苷酸序列位于任何编码结构性病毒蛋白的开放式阅读框中。
8.一种产生感染性减毒PRRS活病毒的方法，所述方法包括产生一种包含至少一个全长DNA拷贝或体外转录的RNA拷贝或任一种的衍生物的重组核酸序列，其特征在于所述核苷酸序列是如权利要求5-7任一项所述的核苷酸序列。
9.如权利要求8所述的方法，其中通过分子生物学的方法插入特异性突变，其特征在于相应于ORF1a的321-341位的氨基酸位点和/或ORF1b的936-956位的氨基酸位点和/或1-20位的氨基酸位点的核酸发生突变，使得所述位点上的至少一个核苷酸被取代或缺失。
10.一种含有如权利要求1-4任一项所述PRRS病毒和药学上可接受的载体的药物组合物。
11.如权利要求1-4任一项所述的PRRS病毒在制备用于预防和治疗PRRS感染的疫苗中的应用。
全文摘要
本发明涉及通过在病毒蛋白特异性位点发生氨基酸突变而减毒的活PRRS病毒，其中所述病毒蛋白由选自ORF1a、ORF1b和/或ORF2的开放式阅读框编码。本发明还涉及编码所述病毒的核苷酸序列，产生所述病毒的方法和它们在制备用于预防和治疗PRRS感染的药物组合物中的用途。
文档编号C12N15/09GK1406277SQ01804245
公开日2003年3月26日 申请日期2001年1月26日 优先权日2000年1月26日
发明者克努特·埃尔伯斯, 斯蒂芬·佩施, 海克·伦格伯斯 申请人:贝林格尔·英格海姆维特梅迪卡有限公司