专利名称：固定化多酚氧化酶催化高纯度茶多酚生产高纯度茶黄素的方法
技术领域：
本发明涉及茶萃出物处理生产茶黄素的方法。
背景技术：
现有高活性茶黄素及其生产技术中，检索到“高活性茶色素及其生产方法”，专利申请号为00112536，它用鲜茶叶本身的酶系，在较佳的氧化聚合条件下，使外加的茶叶提取物——茶多酚或鲜茶叶本身榨出的渣浆汁中的茶多酚氧化聚合成以茶黄素、茶红素为主的茶色素。其中酶为多种酶的复合物，主要起作用的酶不明确，且酶未加以固定化，并且生产原料以鲜叶酚类氧化为主，得到的产物中茶黄素为8-53％，其它以氧化的茶红素和茶褐素为主，另外在茶黄素的纯化过程中需要反复使用酸和碱，造成一定环境污染。另外专利85103794和97102362公开的红茶色素的生产制备方法其原理均为化学法，并且产品的茶黄素含量很低，茶黄素纯度为约30％。
发明内容
本发明的目的是提供一种采用生物化学方法，用固定化多酚氧化酶催化高纯度茶多酚生产高纯度茶黄素的方法。
本发明采用的技术方案如下1)多酚氧化酶的固定化用壳聚糖、琼脂或海藻酸盐包埋材料将多酚氧化酶进行包埋，并且用戊二醛、无水丁烯二酸-乙烯交联，冷藏于4℃条件下备用；2)制备茶多酚溶液将80％以上纯度的茶多酚配制成0.5％～6％的溶液；3)酶促反应按照1克固定化多酚氧化酶加入到1-10克茶多酚溶液中的比例将固定化多酚氧化酶加入到茶多酚溶液中，在50～60℃下搅拌反应60～80分钟，得到茶黄素溶液；4)分离将茶黄素溶液中的固定化酶从溶液中分离回收，回收到的固定化酶可反复使用；5)茶黄素的萃取茶黄素溶液用纯化剂萃取，萃取体积比为茶黄素溶液∶纯化剂＝1∶1～10，收集纯化剂，纯化剂为乙酸乙酯或乙醇；6)浓缩将上述纯化剂浓缩到膏状；7)干燥将膏状物置于真空干燥箱干燥到粉状，干燥条件为45～60℃，真空度大于0.05Mpa。
本发明具有的有益的效果是本发明工艺步骤简单、设备投入少，既可以降低生产成本，由于多酚氧化酶得到固定化，因此酶促反应又可以连续化，可根据需要控制茶多酚的氧化程度和产品质量，尤其避免使用多种酸和碱等化学试剂，是一种较环境的生产方法。此方法所得茶黄素含量纯度高达75％以上，并且残留物以未氧化的茶多酚为主，因为在医药、食品和化工上茶多酚的功能已经非常明确，而茶褐素的用途还没有报道；茶黄素的得率达到25％～35％。本发明的茶黄素产品包括75～85％的茶黄素，10～15％的茶多酚，5～10％的茶褐素和茶红素。外形为橘黄色粉末，易溶于50度左右的温水，水溶液呈亮黄色。
具体实施例方式
实施例1取纯化的多酚氧化酶酶液包埋在壳聚糖中用戊二醛交联成形，测定其活力50U/mg，取一定量固定化多酚氧化酶与10倍的6％的茶多酚溶液进行混合，在50℃下搅拌反应60分钟，得到的茶黄素溶液用离心法回收固定化酶，茶黄素溶液用乙醇萃取，萃取比为茶黄素溶液∶纯化剂＝1∶8，收集纯化剂，将纯化剂浓缩到膏状，将膏状物置于真空干燥箱干燥，条件为55℃，真空度大于0.05Mpa，干燥到粉末状态，得到的茶黄素的含量为78.3％。
实施例2取纯化的多酚氧化酶酶液包埋在海藻酸盐材料中用无水丁烯二酸-乙烯交联成形，测定其活力约在35U/mg，取一定量固定化多酚氧化酶与8倍的6％的茶多酚溶液进行混合，在50℃下搅拌反应80分钟，得到的茶黄素溶液用离心法回收固定化酶，茶黄素溶液用乙醇萃取，萃取比为茶黄素溶液∶纯化剂＝1∶8，收集纯化剂，将纯化剂浓缩到膏状，将膏状物置于真空干燥箱干燥，条件为50℃，真空度大于0.05Mpa，干燥到粉末状态，得到的茶黄素的含量为83.1％。
实施例3取纯化的多酚氧化酶酶液包埋在海藻酸盐材料中用戊二醛交联成形，测定其活力45U/mg，取一定量固定化多酚氧化酶与10倍的3.5％的茶多酚溶液进行混合，在50℃下搅拌反应45分钟，得到的茶黄素溶液用离心法回收固定化酶，茶黄素溶液用乙醇萃取，萃取比为茶黄素溶液∶纯化剂＝1∶8，收集纯化剂，将纯化剂浓缩到膏状，将膏状物置于真空干燥箱干燥，条件为55℃，真空度大于0.05Mpa，干燥到粉末状态，得到的茶黄素的含量为81.3％。
权利要求
1.固定化多酚氧化酶催化高纯度茶多酚生产高纯度茶黄素的方法，其特征在于1)多酚氧化酶的固定化选择壳聚糖、琼脂、海藻酸盐包埋材料将多酚氧化酶进行包埋，并且用戊二醛、无水丁烯二酸-乙烯交联，冷藏于4℃条件下备用；2)制备茶多酚溶液将80％以上纯度的茶多酚配制成0.5％-6％的溶液；3)酶促反应按照1克固定化多酚氧化酶加入到1-10克茶多酚溶液中的比例将固定化多酚氧化酶加入到茶多酚溶液中，在50～60℃下搅拌反应60～80分钟，得到茶黄素溶液；4)分离将茶黄素溶液中的固定化酶从溶液中分离回收，回收到的固定化酶可反复使用；5)茶黄素的萃取茶黄素溶液用纯化剂萃取，萃取体积比为茶黄素溶液∶纯化剂＝1∶1～10，收集纯化剂，纯化剂1为乙酸乙脂或乙醇；6)浓缩将上述纯化剂浓缩到膏状；7)干燥将膏状物置于真空干燥箱干燥到粉状，干燥条件为45～60℃，真空度大于0.05Mpa。
全文摘要
本发明公开了一种固定化多酚氧化酶催化高纯度茶多酚生产高纯度茶黄素的方法。包括将多酚氧化酶用包埋材料进行固定化，固定化的多酚氧化酶在一定的反应条件下，使高纯度的茶多酚氧化聚合生成高纯度的茶黄素，然后将茶黄素溶液用溶剂萃取，浓缩干燥，得到茶黄素含量75％以上的高纯度茶黄素产品。本发明工艺步骤简单，设备投入少，既可以降低生产成本，由于多酚氧化酶得到固定化，因此酶促反应又可以连续化，可根据需要控制茶多酚的氧化程度和产品质量，尤其避免使用多种酸和碱等化学试剂，是一种较环境的生产方法。
文档编号C12P17/02GK1403580SQ0213698
公开日2003年3月19日 申请日期2002年9月10日 优先权日2002年9月10日
发明者屠幼英, 夏会龙 申请人:浙江大学