专利名称：检疫性实蝇快速鉴定系统及其采用的基因芯片的制作方法
技术领域：
本发明是关于一种检疫性实蝇快速鉴定系统，特别是关于一种采用了基因芯片技术的检疫性实蝇快速鉴定系统。
背景技术：
出入境的货物要随机选取部分样本进行检验检疫，以确定其中是否含有不允许出入境的病毒、害虫、杂草等等检疫性物种。按照传统的检疫手段，有时需要2-3周的时间才能将所查获的昆虫种类鉴定到种级水平，但是对于一些季节性的或者容易变质的果蔬，这段等待检疫出关的时间往往就造成了果蔬不能及时上市而使货物贬值或者果蔬完全腐烂变质。
比如实蝇是危害水果和蔬菜的重要害虫类群，其不仅给当地果蔬生产造成严重损失，而且还将严重影响国家间的贸易。实蝇在检疫上具有重要地位，倍受世界各国高度关注。其许多种类(2属以及7种)被列入我国现行的“进境植物检疫危险性病、虫、杂草名录”，确定为一类或二类检疫危险性害虫。
实蝇主要以幼虫随寄主果实进行远距离传播，在检验检疫过程中，截获的往往是实蝇的幼虫，由于传统的实蝇鉴定主要依赖于成虫的外部形态特征，因此，在实际检验检疫鉴定工作中，常要将截获的实蝇幼虫培养，直到羽化出成虫后才能作进行准确鉴定。此过程一般需耗时2-3周，这势必影响进出境果蔬的验放速度，与果蔬贸易的快速发展极不相称。此外，在我国加入世界贸易组织(WTO)后的新形势下，随着人流和物流的迅速发展，实蝇随果蔬流而传入我国的机会将增大。因此，如何快速鉴定实蝇种类，及时采取相应的检疫措施，以阻断外来危险性实蝇的入侵，保护我国农业生产和经济发展的安全，是检验检疫人员面临的一个重大课题。
由于实蝇对农业生产和农产品贸易的影响巨大，围绕实蝇，尤其是地中海实蝇，开展的研究也比较多，这些研究涉及实蝇的形态分类、生物学、生态学、监测、防治和入侵后的根除措施等，近十几年来，大量研究集中在分子生物学领域。
在国外，自Berloche(1980)探讨同功酶技术应用于实蝇幼虫鉴定以来，不少学者针对实蝇尤其是地中海实蝇开展了系列的研究。所用的方法包括等位基因同功酶、限制性酶切片段长度多态性(RFLP)，微卫星技术，DNA指纹谱，随机扩增DNA多态性(RAPD)等。其中，主要的研究有McPharon等(1992)已对世界上一百多个野生种群3000多个体的地中海实蝇线粒体进行了检测，建立了相关的数据库，并获得了限制性酶切线粒体DNA图谱。新西兰Armstrong(1999)、Cameron 1999分别测定了桔小实蝇的ITS1部分序列。Han和McPheron等(1997)利用16S部分序列研究了实蝇科和饶实蝇属的系统发育。Fronhlich等(1993)Matioli等(1993)，Haymer等(1994)、McPheron等(1994)先后对地中海实蝇线粒体DNA(mtDNA)在种群间的变化进行了研究报道。Haymer等(1994)应用RAPD技术成功鉴定了地中海实蝇不同地理种群间的DNA多态性。Wang等(2001)用微卫星技术研究了发生在澳大利亚的2个近似种(昆士兰实蝇和东昆士兰实蝇)间的基因流关系。Douglas等(2001)对地中海实蝇和纳塔尔实蝇核醣体ITS1多态性进行了研究，近年来，Muraji-Nakahara(2001～2004)和Smith等(2003)分别对寡毛实蝇和绕实蝇属种类的种间系统发育关系进行了研究探讨。Naeole等(2005)利用寡核苷酸对桔小实蝇复合的分子分类进行了研究。McCombs等(2005)美国农业部检疫部门的技术人员利用RFLP等方法对经济重要实蝇种类进行了分子诊断研究。
陈辉等(1994)、宁红等(2002)对分子生物学技术在检疫性有害生物诊断中的应用进行了综述。陈乃中等(1997)、安榆林等(1997)、邱一中等(2000)对部分检疫害虫的RAPD方法进行了报道。李志红(2002)对国内外分子生物学技术在桔小实蝇中的应用进展进行了综述性报道。朱振华等(2005)对6种实蝇的Cytb基因进行了研究，但没有具体鉴定方法。
在截获检疫性实蝇的快速鉴定方面，仅见于Armstrong等(1997)针对新西兰水果检疫要求报道了几种实蝇的RFLP鉴定方法，且文中未能将10种寡毛实蝇中的6种区分开来(分归3组)，吴佳教等(2005，2005)利用RFLP技术分别对6种和9种检疫性实蝇进行了区分，但一些复合种还无法分开。余道坚等(2004)利用种类特异引物鉴定了番石榴实蝇，D.J.Yu等(2004)利用实时PCR技术鉴定了辣椒实蝇，Dao-jian Yu等(2005)鉴定了芒果实蝇，余道坚(2005)在其博士论文中分别对十几种检疫性实蝇设计了种类特异性引物通过普通PCR技术或实时荧光PCR技术实现检疫性实蝇种类的分子鉴定，但诚如余道坚(2005)所指出，由于验证的实蝇种类有限，上述种类特异性引物的可靠性有待进一步实践检验。实蝇种类特异引物PCR鉴定的另一致命弱点在于要鉴定一个实蝇种类必须用已设计的十几个种类引物分别进行十几次PCR检测才能鉴定出虫种，如果目标种不包括在上述十几个种类之内则无法鉴定出来，或鉴定结果不可靠，这在检疫实践中是不可想象的。
分子生物学是近几十年来发展起来的一门崭新学科，具有特异性强、灵敏度高、快速安全及可行度高(可直接对任何动植物，甚至很微量的材料进行检测)等特点，其在植物检疫中的应用具有现实意义和广阔前景。基因芯片是90年代中期发展起来的一项前沿生物技术，它融合了生命科学、化学、微电子技术、计算机科学、统计学和生命信息学等多种学科的最新技术。基因芯片的创意来自于计算机芯片。它和计算机芯片一样，具有超微化、高度集成、信息贮存量大等特点，所不同的是，计算机芯片采用的是半导体集成电路，而基因芯片是以DNA序列片段作为“探针”进行工作。所谓“探针”，是利用碱基配对的原理检测基因的一种技术。以前的基因检测技术一次只能找到一种基因。而基因芯片突出的优点是其高通量特点，人们能在庞大的基因库中，一次发现众多的能代表昆虫种类的特异性序列片段，从而实现快速多样化检测。
基因芯片技术目前已被运用在医学上进行癌症等疾病的快速诊断，但基因芯片技术用于昆虫种类的快速鉴定目前尚属空白。若通过基因芯片技术将“实蝇检疫黑名单”上所有实蝇种类的特异鉴定探针集成在一张芯片上，只要通过一次检测就可以将“黑名单”上的实蝇种类非成虫虫态鉴定到种级水平。
因此，提供一种能够对各种实蝇进行快速有效鉴定的基因芯片以及检疫性实蝇快速鉴定系统成为业界急需解决的课题。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种能够快速有效的鉴定出目标实蝇是否为不允许出入境的实蝇中的一种的基因芯片以及检疫性实蝇快速鉴定系统。
本发明的一种技术方案是提供一种基因芯片，用于检疫性实蝇快速鉴定系统，该基因芯片包括载体以及在载体上形成的若干鉴定探针，其中，至少一个鉴定探针的特异DNA序列片段是选自下述特异DNA序列片段组TCTTACTGCACGACTTCTA；TCTTACTGCACTACTTCTA；AAATGATGGTTTCCGTTTA；TCCTTCTCTCACACTCTTA；TACTGCTCTTTTATTGCTT；TTCTGTAATCGCCCATGGA；TTCTGTAATCGCCCATGGG；cTTTATTTGTCTGAGCTGTAg；GCGATCAACTGGAATTTCA；tATACGATCAGTTGGAATTA；AGACCCAATCTTATACCAA；AGACCCAATCTTATACCAG；ATCATTCTTCGATCCAGCT；AGGAGCCTCTGTTGATTTA；GCTTTAATTAGTGATGATC；AGGGCATCCTGGAGCGTTA；CACAGGACTGGTACTAAAT；CTTTGACCCGGCCGGAGG；TCTATCCCTCCCAGTTCTA；CTTCACTTCTGCAACTATA；AGTTCGTGCAGAGCTAGGT；TGATACCCGCTATTTACAG；TGTACCTACCGGTATCAAA；AGGAATACCCCGGCGTTAT；CCCCTAATACTGGGAGCTC；TCTCGCTAACTCGTCTGTA；
ACTCTTACTGTCACTACCA；AGTCTAATTACACAGCGAC；cATGAAATGTGGTATCTACTa；ctATTCTTCTTGTTCATCATT；GAGTAACTAGCAGAACTAA；gATTTATTGTGTGAGCTCATc；TCCTCTTATGGAACAACTT；TTATTATCATGTTTATCGG；GGAAAGAAGAAAACATTTGg；TCTTCACGGCACACAGTTA；CCCTTCTCTCACTCTATTG；TGGAATAATCTCTCACATT；TGGTATAATCTCTCACATT；TGAACTAACCATAGACGGA；TTTCACTTCGGCTACAATA；CGCGTAGTCCTGCCCATAA；CCCACCACATGTTTACAGT；CGAGTCATCCTGCCTATAA；ACCAGCCATCGTACTACTA；AATGAACTTCCTACTGACG；ATTACCTCCCTCTCTTACA；ATCAATTATCGCTCATGGT；ACAGCTCTTCTTTTACTTC；ATTGGGTTACTTGGGTTTA；CCGAGTGATCCTACCTATA；CGAGTGATCCTACCTATAA；ATCCTACCACTAAACTCAC；AGCAATCGGCTTACTGGGA；ACTCCCATCACTTCGCCTA。
上述特异DNA序列片段组中的各个特异DNA序列片段可以分成第一探针组、第二探针组、第三探针组，其中第一探针组中包含24种实蝇的第一探针，第二探针组中包含部分实蝇的第二探针，第三探针组包含更少部分实蝇的第三探针。基因芯片的鉴定探针可以是第一探针组和/或第二探针组和/或第三探针组中的至少一个。
基因芯片的载体可以是玻片、硅片、聚丙烯膜、硝酸纤维素膜、尼龙膜等，探针在载体上呈矩阵排列。
鉴定探针包括但不限制在上述列出的特异DNA序列片段范围内。鉴定探针可以在上述范围内任意选择组合，还可以进一步包括上述范围外的其它特异DNA序列片段。一般地基因芯片应包括上述特异DNA序列片段中的十个以上片段形成的鉴定探针。优选的是包括上述的全部特异DNA序列片段。
每种实蝇对应鉴定探针选用的DNA序列片段是由若干种实蝇的基因序列两两相对比得出的特异DNA序列片段，特异DNA序列片段是分别与每种实蝇一一对应的DNA序列片段，每种特异DNA序列片段是分别从每种实蝇的基因序列中选出的每种实蝇独有而其它种实蝇没有的且能够从所有种的实蝇中将每种实蝇区别出来而不会产生混淆的DNA序列片段。
一种方式是基因芯片的鉴定探针分为若干组，每组鉴定探针为对应同一种实蝇的特异DNA序列片段，其中每组包括至少一个鉴定探针。优选的是每组探针包括三到十个鉴定探针。
另一种方式是基因芯片的鉴定探针分为若干组，其中每种实蝇对应探针中的一组或者一组以上的鉴定探针，且一组或者一组以上的鉴定探针分别对应该种实蝇的不同部位的DNA序列片段。具体是的至少一种实蝇在基因芯片上有两组或者两组以上的鉴定探针与其对应，且两组或者两组以上的探针分别对应该种实蝇的线粒体DNA序列片段、核DNA序列片段、或者其它DNA序列片段。
其中，探针在载体上呈矩阵分布。基因芯片进一步设有若干个芯片阳性对照探针、实验阳性对照探针、实验阴性对照探针。
本发明的另一种方案是提供一种检疫性实蝇快速鉴定系统，其采用本发明的基因芯片，其包括DNA模板提取设备、DNA模板与基因芯片的杂交设备、杂交后的结果判读设备。
进一步，该系统还包括PCR扩增设备、荧光标记设备、以及扫描设备。其中，上述设备是位置分散的组成一个有机的系统、或者整体集成在一个装置中、或者任意的部分设备集成在一个装置中。
本发明的基因芯片以及检疫性实蝇快速鉴定系统可以进一步扩展应用于鉴定其它的病毒、昆虫、杂草等等。
本发明的有益效果是利用本发明的基因芯片一次检测可相当于过去传统RAPD、RFLP、种类特异引物PCR鉴定、实时PCR鉴定等方法十几次或数十次的工作量，效率极大提高，真正达到快速(12小时内出结果)、准确(种级水平)、多虫种(凡经济重要、截获率高的数十种类)鉴定的目的。从而可以解决长期以来依赖成虫形态学鉴定实蝇而导致的鉴定时滞问题，实现利用检验检疫截获的少量实蝇材料便可达到快速准确鉴定实蝇种类的目的。本发明的检疫性实蝇快速鉴定系统可在检验检疫系统内推广应用，不仅有助于加快通关速度，而且有助于提高对危险性实蝇检出率。检出率的提高，不但可以提高外来危险性实蝇入侵预警能力，同时还可为决策部门采取相关的调控手段提供科学依据。这对保护我国农业生产安全、促进我国果蔬出口创汇和果蔬产业可持续发展具有重要意义。
以下结合附图和实施例，来进一步说明本发明，但本发明不局限于这些实施例，任何在本发明基本精神上的改进或替代，仍属于本发明权利要求书中所要求保护的范围。
图1是本发明的检疫性实蝇快速鉴定系统的示意图。
图2是本发明的基因芯片的示意图。
图3是本发明的扫描设备扫描的基因芯片与PCR扩增产物杂交后的图形示意图。
具体实施例方式
实施例1本发明的检疫性实蝇快速鉴定系统用于鉴定“实蝇检疫黑名单”中的危害果蔬的实蝇科的约30种实蝇，主要包括一.腊实蝇属的地中海实蝇、非洲芒果实蝇、纳塔尔实蝇。二.绕实蝇属的苹果实蝇、西部樱桃实蝇、黑樱桃实蝇。三.按实蝇属的南美按实蝇、墨西哥按实蝇、西印度按实蝇、加勒比按实蝇。四.离腹寡毛实蝇属Afrodacus亚属的扎维斯实蝇；Austrodacus亚属的黄瓜实蝇；Bactrocera亚属的浦桃实蝇、番石榴实蝇、辣椒实蝇、大洋洲实蝇、桃实蝇、桔小实蝇复合种、桔小实蝇、杨桃实蝇、芒果实蝇、木瓜实蝇、菲律宾实蝇、油榄实蝇；Gymnodacus亚属的艳实蝇；Paradacus亚属的日本南瓜实蝇；Paratridacus亚属的平展实蝇；Zeugodacus亚属的瓜实蝇、南瓜实蝇、具条实蝇。五.合腹寡毛实蝇属的实蝇。六.大实蝇属的蜜柑大实蝇。以及其它的按实蝇属、果实蝇属(非中国广布种)、欧非枣实蝇、枣实蝇、地中海实蝇及其近缘种、寡鬃实蝇属(非中国种)、甜瓜迷实蝇、绕实蝇属(非中国种)、弯尾托实蝇等等。
本发明的检疫性实蝇快速鉴定系统包括DNA模板提取设备10、PCR扩增设备20、荧光标记设备25、基因芯片30、杂交设备40、扫描设备50、以及结果判读设备60。这些设备分散的构成一个有机的系统。
DNA模板提取设备10用于获得目标物种的DNA模板，在该实施例中即为各种实蝇的DNA模板，具体是先将目标物种的生物体组织粉碎，然后在离心管内与蛋白酶等物质混合，经过温育消化蛋白质等，再经过离心设备的离心处理以形成DNA模板。为了获得更纯的DNA模板可以进行多次清洗和离心处理。
PCR扩增设备20用于将目标实蝇DNA片段进行扩增以便于提供充足的目标DNA片段的PCR产物与基因芯片进行杂交反应，比如采用PCR扩增仪，PCR扩增的原理是聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction，简称PCR)，可在离心管内将目标实蝇的DNA片段于数小时内扩增至十万乃至百万倍，可从少量DNA片段扩增出足量的DNA以供分析研究和检测鉴定。具体条件包括DNA模板、寡核苷酸引物、DNA聚合酶、合适的缓冲体系、DNA变性、复性及延伸的温度与时间等等。
荧光标记设备25用以将PCR扩增产物进行荧光标记处理以便于根据荧光信号强度判断接下来的杂交信号强度进而判断目标实蝇的种类。
基因芯片30，包括一载体310以及在载体上形成的若干个呈矩阵排列的探针，载体可以是玻片、硅片、聚丙烯膜、硝酸纤维素膜、尼龙膜等。探针分为两种，一种是少量的用于对照的若干个芯片阳性对照探针335、实验阳性对照探针336(为酵母Y5基因)、实验阴性对照探针337(探针为水溶液)；一种是大量的用于鉴定目标实蝇的鉴定探针333。鉴定探针333又分为若干组，每组对应一种实蝇且每组的各个探针分别为同一种对应实蝇的特异DNA序列片段。该特异DNA序列片段可以与对应的目标实蝇发生碱基配对反应。特异DNA序列片段是在对应的实蝇基因序列中通过生物学信息分析选出的并经过反复验证确定的，该特异DNA序列片段是该种实蝇独有而其它种实蝇没有的且能够从所有种的实蝇中将该种实蝇区别出来而不会产生混淆的DNA序列片段。
特异DNA序列片段的制备可以通过多种途径实现，在本实施例中采用如下步骤1、下载NCBI中实蝇科所有的核酸序列(3279条)，解析整理，入数据库，此外也可以部分采用客户自己测序的实蝇核酸序列。2、使用三对通用引物来扩增COI和COII基因(线粒体细胞色素氧化酶I、II)，分别简称为DQ、Uea和COII。基因COI和COII在基因组上的位置是相邻的，共约2400bp长。通用引物DQ大致覆盖50-700位置，扩增COI前半部分；通用引物Uea大致覆盖900-1600，扩增COI后半部分；通用引物COII大致覆盖1600-2350，扩增COII基因。3、从数据库获取所有序列对应于三对通用引物的PCR产物序列，得到三个序列集合，三者相互独立。以下的步骤是针对每一个序列集合。4、对序列集合按种分组，对于属于指定种的组，做组内全局联配，根据联配结果，得到一条能代表组内全部信息的特征序列。5、计算机根据联配结果判断每一条特征序列的特征SNP位点，这些位点既能代表此种的共性，又能区别于其他种。6、在特征SNP位点设计探针，筛选出符合芯片实验要求的特异性探针。7、采用特异性检验算法，全面评估所有探针，分三级给出最终探针，并对探针做修饰以调整Tm值等。
在本实施例中鉴定探针333共分为24组，也就是说24组鉴定探针分别对应24种实蝇的各自的特异DNA序列片段。因此该基因芯片30可以用于鉴定24种不同的实蝇。其中每组鉴定探针333包括3～10个探针，本实施例中采用每组3个探针，而且每组的3个探针均采用的是表1中所示的每种实蝇的“第一探针”，对于个别种类可以选用“第一探针1”或者“第一探针2”。这些特异DNA序列片段可以是寡核苷酸或短肽，可以采用原位合成法或者合成点样法将这些特异DNA序列片段固定在载体上以形成探针。
表1 24种实蝇的鉴定探针对应的特异DNA序列片段列表
杂交设备40用于将PCR扩增产物与基因芯片30进行杂交处理的，比如采用杂交仪，其原理是将基因芯片30与PCR扩增产物接触，PCR扩增产物将会与基因芯片30上对应的特异DNA序列片段发生碱基配对反应，比如地中海实蝇的PCR扩增产物仅会与基因芯片上设置的地中海实蝇探针的特异DNA序列片段发生碱基配对反应，而不会与其它种的实蝇探针发生反应，再经过清洗后，发生碱基配对反应的探针上留下了具有荧光标记的PCR扩增产物，而未发生碱基配对反应的探针上没有留下荧光标记的PCR扩增产物。因此，只要确定了哪些探针上具有荧光就可以断定哪些探针发生了碱基配对反应，也就可以确定目标实蝇与哪些探针上的特异DNA序列片段一致，也就是说可以确定目标实蝇就是该探针所对应的实蝇种类。
扫描设备50用于扫描杂交后的基因芯片30以获得基因芯片30的数字图像，以便清晰的显示基因芯片30发生的杂交状况。
结果判读设备60用于根据扫描结果分析判定目标实蝇的种类，结果判读设备可以是微型处理器、电脑、或者其它信息处理设备。其将扫描后的数字图像与数据库中存储的信息相比较，根据具有荧光的探针的位置以及该位置探针所对应的特异DNA序列片段的种类确定目标实蝇的种类。
实施例2作为本发明的另一种实施方式，可以是至少有一种实蝇在基因芯片30上有多组鉴定探针333与其相对应，每组鉴定探针333的特异DNA序列片段分别取自该种实蝇的不同部位，比如线粒体DNA序列片段、核DNA序列片段、或者其它DNA序列片段。比如，如表1所示，黑樱桃实蝇可以在基因芯片30有三组鉴定探针333与其对应，分别为“第一探针ATCATTCTTCGATCCAGCT”组、“第二探针AGGAGCCTCTGTTGATTTA”组和“第三探针GCTTTAATTAGTGATGATC”组，而且每组鉴定探针333可以为1～100个探针，优选的是10个以下，最佳方案是3～5个。对于有些种类可以根据需要选择采用“第二探针1”或“第二探针2”，以及“第三探针1”或“第三探针2”。
本发明的基因芯片以及检疫性实蝇快速鉴定系统可以进一步扩展应用于鉴定其它的病毒、昆虫、杂草等等。
实施例3根据检疫的需要，基因芯片上可以设置不同检疫物种的多种类型的探针，比如可以将多种昆虫、病毒、细菌、杂草的探针设置在同一基因芯片上。通过上述基因芯片，能将芯片上所包含的检疫性物种一次性鉴定出来。
可以采用荧光标记方法以外的其它方法进行显色和分析测定，比如质谱法、化学发光法、光导纤维法等等。
基因芯片的鉴定探针可以为至少1组，每组探针可以为至少1个，根据需要鉴定探针可以设为20组、40组、50组或者任意组。可以是一种检疫性物种的对应探针采用一组，而另一种检疫性物种的对应探针采用多组。
基因芯片上的各种对照探针可以选择使用。
基因芯片上的探针可以任意的方式分布。
其中，设备还可以是整体集成在一个装置中或者将任意部分设备集成在一个装置中。
权利要求
1.一种用于检疫性实蝇快速鉴定系统的基因芯片，该基因芯片包括载体以及在载体上形成的三个或者三个以上的鉴定探针，其中，至少一个鉴定探针的特异DNA序列片段是选自下述特异DNA序列片段组TCTTACTGCACGACTTCTA；TCTTACTGCACTACTTCTA；AAATGATGGTTTCCGTTTA；TCCTTCTCTCACACTCTTA；TACTGCTCTTTTATTGCTT；TTCTGTAATCGCCCATGGA；TTCTGTAATCGCCCATGGG；cTTTATTTGTCTGAGCTGTAg；GCGATCAACTGGAATTTCA；tATACGATCAGTTGGAATTA；AGACCCAATCTTATACCAA；AGACCCAATCTTATACCAG；ATCATTCTTCGATCCAGCT；AGGAGCCTCTGTTGATTTA；GCTTTAATTAGTGATGATC；AGGGCATCCTGGAGCGTTA；CACAGGACTGGTACTAAAT；CTTTGACCCGGCCGGAGG；TCTATCCCTCCCAGTTCTA；CTTCACTTCTGCAACTATA；AGTTCGTGCAGAGCTAGGT；TGATACCCGCTATTTACAG；TGTACCTACCGGTATCAAA；AGGAATACCCCGGCGTTAT；CCCCTAATACTGGGAGCTC；TCTCGCTAACTCGTCTGTA；ACTCTTACTGTCACTACCA；AGTCTAATTACACAGCGAC；cATGAAATGTGGTATCTACTa；ctATTCTTCTTGTTCATCATT；GAGTAACTAGCAGAACTAA；gATTTATTGTGTGAGCTCATc；TCCTCTTATGGAACAACTT；TTATTATCATGTTTATCGG；GGAAAGAAGAAAACATTTGg；TCTTCACGGCACACAGTTA；CCCTTCTCTCACTCTATTG；TGGAATAATCTCTCACATT；TGGTATAATCTCTCACATT；TGAACTAACCATAGACGGA；TTTCACTTCGGCTACAATA；CGCGTAGTCCTGCCCATAA；CCCACCACATGTTTACAGT；CGAGTCATCCTGCCTATAA；ACCAGCCATCGTACTACTA；AATGAACTTCCTACTGACG；ATTACCTCCCTCTCTTACA；ATCAATTATCGCTCATGGT；ACAGCTCTTCTTTTACTTC；ATTGGGTTACTTGGGTTTA；CCGAGTGATCCTACCTATA；CGAGTGATCCTACCTATAA；ATCCTACCACTAAACTCAC；AGCAATCGGCTTACTGGGA；ACTCCCATCACTTCGCCTA。
2.如权利要求1所述的基因芯片，其特征在于，所述基因芯片包括由所述特异DNA序列片段组中的任意十个以上的特异DNA序列片段对应形成的鉴定探针。
3.如权利要求1所述的基因芯片，其特征在于，所述特异DNA序列片段是分别与每种实蝇一一对应的DNA序列片段，每种特异DNA序列片段是分别从每种实蝇的DNA序列中选出的每种实蝇独有而其它种实蝇没有的且能够从所有种的实蝇中将每种实蝇区别出来而不会产生混淆的DNA序列片段。
4.如权利要求1所述的基因芯片，其特征在于，所述基因芯片的鉴定探针分为若干组，每组鉴定探针对应同一种实蝇的特异DNA序列片段，其中每组包括至少一个鉴定探针。
5.如权利要求4所述的基因芯片，其特征在于，所述每组鉴定探针包括三到十个鉴定探针。
6.如权利要求1所述的基因芯片，其特征在于，所述基因芯片的鉴定探针分为若干组，其中每种实蝇对应所述鉴定探针中的一组或者一组以上的鉴定探针，且所述一组或者一组以上的鉴定探针分别对应该种实蝇的不同部位的DNA序列片段。
7.如权利要求6所述的基因芯片，其特征在于，至少一种实蝇在所述基因芯片上有两组或者两组以上的鉴定探针与其对应，且所述两组或者两组以上的鉴定探针分别对应该种实蝇的线粒体DNA序列片段、核DNA序列片段或者其它DNA序列片段。
8.一种检疫性实蝇快速鉴定系统，其特征在于，其采用了权利要求1～7之一所述的基因芯片，其包括DNA模板提取设备以及DNA模板与基因芯片的杂交设备。
9.如权利要求8所述的检疫性实蝇快速鉴定系统，其特征在于，进一步包括PCR扩增设备、荧光标记设备、扫描设备以及杂交后的结果判读设备。
10.如权利要求9所述的检疫性实蝇快速鉴定系统，其特征在于，所述DNA模板提取设备、所述杂交设备、所述PCR扩增设备、所述荧光标记设备、所述扫描设备以及所述结果判读设备是位置分散的组成一个有机的系统、或者整体集成在一个装置中、或者任意的部分设备集成在一个装置中。
全文摘要
本发明揭示了一种检疫性实蝇快速鉴定系统及其采用的基因探针和基因芯片，该系统包括DNA模板提取设备、PCR扩增设备、PCR扩增产物与基因芯片杂交设备、荧光标记设备、扫描设备、以及杂交后的结果判读设备。上述设备分散的组成一个有机的系统。可以对检疫性实蝇进行快速准确的分子鉴定。
文档编号C12M1/00GK101045940SQ200610034780
公开日2007年10月3日 申请日期2006年3月31日 优先权日2006年3月31日
发明者王建国, 胡学难, 梁帆, 莫仁浩, 刘志文, 吴佳教, 梁广勤, 赵菊鹏, 梁广文, 苏芳, 谭惠如 申请人:广东出入境检验检疫局检验检疫技术中心