人用乙型脑炎减毒活疫苗无明胶冻干稳定剂的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于疫苗制剂领域，具体而言，涉及一种人用乙型脑炎减毒活疫苗无明胶 冻干稳定剂。
【背景技术】
[0002] 流行性乙型脑炎由乙型脑炎病毒感染所引起，是人类中枢神经系统最常见的虫媒 病之一，广泛分布于亚洲，近年来流行范围逐渐扩大，其致死率高达30 %，另有50%患者会 留下永久性神经系统后遗症，被世界卫生组织（WHO)列为重点防控疾病。疫苗接种是预防 和控制乙型脑炎最经济、最有效的手段。
[0003] 目前市售乙型脑炎减毒活疫苗和乙型脑炎灭活疫苗皆为冷冻干燥技术所制，这种 技术有着无可比拟的优点：毒种在低温下干燥，各种成分的活性丧失少；复水性好，能很快 地吸水还原成干燥前的鲜活状态；脱水彻底，保存期长，储存运输、销售方便。而在此项技术 中，稳定剂的选择至关重要。
[0004] 目前市售的乙型脑炎减毒活疫苗保护剂均含有明胶成分，明胶，是由动物胶原水 解得到，来源于牛、猪等动物的皮、骨、腱与韧带中的胶原，既可以引起细胞介导免疫反应， 也可以引起非细胞介导免疫反应；此外，明胶也是细菌内毒素的主要来源，可导致人体产生 发热反应。Rottem M经研究发现，接种疫苗后出现过敏反应的儿童80%以上血清中可检测 出明胶IgE。此外，明胶来源于牛或猪，因此还具有携带动物源性病毒的潜在危险性。病毒 侵入可能引起人海绵体脑炎等异种病毒感染性疾病。因此，为降低冻干稳定剂中明胶等动 物源性蛋白成分引发的接种人群严重副反应及杜绝外源因子污染的可能性，并加强疫苗 的稳定性，筛选新的冻干稳定剂已势在必行。
【发明内容】
[0005] 本发明涉及人用乙型脑炎减毒活疫苗无明胶冻干稳定剂，本发明即采用不含明胶 成分的稳定剂作为替代，使疫苗制品对于人体的刺激性大为降低，并能保持较高安全性与 稳定性，从而优化疫苗制品，提尚疫苗质量。
[0006] 本发明特点和优势：
[0007] (1)冻干稳定剂不含明胶成分；
[0008] (2)本冻干稳定剂配方刺激性小，无已知过敏性人群，使用安全性较好。
[0009] (3)本冻干稳定剂，对疫苗成分保护性好，以此为支架的疫苗，在同样存储条件下， 稳定性大大优于现有疫苗品种。
[0010] 本发明所述的冻干稳定剂配方如下：
[0011] 磷酸氢二钠（包括其含水化合物）〇? 02~0? 05M、蔗糖0? 08~0? 15M、磷酸二氢钠 (包括其含水化合物）〇? 02~0? 06M、尿素0? 50~0? 80M、乳糖0? 20~0? 70M，pH6. 5~7. 8。
[0012] 本发明还涉及所述的人用乙型脑炎减毒活疫苗无明胶冻干稳定剂的制备方法，其 特征在于：
[0013] 步骤（1)，依次称取需要量的磷酸氢二钠（包括其含水化合物）、蔗糖、磷酸二氢钠 (包括其含水化合物）、尿素、乳糖，溶解于注射用水中；
[0014] 步骤（2)，调节pH至需要值。
[0015] 本发明还涉及使用所述无明胶冻干稳定剂制备人用乙型脑炎减毒活疫苗冻干制 剂的方法，其特征在于，
[0016]步骤（1)，开启冻干机，待板层温度达到-30°C至_40°C后制品允许入柜并进行保 持，直至产品入柜结束；
[0017]步骤（2)，对制品加速进行制冷，_40°C以下保持2小时以上使柜内所有制品完全 冻结；
[0018] 步骤（3)，调节冻干机气压至10Pa以下，在该气压和步骤（2)温度下使产品在低温 低压下干燥；
[0019] 步骤（4)，第一阶段干燥：给制品进行缓慢的加温至-10°C至0°C保持，直至使制品 外观成形，为淡黄色疏松体，外观完整无缺损；
[0020]步骤（5)，第二阶段干燥：制品在22°C -28°c条件下保持8小时以上；
[0021] 步骤（6)，压塞停机，完成冻干程序。
【具体实施方式】
[0022] 实施例1.冻干稳定剂的配方及配制方法
[0023] 筛选及优化出人用乙型脑炎减毒活疫苗无明胶冻干稳定剂适宜配方，含盐类、糖 类等成分，注射用水溶解配制而成。
[0024]
[0025] 将以上处方中各成分依次称取，溶解于注射用水中，待全部溶解后，调节pH至 6. 5 ~7. 8〇
[0026] 将乙型脑炎减毒活苗原液与冻干稳定剂按照一定体积进行混合，配制时长不超过 4小时，搅拌至均匀。
[0027] 实施例2.冻干曲线程序的优化
[0028] 优化了从预冻到升华干燥，最终解析干燥的时间控制。使成品的冻干效果更优，成 型性更佳。开启冻干机，待板层温度达到_30°C至-40°C后制品允许入柜并进行保持，直至 广品入柜结束。制品入柜完毕，柜门关闭确认后，对制品加速进彳丁制冷，使柜内所有制品完 全冻结（_40°C以下保持2小时以上）。给箱体制造一个低气压的环境（lOPa以下），使产品 在低温低压下干燥，抽真空。第一阶段干燥：给制品进行缓慢的加温至_l〇°C至0°C保持，直 至使制品外观成形，为淡黄色疏松体，外观完整无缺损。第二阶段干燥：制品在要求的温度 (22°C -28°C )的条件下保持8小时以上。压塞停机：压塞，再停机，完成冻干程序。
[0029] 实施例3.冻干后的产品质量检测
[0030] 根据中华人民共和国药典三部相关规定进行全部相关项目检测。
[0031]
[0033] 检测结果显示，无明胶冻干稳定剂冻干的疫苗产品，各项指标均符合国家规定及 企业标准。
[0034] 实施例4.成品长期稳定性与加速稳定性试验研究
[0035] 对成品进行长期稳定性研究，开展0个月、3个月、6个月、9个月、12个月、16个月、 24个月、36个月的各项相关指标的检测。现进行检测的各项指标均符合标准，且无明显变 化。并开展加速稳定性试验的研究，对成品进行28天、37°C热稳定性研究，结果无明显变 化。
[0036]批号：试201403001
[0037]
[0038]批号：试 201403002
[0039]
[0040]批号：试 201403003 [0041 ]
[0042]
[0043] 长期稳定性研究结果表明，乙型脑炎减毒活疫苗成品的主要质量指标，无明显变 化。
[0044]
[0045] 试201403001、试201404012、试201404013三批成品进行28天、37°C热稳定性加 速试验研究，结果表示成品滴度结果无明显变化。
[0046] 实施例5.对稳定剂配方单组份安全性试验进行研究
[0047] 对无明胶冻干稳定剂各组分的安全性试验进行研究，且进行各组分相应浓度的翻 倍量进行试验，进行异常毒性、乳鼠返祖试验、脑内致病力试验。结果均符合规定，无异常反 应。
[0048]
[0049] 按照如表所示的实验组进行试验，结果均符合药典规定，无异常反应。
[0050] 实施例6.对成品进行安全性试验研究
[0051] 对成品进行安全性试验研究，开展刺激性试验、过敏性试验、溶血性试验，所有试 验结果均符合规定要求。现已制备冻干人用乙型脑炎减毒活疫苗无明胶冻干稳定剂疫苗， 质量指标无显著差异，有效性指标和安全性指标能达到标准。结果表明：该稳定剂保护效果 良好，以该稳定剂制备的冻干乙型脑炎减毒活疫苗具有良好的安全性和免疫效果。
[0052] 最后需要说明的是，以上实施例仅用于解释本发明的实质，并不作为对本发明保 护范围的限定。
【主权项】
1. 一种人用乙型脑炎减毒活疫苗无明胶冻干稳定剂，其特征在于，所述冻干稳定剂配 方为： 磷酸氢二钠（包括其含水化合物）〇? 02~0? 05M、蔗糖0? 08M~0? 15M、磷酸二氢钠（包 括其含水化合物）〇? 02~〇? 06M、尿素0? 50~0? 80M、乳糖0? 20~0? 70M，pH6. 5~7. 8。2. 权利要求1所述的人用乙型脑炎减毒活疫苗无明胶冻干稳定剂的制备方法，其特征 在于，包括如下步骤：步骤（1)，依次称取需要量的磷酸氢二钠（包括其含水化合物）、蔗糖、 磷酸二氢钠（包括其含水化合物）、尿素、乳糖，溶解于注射用水中； 步骤⑵调节pH至需要值。3. 疫苗冻干稳定剂不含明胶成分。4. 使用权利要求1所述人用乙型脑炎减毒活疫苗无明胶冻干稳定剂制备人用乙型脑 炎减毒活疫苗冻干制剂的方法，其特征在于，包括如下步骤： 步骤（1)，开启冻干机，待板层温度达到_30°C至-40°C后制品允许入柜并进行保持，直 至广品入柜结束； 步骤（2)，对制品加速进行制冷，-40°C以下保持2小时以上使柜内所有制品完全冻结； 步骤（3)，调节冻干机气压至IOPa以下，在该气压和步骤（2)温度下使产品在低温低压 下干燥； 步骤（4)，第一阶段干燥：给制品进行缓慢的加温至-KTC至(TC保持，直至使制品外观 成形，为淡黄色疏松体，外观完整无缺损； 步骤（5)，第二阶段干燥：制品在22°C -28°C的条件下保持8小时以上； 步骤(6)，压塞停机，完成冻干程序。5. 使用权利要求1所述的冻干稳定剂制备的人用乙型脑炎减毒活疫苗冻干制剂。6. 使用权利要求4所述的方法制备获得的人用乙型脑炎减毒活疫苗冻干制剂。
【专利摘要】本发明涉及一种人用乙型脑炎减毒活疫苗无明胶冻干稳定剂，所述冻干稳定剂不含明胶成分，该配方配制的疫苗经试验及检测，证明疫苗稳定及安全性较高，刺激性小，无已知过敏性人群。所述的冻干保护剂的配方为：磷酸氢二钠(包括其含水化合物)0.02～0.05M、蔗糖0.08～0.15M、磷酸二氢钠(包括其含水化合物)0.02～0.06M、尿素0.50～0.80M、乳糖0.20～0.70M，pH6.5～7.8。
【IPC分类】A61P31/14, A61K9/19, A61K47/04, A61K47/26, A61K47/18, A61K39/12
【公开号】CN105106964
【申请号】CN201510144286
【发明人】吕文利, 张威, 鄂文娟, 赵新华, 田小凤, 胡志雄, 张雪, 朱蓉
【申请人】武汉生物制品研究所有限责任公司
【公开日】2015年12月2日
【申请日】2015年3月30日