用于去污的酰基转移酶的制作方法

专利名称：用于去污的酰基转移酶的制作方法
用于去污的酰基转移酶
本申请要求2006年12月9日提交的目前在审的美国临时专利申请序列号 60/748,782的优先权。本申请也是2006年5月30日提交的目前在审的美国临时专利申 请序列号10/581,014的部分继续申请，该部分继续申请在35U.S.C. § 371下要求对2004 年12月3日提交的WO 05/056782的优先权，WO 05/056782在35U.S.C. § 119下要求对 2004年12月3日提交的目前被放弃的美国临时专利申请序列号60/526,724的优先权。技 术领域本发明提供了有效产生过乙酸用于去污应用的酶系统。在优选的实施方式中， 本发明提供了包括酯底物、过氧化氢和至少一种酰基转移酶的系统。在一些特别优选的 实施方式中，该系统进一步包括至少一种表面活性剂。在可选的优选实施方式中，本发 明提供了至少一种野生型和/或变异的酰基转移酶。本发明在涉及广泛的化学和生物学 战争材料的去污中以及对普通表面清洁和去污特别有用。
背景技术：
过乙酸作为去污剂/消毒剂被广泛认可。然而，它是一种化学品，具有与应用 化学试剂有关的所有问题。首先，它随时间和在高温下降解。此外，对于大表面积的清 洁/去污，需要大体积的液体化学品。而且，由于它对油罐车的腐蚀作用，其不能被容 易地运输。此外，它具有大的化学足迹(chemical footprint)。因此，所需要的是过乙酸 生成系统，其解决这些储存和运输问题，在宽范围的温度下具有活性和具有小的化学足 迹。发明概述本发明提供了在水溶液中有效产生过乙酸用于去污应用的酶系统。在优选的实 施方式中，本发明提供了包括酯底物、过氧化氢和至少一种酰基转移酶的系统。然而， 本发明不意图限制于过乙酸，因为任何过酸(例如，过壬酸以及由长链脂肪酸C10-C18 或更长链的脂肪酸制成的过酸)在本发明中都有用。此外，由短链脂肪酸制成的过酸在 本发明中有用。实际上，许多过酸在本发明中有用。在一些实施方式中，本发明提供了 具有形成过氧化氢的另外的酶的酶系统。在一些另外的实施方式中，本发明提供了含有 产生过氧化氢的另外的化合物的酶系统，包括但不限于这样的化合物如过碳酸钠、葡萄 糖氧化酶、尿素和多种其它化合物，包括但不限于在美国专利申请序列号10/581,014中 描述的那些化合物。在一些优选的实施方式中，酯底物是稳定的醇酯(alcohol ester)，尽 管本发明不意图于被限制为任何特定的酯底物(一种或多种)。在一些特别优选的实施方 式中，本发明提供了在水溶液(例如，大约90%以上的水，虽然本发明不意图限制于任 何特定的水百分比)中进行酶辅助的过水解的系统，所述系统包含至少一种酯和至少一 种过氧化物。实际上，考虑本发明在多种含水系统中有用，包括具有高百分比水的那些 含水系统(例如，大约85%以上、大约95%以上或大约95%以上的水)，以及具有较低 百分比的水的那些含水系统(例如，大约85%以下)。在一些其它特别优选的实施方式中，该系统还包括至少一种表面活性剂。因 此，在一些实施方式中，该系统在缓冲液中包括至少一种酶、至少一种过氧化氢源和至 少一种酯底物。在又一些实施方式中，该系统也包括至少一种洗涤剂，而在还有其它的 实施方式中，该系统也包括至少一种表面活性剂。因此，多种配制物被考虑用在本发明中。此外，在一些实施方式中，本发明的配制物的pH是中性的，但在一些特别优选的实 施方式中，酶系统在碱性和略酸性环境中也起作用(例如，pH从大约6至大约10)。考虑本发明的酶系统在多种形式下都有用，包括液体、颗粒、泡沫、乳液等， 它们被设计成适于随时需求。实际上，本发明不意图限制于任何特定形式。在还有其它 实施方式中，本发明的酰基转移酶系统与另外的酶联合应用，包括但不限于蛋白酶、淀 粉酶、纤维素酶等。在可选的优选实施方式中，本发明提供了至少一种野生型和/或变异的酰基转 移酶。在一些优选的实施方式中，该酶(一种或多种)也具有脂肪酶活性。本发明在涉 及宽范围的化学和生物学战争材料的去污中以及对普通表面清洁和去污特别有用。
在一些实施方式中，本发明在被多种有毒的和/或病原体污染的材料的去污中 有用，所述有毒的和/或病原体包括但不限于毒性化学品、芥子气、VX、炭疽芽孢杆菌 (B.andiracis)孢子、鼠疫耶氏菌(Y.pestis)、土拉热弗朗西斯菌(F.tularensis)、真菌和毒 素(例如，肉毒杆菌毒素、蓖麻毒蛋白、真菌毒素等)，以及感染了感染性病毒体(例 如，黄病毒(flavivirases)、正粘病毒(orthomyxoviruses)、 .1J 粘病毒(paramyxoviruses)、 夕少粒病毒(arenaviruses)、^单状病毒(rhabdovirases)、虫媒病毒(arboviruses)、肠病毒 (enteroviruses) >布尼病毒(bunyaviruses)等)的细胞。在一些特别优选的实施方式中， 本发明提供了能够在宽的温度范围(例如，大约16°C至大约60°C )下起作用的系统。在 还有其它优选的实施方式中，该系统提供了小的化学足迹并且在短期和/或长期储存期 间是稳定的。实际上，本发明的系统意图用于多种应用中。在再进一步的实施方式中，本发明在食品和/或饲料的去污中有用，其包括但 不限于蔬菜、水果和其它食品和/或饲料。实际上，考虑本发明在水果、蔬菜、蛋、肉 等的表面清洁中有用。实际上，本发明意图用于食品和/或饲料工业以便去除来自多种 食品和/或饲料品的污染。在一些特别优选的实施方式中，食品和药品管理局(Foodand Drag Administration)和/或其它食品安全机构提出的食品和/或饲料的去污方法，如本领 域技术人员已知的方法，在本发明中有用。如本文所示，本发明提供了用于在水溶液中产生过酸的酶系统，其适用于去 污。在一些实施方式中，系统包括至少一种酯底物、至少一种过氧化氢源和至少一种酰 基转移酶。在一些优选实施方式中，过酸选自过乙酸、过壬酸、过丙酸、过丁酸、过戊 酸、过己酸、由长链脂肪酸制成的过酸和由短链脂肪酸制成的过酸。在一些可选的优选 实施方式中，系统进一步包括至少一种化学过氧化氢产生系统，其中所述化学过氧化氢 产生系统包括选自过碳酸钠、过硼酸盐和过氧化氢脲的至少一种化学品。在一些实施方 式中，系统进一步包括选自氧化酶及其相应的底物的至少一种酶促过氧化氢产生系统。 在一些另外优选的实施方式中，系统进一步包括至少一种酶促过氧化氢产生系统，其中 所述酶促过氧化氢产生系统包括至少一种酶，选自葡萄糖氧化酶、山梨醇氧化酶、己 糖氧化酶、胆碱氧化酶、醇氧化酶、甘油氧化酶、胆固醇氧化酶、吡喃糖氧化酶、羧基 醇氧化酶、L-氨基酸氧化酶、甘氨酸氧化酶、丙酮酸氧化酶、谷氨酸氧化酶、肌氨酸氧 化酶、赖氨酸氧化酶、乳酸氧化酶、香草基氧化酶、乙醇酸氧化酶、半乳糖氧化酶、尿 酸氧化酶、草酸氧化酶、黄嘌呤氧化酶，并且其中所述酶促过氧化氢产生系统还包括所 述至少一种酶的至少一种合适的底物。在一些还有其它的实施方式中，系统进一步包括至少一种另外的酶。在一些优选的实施方式中，该至少一种另外的酶选自蛋白酶、纤 维素酶、淀粉酶和微生物细胞壁降解酶。在一些进一步的实施方式中，至少一种酯底物 是醇酯。在一些还有其它的实施方式中，系统还包括至少一种表面活性剂。在一些优 选实施方式中，系统还包括至少一种洗涤剂。在一些另外的实施方式中，系统是选自液 体、颗粒、泡沫和溶液的形式。
本发明也提供了用于去污的方法，其包括以下步骤提供需要去污的物品，和 至少一种在水溶液中产生过酸的适用于去污的系统；和在所述物品被去污的条件下将所 述物品暴露于所述系统。在一些实施方式中，暴露包括在碱性或酸性PH条件下将所述 物品暴露于所述系统。在一些可选的实施方式中，暴露包括在中性PH条件下将所述物 品暴露于所述系统。在一些进一步的实施方式中，暴露包括在高温下暴露所述物品。在 一些优选实施方式中，高温是大约60°C或更高。然而，本发明不意图被限制于任何特 定的温度，因为各种温度在本发明方法中都有用。在一些实施方式中，系统是选自液 体、颗粒、泡沫和乳液的形式。在一些再进一步的优选实施方式中，系统包括至少一种 酯底物、至少一种过氧化氢源和至少一种酰基转移酶。在一些特别优选的实施方式中， 过酸选自过乙酸、过壬酸、过丙酸、过丁酸、过戊酸、过己酸、由长链脂肪酸制成的过 酸和由短链脂肪酸制成的过酸。在一些可选的优选实施方式中，方法进一步包括至少一 种化学过氧化氢产生系统，选自过碳酸钠、过硼酸盐和过氧化氢脲。在一些其它可选的 实施方式中，方法进一步包括选自氧化酶及其相应的底物的至少一种酶促过氧化氢产生 系统。在一些特别优选的实施方式中，系统进一步包括至少一种酶促过氧化氢产生系 统，选自葡萄糖氧化酶、山梨醇氧化酶、己糖氧化酶、胆碱氧化酶、醇氧化酶、甘油 氧化酶、胆固醇氧化酶、吡喃糖氧化酶、羧基醇氧化酶、L-氨基酸氧化酶、甘氨酸氧化 酶、丙酮酸氧化酶、谷氨酸氧化酶、肌氨酸氧化酶、赖氨酸氧化酶、乳酸氧化酶、香草 基氧化酶、乙醇酸氧化酶、半乳糖氧化酶、尿酸氧化酶、草酸氧化酶、黄嘌呤氧化酶， 并且其中所述酶促过氧化氢产生系统还包括所述至少一种酶的至少一种合适的底物。在 其它的实施方式中，方法进一步包括至少一种酶或至少一种另外的酶。在一些优选的实 施方式中，该至少一种酶选自蛋白酶、纤维素酶、淀粉酶和微生物细胞壁降解酶。在 一些可选的实施方式中，至少一种酯底物是醇酯。在一些其它的实施方式中，方法还包 括至少一种表面活性剂。在一些优选实施方式中，去污包括对被至少一种毒素和/或至 少一种病原体污染的物品进行去污。在一些优选实施方式中，毒素选自肉毒杆菌毒素、 炭疽毒素、蓖麻毒蛋白、鲭鱼毒素(scombroid toxin)、鱼毒、河豚毒素和真菌毒素。在 进一步优选的实施方式中，病原体选自细菌、病毒、真菌、寄生虫和朊病毒。在一些特 别优选的实施方式中，至少一种病原体选自芽孢杆菌属各种(Bacillus spp.)、炭疽芽孢杆 菌(B.anthracis)、梭菌属各种(Clostridium spp.)、肉毒梭菌(C.botulinum)、产气荚膜梭 菌(C.perfringens)、李斯特氏菌属各种(Listeria spp.)、葡萄球菌属各种(Staphylococcus spp.)、链球菌属各种(Streptococcus spp.)、沙门氏菌属各种(Salmonella spp.)、志贺 氏菌属各种(Shigella ssp.)、大肠杆菌(E.coli)、耶尔森氏菌属各种(Yersinia spp.)、鼠 疫耶尔森氏菌(Y.pestis)、弗朗西斯氏菌属各种(Fnmcisellaspp.)、土拉热弗朗西斯菌 (F.tularensis)、弯曲菌属各种(Camplyobacter ssp.)、弧菌属各种(Vibrio spp.)、布鲁氏菌 属各种(Brucella spp.)、隐孢子虫属各种(Cryptosporidium spp.)、贾第虫属各种(Giardiaspp.)、环孢子虫属各种(Cyclospora spp.)和旋毛虫属各种(Trichinella spp.)。在更进一步
优选的实施方式中，需 要去污的物品选自硬表面、织物(fabrics)、食品、饲料、衣物、 垫子、毯子、织品(textiles)、医疗器械和兽医用器械。在一些特别优选的实施方式中， 食品选自水果、蔬菜、鱼、海产品和肉。在一些更进一步的优选实施方式中，硬表面选 自家居表面和工业表面。在一些特别优选的实施方式中，家居表面选自厨房台面、水 池、碗橱、菜板、桌子、架子、食品准备储存区、浴室设备、地面、天花板、墙壁和卧 室区。在一些特别优选的可选实施方式中，工业表面选自食品加工区、饲料加工区、桌 子、架子、地面、天花板、墙壁、水池、切板、飞机、汽车、火车和船。

本发明也提供了用于去污的方法，包括以下步骤提供需要去污的物品，和至 少一种在水溶液中产生过酸的适用于去污的系统；在水溶液中产生过酸；和在所述物品 被去污的条件下在水溶液中将所述物品暴露于所述系统。在一些实施方式中，暴露包括 在碱性或酸性pH条件下将物品暴露于系统。在一些可选的实施方式中，暴露包括在中 性pH条件下将物品暴露于系统。在一些更进一步的实施方式中，暴露包括在高温下暴露 物品。在一些优选实施方式中，高温是大约60°C或更高。然而，本发明不意图被限制 于任何特定的温度下，因为各种温度在本发明方法中都有用。在一些实施方式中，系统 是选自液体、颗粒、泡沫和乳液的形式。在一些再进一步的优选实施方式中，系统包括 至少一种酯底物、至少一种过氧化氢源和至少一种酰基转移酶。在一些特别优选的实施 方式中，过酸选自过乙酸、过壬酸、过丙酸、过丁酸、过戊酸、过己酸、由长链脂肪酸 制成的过酸和由短链脂肪酸制成的过酸。在一些可选的优选实施方式中，方法进一步包 括至少一种化学过氧化氢产生系统，选自过碳酸钠、过硼酸盐和过氧化氢脲。在一些其 它可选的实施方式中，方法进一步包括选自氧化酶及其相应的底物的至少一种酶促过氧 化氢产生系统。在一些特别优选的实施方式中，系统包括至少一种酶促过氧化氢产生系 统，选自葡萄糖氧化酶、山梨醇氧化酶、己糖氧化酶、胆碱氧化酶、醇氧化酶、甘油 氧化酶、胆固醇氧化酶、吡喃糖氧化酶、羧基醇氧化酶、L-氨基酸氧化酶、甘氨酸氧化 酶、丙酮酸氧化酶、谷氨酸氧化酶、肌氨酸氧化酶、赖氨酸氧化酶、乳酸氧化酶、香草 基氧化酶、乙醇酸氧化酶、半乳糖氧化酶、尿酸氧化酶、草酸氧化酶、黄嘌呤氧化酶， 并且其中所述酶促过氧化氢产生系统还包括所述至少一种酶的至少一种合适的底物。在 其它的实施方式中，方法进一步包括至少一种酶或至少一种另外的酶。在一些优选的实 施方式中，该至少一种酶选自蛋白酶、纤维素酶、淀粉酶和微生物细胞壁降解酶。在 一些可选的实施方式中，至少一种酯底物是醇酯。在一些其它的实施方式中，方法还包 括至少一种表面活性剂。在一些优选实施方式中，去污包括对被至少一种毒素和/或至 少一种病原体污染的物品进行去污。在一些优选实施方式中，毒素选自肉毒杆菌毒素、 炭疽毒素、蓖麻毒蛋白、鲭鱼毒素(scombroid toxin)、鱼毒、河豚毒素和真菌毒素。在 进一步优选的实施方式中，病原体选自细菌、病毒、真菌、寄生虫和朊病毒。在一些特 别优选的实施方式中，至少一种病原体选自芽孢杆菌属各种(Bacillus spp.)、炭疽芽孢杆 菌(B.anthracis)、梭菌属各种(Clostridium spp.)、肉毒梭菌(C.botulinum)、产气荚膜梭 菌(C.perfringens)、李斯特氏菌属各种(Listeria spp.)、葡萄球菌属各种(Staphylococcus spp.)、链球菌属各种(Streptococcus spp.)、沙门氏菌属各种(Salmonella spp.)、志贺 氏菌属各种(Shigella ssp.)、大肠杆菌(E.coli)、耶尔森氏菌属各种(Yersinia spp.)、鼠疫耶尔森氏菌(Y.pestis)、弗朗西斯氏菌属各种(Fnmcisellaspp.)、土拉热弗朗西斯菌 (F.tularensis)、弯曲菌属各种(Camplyobacter ssp.)、弧菌属各种(Vibrio spp.)、布鲁氏菌 属各种(Bracellaspp.)、隐孢子虫属各种(Cryptosporidium spp.)、贾第虫属各种(Giardia spp.)、环孢子虫属各种(Cyclospora spp.)和旋毛虫属各种(Trichinella spp.)。在更进一
步优选的实施方式中，需要去污 的物品选自硬表面、织物、食品、饲料、衣物、垫子、 毯子、织品、医疗器械和兽医用器械。在一些特别优选的实施方式中，食品选自水果、 蔬菜、鱼、海产品和肉。在一些更进一步的实施方式中，硬表面选自家居表面和工业表 面。在一些特别优选的实施方式中，家居表面选自厨房台面、水池、碗橱、菜板、桌 子、架子、食品准备储存区、浴室设备、地面、天花板、墙壁和卧室区。在一些特别优 选的可选实施方式中，工业表面选自食品加工区、饲料加工区、桌子、架子、地面、天 花板、墙壁、水池、切板、飞机、汽车、火车和船。


图1提供了表示从过氧化氢或过碳酸盐酶促生成过乙酸的图。图2提供了表示从葡萄糖和丙二醇二乙酸酯生成过乙酸的图。图3提供了表示在三个不同温度下(21°C、40°C和60°C)生成过乙酸的图。图 4提供了表示乙酰转移酶产生浓过乙酸的能力的图。发明描述本发明提供了有效产生过乙酸用于去污应用的酶系统。在优选的实施方式中， 本发明提供了包括酯底物、过氧化氢和至少一种酰基转移酶的系统。然而，本发明不意 图限制于过乙酸，因为任何过酸(例如，过壬酸以及由C10-C18或更长链的长链脂肪酸 制成的过酸)在本发明中都有用。实际上，许多过酸在本发明中有用。在一些特别优选 的实施方式中，系统进一步包括至少一种表面活性剂。在可选的优选实施方式中，本发 明提供了至少一种野生型和/或变异的酰基转移酶。本发明在涉及宽范围的化学和生物 学战争材料的去污中、以及对普通表面清洁和去污具有特别用处。本发明提供了优于目前所应用的利用过酸进行清洁、消毒和/或去污的方法的 许多优势。例如，本发明有助于过酸在原位快速产生。此外，本发明避免了当前方法中 典型的各种成分谨慎的相继添加、过酸提取和通过过滤去除酶。虽然纯的(即，未稀释的)过酸可用于杀灭孢子，但其衰减(decays)，高水平 可能是腐蚀性的，其具有生物危害性，存在化学品的运输问题，并且对储存能力存在限 制。同样，过氧化氢是有用的，但其具有与过酸相似的问题。本发明的酶促组合物和方法提供了优于目前应用的溶剂基反应化学去污的许多 显著优势。这些优势中的一些包括水基酶系统的非腐蚀性特性，其使得使用者能够安全 地应用该系统而不担心对他们自身、他们的设备或环境的损伤。此外，因为酶系统容易 运输、容易应用和需要应用比常规去污方法少得多的水，所以后勤负担降低。而且，应用常规方法时，需要收集去污后的副产物。与之相反，本发明中应用 的表面活性剂是可生物降解的。过酸自然分解为乙酸或丙酸，这二者都是可生物降解 的。应用本发明的酶系统发生的水中原位过酸生成是期望的，因为它比在溶剂中反应化 学生成安全得多和需要小得多的体积。而且，过氧化氢的酶促活化具有较小的化学足 迹，并且酶促活化的应用也可以控制过酸的寿命。此外，由于过氧化氢的货架期短，过 硼酸盐或等价物在本发明中的应用除了避免与过氧化氢有关的运输问题之外也规避了这 一问题。代替过氧化氢，过碳酸盐或其它过氧化氢生成化合物的应用在配方组分方面也提供了灵活性。在一些优选的实施方式中，配方包括在暴露于水而被活化之前无活性的 组分。因此，这些配方特别适于被修改以适应待去污的材料类型(一种或多种)、配方相 容性和应用添加剂(如需要)以提供最佳效应。除了发现液体有用之外，本发明的酶系 统作为干燥和压缩产品、以及凝胶、乳液等也发现有用。因此，本发明提供了期望的配 方设计灵活性，从而被选择应用的配方对于该用途是最好的。定义如果本文没有另外指明，本文应用的所有技术术语和科学术语具有与本发明所 属领域技术人员通常理解的意义相同的意义。例如，Singleton和Sainsbury，Dictionary of Microbiology and Molecular Biology, 2d Ed., John Wiley and Sons, NY (1994)；禾口 Hale 禾口 Marham, The Harper Collins Dictionary of Biology, Harper Perennial, NY (1991)为本令页域 技术人员提供了本发明应用的许多术语的一般释义。虽然与本文描述的方法和材料相似 或等价的任何方法和材料在本发明实践中都有用，但本文描述了优选的方法和材料。因 此，下文即将定义的术语通过参考说明书整体更充分地被描述。同时，如果上下文没有 清楚地另外指明，如本文所用，单数的词语“一(a)”、“一(an)”和“该(the)”包 括复数指代物。如果没有另外指明，分别地，核酸从左至右以5’至3’方向书写；氨 基酸序列从左至右以氨基至羧基方向 书写。应该理解，本发明不限于所述的具体方法、 方案和试剂，因为它们可以根据它们被本领域技术人员应用的情况而变化。意图在于，在整个说明书给出的每一最大数字限值包括每一较小的数字限值， 如同这种较小的数字限值在本文中明确写出。在整个说明书给出的每一最小数字限值包 括每一较大的数字限值，如同这种较大的数字限值在本文中明确写出。在整个说明书给 出的每一数值范围将包括落入这种较宽数值范围中的每一较窄的数值范围，如同这种较 窄的数值范围在本文中明确写出。如本文所用，术语“需要去污的物品(aniteminneedofdecontamination)”是指
需要被去污的任何物品。不意图于将该物品限制于任何具体的物品或物品类型。例如， 在一些实施方式中，物品是硬表面，而在其它实施方式中，物品是衣物。在还有其它实 施方式中，物品是织物。在更进一步的实施方式中，物品用于医疗和/或兽医领域。在 一些优选的实施方式中，物品是手术器械。在进一步的实施方式中，物品用于运输(例 如，公路、跑道、铁路、火车、汽车、飞机、船等)。在进一步的实施方式中，物品用于 指代食品和/或饲料，包括但不限于肉类、肉类副产品、鱼、海产品、蔬菜、水果、奶 制品、谷类、烘焙产品、青贮饲料、干草、草料等。实际上，意图在于，该术语包括适 于应用本文提供的方法和组合物去污的任何物品。如本文所用，术语“去污(decontamination) ”是指从物品去除污染物。在一些 优选的实施方式中，去污包括消毒，而在其它实施方式中，该术语包括杀菌。然而，不 意图该术语受限于这些实施方式，因为该术语意图包括无生命污染物以及微生物污染物 (例如，细菌、真菌、病毒、朊病毒等)的去除。如本文所用，术语“消毒(disinfecting)”是指从表面去除污染物，以及抑制或 杀灭物品表面上的微生物。本发明不意图限制于任何特定表面、物品或待去除的污染物 (一种或多种)或微生物。如本文所用，术语“灭菌(sterilizing) ”是指杀灭物品表面上的所有微生物。如本文所用，术语“杀孢子的(sporicidal)”是指杀灭微生物孢子，包括但不限于真菌和细菌孢 子。该术语包括有效预防孢子萌发中的组合物，以及使孢子完全无存活 的那些组合物。如本文所用，术语“杀细菌的(bactericidal)”、“杀真菌的(fungicidal) ”和 “杀病毒的(viricidal)”分别指杀灭细菌、真菌和病毒的组合物。术语“杀微生物的 (microbicidal)"是指抑制任何微生物生长和/或复制的组合物，包括但不限于细菌、真
菌、病毒、寄生虫、立克次体等。如本文所用，术语“抑细菌的(bacteriostatic) ”、“抑真菌的(fongistatic) ”和 “抑病毒的(virostatic)”分别指抑制细菌、真菌和病毒生长和/或复制的组合物。术语 “抑微生物的(microbiostatic) ”是指抑制任何微生物生长和/或复制的组合物，包括但不
限于细菌、真菌、病毒、寄生虫、立克次体等。如本文所用，术语“酰基转移酶(acyl transferase)”是指能够催化引起数量足够
高的过酸形成的反应的酶，所述过酸适于用途如清洁、漂白和消毒。在特别优选的实施 方式中，本发明的酰基转移酶产生非常高的过水解与水解的比值。这些不同的酶的高过 水解与水解比值使得这些酶适用于非常宽范围的用途。在另外的优选实施方式中，本发 明的酰基转移酶的特征是具有不同的三级结构和一级序列。在特别优选的实施方式中， 本发明的酰基转移酶包括不同的一级和三级结构。在一些特别优选的实施方式中，本发 明的酰基转移酶包括不同的四级结构。在一些优选的实施方式中，本发明的酰基转移酶 是耻垢分支杆菌(M.smegmatis)酰基转移酶(MsAcT)，而在可选的实施方式中，酰基转 移酶是这种酰基转移酶的变体，而在再进一步的实施方式中，酰基转移酶是这种酰基转 移酶的同系物。在进一步的优选实施方式中，单体水解酶被工程改造为产生具有比原始 单体更好的酰基转移酶活性的单体或多聚体酶。然而，本发明不意图于限制为该特定的 耻垢分支杆菌酰基转移酶，该酰基转移酶的特定变体，或该酰基转移酶的特定同系物。 在一些特别优选的实施方式中，酰基转移酶是WO 05/056782中公开和描述的野生型耻 垢分支杆菌酰基转移酶，其整体通过引用并入本文。在一些可选的特别优选的实施方式 中，酰基转移酶是WO 05/056782中公开和描述的变异的酶或同系物之一。在一些更特 别优选的实施方式中，变体包括取代S54V或MsAcT(本文称为“S54V变体”或“变体 S54V”)。如本文所用，术语“多聚体”是指共价或非共价连接并且在溶液中作为复合物 存在的两个或更多个蛋白质或肽。“二聚体”是包含两个蛋白质或肽的多聚体；“三聚 体”包含三个蛋白质或肽，等等。如本文所用，“八聚体”是指八个蛋白质或肽的多聚 体。如本文所用，“清洁组合物(cleaning compositions) ”和“清洁配制物 (cleaningformulations)，，是指在将不期望化合物从待清洁物品的去除中有用的组合物，所 述物品如织物、盘碟、隐形眼镜、其它固体基底、毛发(香波)、皮肤(肥皂和霜)、牙 齿(牙刷、牙膏)等。该术语包括针对所需的特定清洁组合物类型和产品形式(例如， 液体、凝胶、颗粒或喷雾组合物)而选择的任何物质/化合物，只要组合物与酰基转移酶 和组合物中应用的其它酶(一种或多种)相容即可。通过考虑待清洁的表面、物品或织 物，以及应用期间的清洁条件所需的组合物形式，容易地进行清洁组合物材料的具体选 择。
该术语还指适于清洁、漂白和/或灭菌任何物体和/或表面的任何组合物。该 术语意图包括但不限于洗涤剂组合物(例如，液体和/或固体衣用洗涤剂和精细织物洗 涤剂；硬表面清洁配制物，如对玻璃、木材、陶瓷和金属台面和窗；地毯清洁剂；炉灶 清洁剂；织物清新剂；织物柔软剂；和织物和衣用预洗剂(pre-spotter)，以及盘碟洗涤 剂)。实际上，如果没有另外指明，如本文所用的术语“清洁组合物(cleaningcomposition) ” 包括颗粒或粉末状通用(all-purpose)或重垢(heavy-duty)洗涤
齐U，特别是清洁洗涤剂；液体、凝胶或膏状通用洗涤剂，特别是所谓的重垢液体(HDL) 型的洗涤剂；液体精细织物洗涤剂；盘碟手洗剂或轻垢(light-duty)盘碟洗涤剂，特别是 高泡沫型的那些；盘碟机洗剂，包括各种片剂、颗粒、液体和漂洗辅助类型，用于家庭 和工业应用；液体清洁和消毒剂，包括抗菌手洗型，清洁棒，漱口水，假牙清洁剂，汽 车或地毯香波，卧室清洁剂；洗发香波和护发剂；沐浴胶和沐浴泡沫和金属清洁剂；以 及清洁助剂如漂白添加剂和“去污棒(stain-stick)”或预处理型。如本文所用，术语“洗涤剂组合物(detergent composition) ”和“洗涤剂配制物 (detergent formulation)，，用于指代意图用于清洁污染对象的洗涤介质中的混合物。在一些 优选实施方式中，该术语用于指代洗涤织物和/或衣服(例如，“衣物洗涤剂”)。在可 选的实施方式中，该术语是指其它洗涤剂，如用于清洁盘碟、餐具等的那些(例如，“盘 碟洗涤剂(dishwashing detergents)，，)。本发明不意图于限制为任何特定的洗涤剂配制物 或组合物。实际上，意图在于，除了酰基转移酶之外，该术语包括含有表面活性剂、转 移酶(一种或多种)、水解酶、氧化还原酶、增效剂、漂白剂、漂白激活剂、上蓝剂和荧 光染料、结块抑制剂、掩蔽剂、酶激活剂、抗氧化剂和增溶剂的洗涤剂。如本文所用，术语“硬表面清洁组合物(hard surface cleaning composition) ”是 指用于清洁硬表面如地面、墙壁、瓷砖、浴室和厨房设备等的洗涤剂组合物。这种组合 物以任何形式提供，包括但不限于固体、液体、乳液等。如本文所用，“盘碟洗涤组合物(dishwashing composition) ”是指用于清洁盘碟
的所有形式的组合物，包括但不限于颗粒和液体形式。如本文所用，“织物清洁组合物(fabric cleaning composition)”是指用于清洁织
物的所有形式的洗涤剂组合物，包括但不限于颗粒、液体和条状的形式。如本文所用，“织品(textile)”是指纺织的织物，以及适于转化为纱线或用作纱 线的短纤维和丝，纺织、编织和非纺织织物。该术语包括由天然和合成(例如，制造的) 纤维制成的纱线。如本文所用，“织品材料(textilematerials)”是纤维、纱线中间体、纱线、织物
和从织物制成的产品(例如，衣服或其它制品)的通用术语。如本文所用，“织物(fabric)”包括任何织品材料。因此，该术语意图包括衣 服以及织物、纱线、纤维、非纺织材料、天然材料、合成材料和任何其它织品材料。如本文所用，术语“相容的(compatible)”意味着，清洁组合物材料不降低酰基 转移酶的酶活性至这样的程度在普通应用条件下，酰基转移酶不像期望的那样有效。 具体的清洁组合物材料在下文中详细示例。如本文所用，“有效量的酰基转移酶(effective amount of acyltransferaseenzyme)“是指获得特定应用(例如，去污)中所需的酶促活性所需的酰基转移 酶的量。这种有效量容易由本领域技术人员确定并且基于许多因素，如所应用的具体的 酶变体、清洁用途、清洁组合物的具体组分和所需的是液体的或是干的(例如，颗粒、 条形物)组合物，等等。如本文所用，“非织物清洁组合物(non-fabric cleaning compositions) ”包括硬
表面清洁组合物、盘碟洗涤组合物、个人护理清洁组合物(例如，口腔清洁组合物、假 牙清洁组合物、个人清洁组合物等)和适用于纸浆和造纸工业的组合物。如本文所用， “氧化化学品(oxidizing chemical) ”是指具有漂白能力的化学品。氧化化学品以适于漂 白的量、pH和温度存在。该术语包括但不限于过氧化氢和过酸。如本文所用，“酰基(acyl)”是有机酸基的通用名，其为去除_OH基团后的羧 酸残基(例如，乙酰氯CH3CO-Cl,，是由乙醇酸CH3COO-H形成的酰基氯)。各个酰 基的名称通过用“基(_yl)”替换酸(acid)中的“_ic”形成。如本文所用，术语“酰化(acylation)”是指将酰基(RCO_)替换到分子中的化
学转化，一般是替换-OH基团的活性氢。如本文所用，术语“转移酶(transferase)”是指催化官能化合物转移到一系列底
物的酶。如本文所用，“离去基团(leavinggroup)”是指被另一亲核试剂替换后从酰基供 体切除的亲核试剂。如本文所用，术语“酶促转化(enzymatic conversion)”是指通过使底物或中间
体与酶接触而将底物修饰为中间体或将中间体修饰为终产物。在一些实施方式中，接触 是通过直接将底物或中间体暴露于合适的酶形成的。在其它实施方式中，分别地，接触 包括分别地将底物或中间体暴露于表达和/或分泌酶，和/或将期望底物和/或中间体代 谢为期望的中间体和/或终产物的生物体。如本文所用，短语“洗涤剂稳定性(detergent stability) ”是指洗涤剂组合物的稳
定性。在一些实施方式中，稳定性在洗涤剂使用期间评价，而在其它实施方式中，该术 语是指洗涤剂组合物在储存期间的稳定性。如本文所用，短语“对蛋白水解的稳定性(stability to proteolysis)”是指蛋白质
(例如，酶)抵抗蛋白水解的能力。该术语不意图被限制为使用任何特定的蛋白酶来评价 蛋白质的稳定性。如本文所用，“氧化稳定性(oxidative stability) ”是指蛋白质在氧化条件下起作
用的能力。具体地，该术语是指蛋白质在各种浓度的H2O2和/或过酸存在的情况下起作 用的能力。可以通过本领域技术人员已知的标准过程和/或通过本文描述的方法测定多 种氧化条件下的稳定性。通过与不存在氧化化合物时的酶促活性相比，酶促活性的半衰 期增加或减少至少约5%或更多(在大多数实施方式中，优选增加)，证实氧化稳定性的 实质变化。如本文所用，“pH稳定性(pH stability)”是指蛋白质在特定pH下起作用的能
力。一般地，大多数酶具有有限的起作用的pH范围。除了在中等范围pHs(即，约pH 7)下起作用的酶之外，存在能够在非常高或非常低的pH下起作用的酶。通过本领域技 术人员已知的标准过程和/或通过本文描述的方法，可以测定各种pH下的稳定性。通过与酶的最适pH下的酶促活性相比，酶促活性的半衰期增加或减少至少约5%或更多(在 大多数实施方式中，优选增加)，证实pH稳定性的实质变化。然而，本发明不意图限制 于任何pH稳定性水平或pH范围。如本文所用，“热稳定性(thermal stability) ”是指蛋白质在特定温度下起作用的 能力。一般地，大多数酶具有有限的起作用的温度范围。除了在中等范围温度(即，室 温)下起作用的酶之外，存在能够在非常高或非常低的温度下起作用的酶。热稳定性可 以通过已知的标准过程和/或通过本文描述的方法测定。当暴露于不同于(低于或高于) 催化活性的最佳温度的各种温度时，突变体的催化活性的半衰期增加或减少至少约5%或 更多(在大多数实施方式中，优选增加)，证实热稳定性的实质变化。然而，本发明不意 图限制于任何温度稳定性水平或温度范围。如本文所用，术语“化学稳定性(chemical stability) ”是指蛋白质(例如酶)对
不利影响其活性的化学品的稳定性。在一些实施方式中，这种化学品包括但不限于过氧 化氢、过酸、阴离子洗涤剂、阳离子洗涤剂、非离子洗涤剂、螯合剂等。然而，本发明 不意图限制于任何特定的化学稳定性水平或化学稳定性范围。如本文所用，短语“底物特异性变化(alteration in substrate specificity)”是指酶
的底物特异性的变化。在一些实施方式中，底物特异性变化被定义为对一种酶所观察 到的K。at/Km比相比于酶变体或其它酶组合物的差异。酶的底物特异性根据所检测的底物 变化。通过比较酶对不同底物表现出的催化效应，测定酶的底物特异性。这些测定在评 价突变酶的效应中特别有用，因为通常需要产生对特定的目标底物表现出更高比值的变 体酶。例如，与目前用于去污、清洁、漂白和消毒应用的酶相比，本发明的酰基转移酶 在从酯底物产生过酸方面更有效。本发明的另一例子是过酸降解的活性比野生型低的酰 基转移酶。本发明的另一例子是对更疏水的酰基基团的活性比乙酸高的酰基转移酶。然 而，本发明不意图限制于任何特定的底物组合物或任何特定的底物特异性。如本文所用，“表面性质(surface property)”用于指代静电荷，以及这样的性 质，如蛋白质表面所表现的疏水性和/或亲水性。如本文所用，短语“独立地选自(isindependently selected from the groupconsisting of....)"意味着，选自所提及的马库什组的部分或要素可以是相同的，可
以是不同的或如下列实例中指出的要素的任何混合物。如本文所用，术语“纯化的(purified)”和“分离的(isolated)”是指从样品去除
污染物。例如，通过去除溶液或制备物中除酰基转移酶之外的污染蛋白和其它化合物， 可以纯化酰基转移酶。在一些实施方式中，在细菌或真菌宿主细胞中表达重组的酰基转 移酶，并且通过去除其它宿主细胞成分纯化这些重组的酰基转移酶；从而样品中的重组 酰基转移酶多肽的百分比增加。如本文所用，术语“衍生物(derivative)”是指衍生自蛋白质的蛋白质，所述衍 生是通过添加一个或多个氨基酸到C端和N端之一或两端，在氨基酸序列中的一个或 许多不同位点取代一个或多个氨基酸，和/或在蛋白质的一端或两端或在氨基酸序列中 的一个或多个位点缺失一个或多个氨基酸，和/或在氨基酸序列中的一个或多个位点插 入一个或多个氨基酸。蛋白质衍生物的制备优选地如下实现修饰编码天然蛋白质的 DNA序列，将该DNA序列转化到合适的宿主中，和表达修饰的DNA序列形成衍生蛋白质。相关的(和衍生的)蛋白质包括“变体蛋白质(variant proteins) ”。在一些优 选的实施方式中，变体蛋白质的少量氨基酸残基不同于母体蛋白质和彼此不同。不同 氨基酸残基的数目可以是1个或更多个，优选1、2、3、4、5、10、15、20、30、40、 50、或更多个氨基酸残基。在一些优选实施方式中，变体之间不同的氨基酸的数目是 1至10之间。在一些特别优选的实施方式中，相关蛋白质、特别是变体蛋白质包括至 少 35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、 95%, 97%, 98%,或99%的氨基酸序列同一性。此外，如本文所用的相关蛋白质或变 体蛋白质是指主要区域的数目不同于另一相关蛋白质或母体蛋白质的蛋白质。例如，在 一些实施方式中，变体蛋白质具有不同于母体蛋白质的1、2、3、4、5或10个相应的主 要区域。本领域中已知几种方法适于产生本发明的酰基转移酶的变体，包括但不限于位 点饱和诱变、扫描诱变、插入诱变、随机诱变、定点诱变和定向进化以及多种其它重组 方法。在特别优选的实施方式中，同源蛋白质被工程改造，以产生具有期望活性(一 种或多种)的酶。在一些特别优选的实施方式中，工程改造的蛋白质包含在SGNH-水 解酶蛋白质家族中。在一些最优选的实施方式中，工程改造的蛋白质包括下列保守残基 中的至少一个或其组合L6、W14、W34、L38、R56、D62、L74、L78、H81、P83、 M90、K97、G110、L114、L135、F180、G205。在可选的实施方式中，这些工程改造 的蛋白质包括GDSL-GRTT和/或ARTT基序。在进一步的实施方式中，酶是多聚体， 包括但不限于二聚体、八聚体和四聚体。在还有其它优选实施方式中，工程改造的蛋白 质表现出大于1的过水解与水解比值。酰基转移酶的氨基酸残基等同于耻垢分支杆菌酰基转移酶的残基——如果它与 耻垢分支杆菌酰基转移酶中的特定残基或该残基的一部分同源(即，在一级和/或三级结 构中具有相应位置)或类似(即，具有相同或相似的组合、反应和/或化学相互作用的功 能能力)。在一些实施方式中，为了确立一级结构的同源性，将酰基转移酶的氨基酸序列 与耻垢分支杆菌酰基转移酶一级序列、特别是已知在所有序列已知的酰基转移酶中不变 的一组残基直接比较。在比对(align)保守残基，允许进行必需的插入和缺失以便维持 比对(即，避免任意的缺失和插入造成的保守残基消除)之后，确定等同于耻垢分支杆菌 酰基转移酶一级序列中特定氨基酸的残基。在优选的实施方式中，保守残基的比对保留 100%的这些残基。然而，75%以上或少至50%的保守残基的比对也足以确定等同残基。 在优选的实施方式中，催化性丝氨酸和组氨酸残基的保守性被维持。保守残基用于确定其它酰基转移酶(例如，来自其它分支杆菌种类以及任何其 它生物体的酰基转移酶)中的耻垢分支杆菌酰基转移酶的相应的等同氨基酸残基。在本发明的一些实施方式中，编码耻垢分支杆菌酰基转移酶的DNA序列被修 饰。在一些实施方式中，下列残基被修饰Cys7、AsplO、SerlU Leul2, Thrl3、 Trpl4、Trpl6、Pro24、Thr25、Leu53、Ser54、Ala55、Thr64、Asp65、Arg67、Cys77、 Thr91、Asn94、Asp95、Tyr99、Val 125, Pro 138, Leul40、Pro 146, Pro 148, Trpl49、
16Phe 150, Ilel53、Phe 154, Thrl59, Thr 186, Ilel92、Ilel94 和 Phel96。然而，本发明不
意图限制于在这些位点被修饰的序列。实际上，本发明意图包括多种修饰和修饰组合。在其它实施方式中，通过在三级结构水平下测定其三级结构已由X线晶 体学测定的酰基转移酶的同源性，确定等同残基。在本上下文中，“等同残基 (equivalentresidues)”被定义为，比对后羰基水解酶和耻垢分支杆菌酰基转移酶的特定氨 基酸残基的主链原子中的两个或多个的原子坐标(N在N上，CA在CA上，C在C上， 和 O在O上)在0.13nm内，优选为O.lnm的那些残基。在最佳模型被定向和定位之后 进行比对，以得到被讨论的酰基转移酶针对耻垢分支杆菌酰基转移酶的非氢蛋白质原子 的原子坐标的最大重叠。如本领域已知，最佳模型是在可用的最高分辨率下对试验衍射 数据给出最低R因子的晶体模型。在功能和/或结构上类似于耻垢分支杆菌酰基转移酶 的特定残基的等同残基被定义为酰基转移酶的那些氨基酸，其优先采用一种构象使得它 们改变、修饰或调节蛋白质结构，以便以限定的和归因于耻垢分支杆菌酰基转移酶的特 定残基的方式引起底物结合和/或催化方面的变化。进一步地，它们是酰基转移酶的那 些残基(在三级结构已经通过X线晶体学获得的情况下)，其占据类似位点达到这样的 程度虽然给定残基的主链原子基于占据同源位置而言可能不满足等同的标准，但该残 基的侧链原子中的至少两个的原子坐标位于耻垢分支杆菌酰基转移酶的相应侧链原子的 0.13nm 之内。在一些实施方式中，被鉴定以替换、插入或缺失的一些残基是保守残基，而其 它残基则不是。本发明的酰基转移酶突变体包括多种突变体，包括由包含信号序列的核 酸编码的那些突变体。在一些实施方式中，由这种序列编码的酰基转移酶突变体被表达 宿主分泌。在又一些实施方式中，核酸序列包括具有分泌信号的同系物。野生型和突变蛋白的表征通过任何合适的方式完成，并且优选地基于对目标性 质的评价。例如，在本发明的一些实施方式中，pH和/或温度以及洗涤剂和/或氧化稳 定性被确定。实际上，考虑到在这些特征(pH、温度、蛋白水解稳定性、洗涤剂稳定性 和/或氧化稳定性)中的一个或更多个中具有不同稳定性程度的酶具有用处。在还有其 它实施方式中，具有低过酸降解活性的酰基转移酶被选择。如本文所用，“相应于(corresponding to)”是指蛋白质或肽中所列举位置处的 残基，或与蛋白质或肽中所列举位置处的残基类似、同源或等同的残基。如本文所用，“相应区域(correspondingregion)” 一般指沿相关蛋白质或母体蛋
白质上的相似位置。术语“编码…的核酸分子(nucleic acid molecule encoding)”、“编码…的核酸序 列(nucleic acid sequence encoding) ”、 “编码…的 DNA 序列(DNA sequenceencoding) ” 和“编码…的DNA(DNAencOding) ”是指沿着脱氧核糖核苷酸链的脱氧核糖核苷酸的顺 序或序列。这些脱氧核糖核苷酸的顺序决定了沿着肽(蛋白质)链的氨基酸顺序。因 此，DNA序列编码氨基酸序列。如本文所用，术语“类似序列(analogous sequence)”是指蛋白质中提供与目标
蛋白质(即，一般为感兴趣的原始蛋白质)类似的功能、三级结构和/或保守残基的序 列。例如，在包含α螺旋或β折叠结构的表位区域中，类似序列中的替代氨基酸优选 地保持相同的特定结构。该术语也指代核苷酸序列，以及氨基酸序列。在一些实施方式
17中，开发出类似序列以便替代氨基酸产生表现相似或改进功能的变体酶。在一些优选实 施方式中，目标蛋白质中氨基酸的三级结构和/或保守残基位于目标部分或片段处或其 附近。因此，在目标部分或片段包含例如α螺旋或β折叠结构时，替代氨基酸优选地 维持该特定结构。如本文所用，“同源蛋白质(homologous protein)”是指与目标蛋白质(例如，
来自另一来源的酰基转移酶)具有相似作用和/或结构的蛋白质(例如，酰基转移酶)。 同源不意图于必需是在进化上相关。因此，意图在于，该术语包括从不同种类得到的相 同或相似的酶(一种或多种)(即，就结构和功能而言)。在一些优选的实施方式中，希望 鉴定具有与目标蛋白质相似的四级、三级和/或一级结构的同源物，因为用来自同源物 的类似片段替代目标蛋白质中的部分或片段会降低变化的破坏性。在一些实施方式中， 同源蛋白质诱导出与目标蛋白质相似的免疫应答(一种或多种)。如本文所用，“野生型(wild-type)，，和“天然(native)，，蛋白质是在自然中发现 的蛋白质。术语“野生型序列(wild-type sequence) ”和“野生型基因(wild-typegene) ” 在本文中可互换使用，指代在宿主细胞中为天然的或天然发生的序列。在一些实施方式 中，野生型序列是指作为蛋白质工程化项目的起点的目标序列。根据本领域技术人员已 知的一般方法，可以获得编码天然发生蛋白质的基因。方法一般包括合成具有目标蛋白 的推定序列编码区的标记探针，从表达所述蛋白质的生物体制备基因组文库，和通过与 探针杂交筛选文库中的目标基因。随后对阳性杂交克隆作图和测序。如本文所用的术语“重组DNA分子(recombinant DNA molecule) ”是指由通过 分子生物学技术的方法连接在一起的DNA片段组成的DNA分子。术语“重组寡核苷酸(recombinant oligonucleotide)”是指应用分子生物学操作方 法产生的寡核苷酸，包括但不限于，连接由多核苷酸序列的限制性酶消化产生的两条或 多条寡核苷酸序列，合成寡核苷酸(例如，合成引物或寡核苷酸)等。应用本领域已知的任何合适方法，可以测定序列间的同源性程度(参见，例 如，Smith 和 Waterman，Adv.Appl.Math., 2 482[1981] ； Needleman 和 Wunsch，J.Mol. Biol., 48: 443[1970] ； Pearson 和 Lipman，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 85 2444[1988]；程 序如 GAP、BESTFIT> FASTA 和 TFASTA，在威斯康星遗传软件包(WisconsinGenetics Software Package) (Genetics Computer Group, Madison, WI)中；禾口 Devereux 等，Nucl. Acid Res., 12: 387_395[1984])。在至少两条核酸或多肽的情况下，短语“实质上相似(substantially similar)”和 “实质上相同(substantially identical)”通常意味着，多核苷酸或多肽包括与参比(即，
野生型)序列相比具有至少大约40%的同一性，更优选至少大约50%同一性，甚至更优 选至少约60%同一性，优选至少大约75%同一性，更优选至少大约80%同一性，甚至更 优选至少大约90%，仍更优选大约95%，最优选大约97%的同一性，有时多至大约98% 和大约99 %的序列同一性的序列。应用已知程序如BLAST、ALIGN和CLUSTAL， 使用标准参数，可以测定序列同一性(参见，例如，Altschul,等，J.Mol.Biol.215 403-410[1990] ； Henikoff 等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 89 10915[1989] ； Karin 等，Proc. Natl.Acad.Sci USA 90 5873[1993]；和 Higgins 等，Gene 73 237_244[1988])。进行 BLAST分析的软件可以通过美国国家生物技术信息中心(National Center for BiotechnologyInformation)公开得到。同样，可以应用 FASTA(Pearson等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 85
2444-2448[1988])搜索数据库。两条多肽实质上相同的一个指标是第一多肽与第二多肽 具有免疫交叉反应性。一般地，保守性氨基酸取代不同的多肽具有免疫交叉反应性。因 此，例如，当两条肽的不同之处仅为保守性取代时，一条多肽与第二多肽实质上相同。 两条多肽实质上相同的另一指标是，两个分子在严格条件下(例如，在中度至高度严格 范围内)互相杂交。如本文所用，“等同残基(equivalent residues)”是指共有特定氨基酸残基的蛋
白质。例如，通过在三级结构水平下测定其三级结构已由X线晶体学测定的蛋白质(例 如，酰基转移酶)的同源性，可以鉴定等同残基。等同残基被定义为，比对后具有推定 等价残基的蛋白质和目标蛋白质的特定氨基酸残基的主链原子中的两个或多个的原子坐 标(N在N上，CA在CA上，C在C上，O在O上)是在0.13nm内，优选O.lnm。在 最佳模型被定向和定位后实现比对，以得到被分析蛋白质的非氢蛋白质原子的原子坐标 的最大重叠。优选的模型是应用晶体和蛋白质表征/分析领域的技术人员已知的方法测 定的、在可用的最高分辨率下对试验衍射数据给出最低R因子的晶体模型。发明详述本发明提供了在水中有效产生过乙酸用于去污应用的酶系统。在优选的实施方 式中，本发明提供了包括酯底物、过氧化氢和至少一种酰基转移酶的系统。然而，本发 明不意图限制于过乙酸，因为任何过酸(例如，过壬酸以及由C10-C18或更长链的长链 脂肪酸制成的过酸)在本发明中都有用。实际上，许多过酸在本发明中有用。在一些 特别优选的实施方式中，系统进一步包括至少一种表面活性剂。在可选的优选实施方式 中，本发明提供了至少一种野生型和/或变异的酰基转移酶。本发明在涉及广泛的化学 和生物学战争材料的去污中以及对普通表面清洁和去污有用。在一些实施方式中，本发明在被下述材料污染的材料的去污中有用其包括但 不限于毒性化学品、芥子气、VX、炭疽芽孢杆菌孢子、鼠疫耶氏菌、土拉热弗朗西斯 菌、真菌和毒素(例如，肉毒杆菌毒素、蓖麻毒蛋白、真菌毒素等)，以及感染了感染性 病毒体(例如，黄病毒、正粘病毒、副粘病毒、沙粒病毒、弹状病毒、虫媒病毒、肠病 毒、布尼病毒等)的细胞。在一些特别优选的实施方式中，本发明提供了能够在宽的温度范围(例如，大 约5°C至大约90°C、大约16°C至大约60°C和大约25°C至大约100°C )内起作用的系统。 在还有其它优选的实施方式中，系统提供了小的化学足迹并且在短期和/或长期储存期 间是稳定的。实际上，本发明的系统意图用于多种应用中。考虑本发明的酶系统在多 种形式下都有用，包括液体、颗粒、泡沫、乳液等，它们被设计成适于随时需求。实际 上，本发明不意图限制于任何特定形式。在还有其它实施方式中，本发明的酰基转移酶系统与另外的酶联合应用，包括 但不限于蛋白酶、淀粉酶、纤维素酶等。实际上，考虑多种酶可与本发明联合应用，其 包括但不限于微生物细胞壁降解和糖蛋白降解酶、溶菌酶、半纤维素酶、过氧化物酶、 蛋白酶、纤维素酶、木聚糖酶、脂肪酶、磷脂酶、酯酶、角质酶、果胶酶、角蛋白酶、 还原酶、氧化酶、酚氧化酶、脂加氧酶、木质素酶、支链淀粉酶、鞣酸酶、戊聚糖酶、 malanases、β -葡聚糖酶、阿拉伯糖苷酶(arabinosidases)、透明质酸酶、软骨素酶、漆 酶、内切葡聚糖酶、PNG酶(PNGases)、淀粉酶等，以及或其混合物。在一些实施方式中，酶稳定剂在本发明中有用。考虑通过应用酶的组合，所需化学品量会同时减低。在一些特别优选的实施方式中，本发明在从酯底物和过氧化氢酶促产生过酸中 有用。本发明不意图限制于产生过氧化氢的任何具体的酶，因为用合适底物产生H2O2 和酸的任何酶在本发明方法中有用。例如，已知从乳酸和氧产生H2O2的来自乳酸菌属 (Lactobacillus)种类的乳酸氧化酶在本发明中有用。实际上，本发明方法的一个优势是 酸的产生将碱性溶液的pH降低到其中过酸在漂白中最有效的pH范围(即，处于或低于 pKa)。能够产生过氧化氢的其它酶(例如，醇氧化酶、乙二醇氧化酶、甘油氧化酶、氨 基酸氧化酶等)也用于和酯底物与本发明的过水解酶联合产生过酸。从底物产生酸而不 产生过氧化氢的酶在本发明中也有用。这样的酶的例子包括但不限于蛋白酶。因此，如 本文所述，本发明提供了优于目前应用的用于去污剂配制和使用的方法和组合物的明确 优势，以及多种其它应用。在一些优选实施方式中，底物选自下列一种或更多种甲酸、乙酸、丙酸、丁 酸、戊酸、己酸、辛酸、壬酸、癸酸、十二酸、肉豆蔻酸、棕榈酸、硬脂酸和油酸。除了本文描述的酰基转移酶之外，多种水解酶在本发明中有用，包括但不限 于作用于酯键的羧酸酯水解酶、硫酯水解酶、磷酸一酯水解酶和磷酸二酯水解酶；作 用于醚键的硫醚水解酶；和作用于肽键的α-氨基-酰基-肽水解酶、肽基-氨基酸水 解酶、酰基-氨基酸水解酶、二肽水解酶和肽基-肽水解酶。这样的水解酶(一种或多 种)单独应用或与过水解酶联合应用。在它们中优选的是羧酸酯水解酶和肽基-肽水解 酶。合适的水解酶包括(1)属于肽基-肽水解酶类的蛋白酶(例如，胃蛋白酶、胃蛋白 酶B、凝乳酶、胰蛋白酶、糜蛋白酶Α、糜蛋白酶B、弹性蛋白酶、肠激酶、组织蛋白酶 C、木瓜蛋白酶、木瓜凝乳蛋白酶、无花果蛋白酶、凝血酶、纤维蛋白溶解凝乳酶、枯 草杆菌蛋白酶、曲霉菌肽酶(aspergill0peptidase)A、胶原酶、羧菌肽酶B、激肽释放酶、 胃亚蛋白酶(gastrisin)、组织蛋白酶D、菠萝蛋白酶、角蛋白酶、糜蛋白酶C、胃蛋白酶 C、曲霉菌肽酶B、尿激酶、羧基肽酶A和B和氨基肽酶)；(2)羧酸酯水解酶，包括羧 基酯酶、脂肪酶、果胶酯酶和叶绿素酶；和(3)具有高的过水解与水解比值的酶。它们 中特别有效的是脂肪酶，以及表现出高的过水解与水解比值的酯酶，以及蛋白质工程改 造的酯酶、角质酶和脂肪酶，其应用本发明过水解酶的一级、二级、三级和/或四级结 构特征进行工程改造。根据目的，水解酶按照需要的量被掺入洗涤剂组合物。其优选地以按重量计 0.00001%至5%，更优选按重量计0.02%至3%的量被掺入。此酶应当以颗粒形式应用， 所述颗粒由单独的粗制酶或粗制酶与洗涤剂组合物中的其它酶和/或组分联合制成。粗 制酶颗粒以这样的量应用，纯化的酶在颗粒中为按重量计0.001%至50%。颗粒以按重量 计0.002%至20%，优选0.1%至10%的量应用。在一些实施方式中，颗粒被配制成包含 酶保护剂和溶解延缓材料(即，在使用期间调节颗粒溶解的材料)。此外，氧化酶在本发明中有用，其包括糖氧化酶，选自醛糖氧化酶(IUPAC 分类ECl.1.3.9)、半乳糖氧化酶(IUPAC分类EC 1.1.3.9)、纤维二糖氧化酶(IUPAC分 类ECl.1.3.25)、吡喃糖氧化酶(IUPAC分类EC1.1.3.10)、山梨糖氧化酶(IUPAC分类 ECl.1.3.11)和/或己糖氧化酶(IUPAC分类ECL1.3.5)、葡萄糖氧化酶(IUPAC分类EC 1.1.3.4)和它们的混合物。实际上，被考虑到符合下列公式的任何合适的氧化酶在本发明中都有用酶+还原的底物一氧化的底物+h2O2。其它组分在本发明的配制物中有用。虽然本发明的配制物不意图于被这样限 制，但本文中描述了多种组分。实际上，虽然这样的组分对于本发明的目的而言不是必 需的，但下文描述的辅助剂(adjuncts)的非限制性列表适用于目前的组合物，并且可以 被适宜地掺入本发明的一些实施方式中，例如，为了协助或增强清洁性能，用于处理待 清洁底物，或修饰清洁组合物的美感如应用香料、着色剂、染料等。应该理解，这样的 辅助剂是除本发明的酶、过氧化氢和/或过氧化氢源和包含酯部分的材料之外的。这些 添加组分的精确性质和它们的掺入水平将取决于组合物的物理形式和应用其进行的清洁 操作的性质。合适的辅助剂材料包括但不限于表面活性剂、增效剂、螯合剂、染料迁移 抑制剂、沉淀助剂、分散剂、腐蚀抑制剂、另外的酶和酶稳定剂、催化材料、漂白激活 剂、漂白促进剂、预形成过酸、聚合分散剂、粘土污迹去除/抗再沉淀剂、增白剂、泡 沫抑制剂、染料、香料、结构增弹剂、载体、水溶助长剂、操作助剂和/或颜料。除 了下文的公开内容，这种其它辅助剂的合适例子和使用水平在美国专利号5,576,282、 6,306,812和6,326,348中见到，所述专利通过引用并入本文。前述辅助成分可以构成本发 明清洁组合物的余量。在一些实施方式中，本发明的酶系统还包括完成去污之后去除任何残留过酸和/ 或H2O2的酶，这样的酶包括但不限于过氧化氢酶和/或水解酶。重要地，本发明提供了在宽的pH和温度范围内有效清洁、漂白和消毒的手段。 在一些实施方式中，这一代应用的pH范围是4-12。在一些可选实施方式中，应用的温度 的范围是大约5°C至大约90°C之间。本发明提供了优于目前应用的系统(参见，例如， 欧洲申请87-304933.9号)的优势，所述优势在于，在过酸氧化的最适pH下漂白是可能 的，以及在中性pH、酸性pHs和低温下提供漂白。实施例提供下列实施例以便说明和进一步阐述本发明的一些优选实施方式和方面，并 且不意图于被解释为限制本发明的范围。在下面的试验性公开中，应用下列缩写V (摄氏度)；RT(室温)；rpm(每 分钟转数)；H2CK水)；dH20(蒸馏水)；HCl(盐酸)；aa(氨基酸)；bp(碱基对)； kb(千碱基对)；kD(千道尔顿)；gm(克)；Pg和ug(微克)；mg(毫克)；ng(纳 克)；μ 和ul(微升)；ml(毫升)；mm(毫米)；nm(纳米)；ym和um(微米)； M(摩尔浓度)；mM(毫摩尔浓度)；μΜ和uM(微摩尔浓度)；U(单位)；V(伏 特)；MW(分子量)；sec(秒)；min(s)(分钟/数分钟)；hr(s)(小时/数小时)； MgCl2(氯化镁)；NaCl(氯化钠)；OD42tl(420nm处的光密度)；PAGE(聚丙烯酰胺 凝胶电泳)；EtOH(乙醇)；LBCLuria肉汤)；LA(Luria琼脂)；PBS(磷酸盐缓冲盐 水[150mM NaCl, IOmM磷酸钠缓冲液，pH 7.2]) ； SDS (十二烷基硫酸钠)；Tris (三 (羟甲基)氨基甲烷)；w/v(重量对体积)；ν/ν(体积对体积)；wt% (重量百分 比)；PAA(过乙酸)；Per(过水解酶)；per(过水解酶基因)；Ms(耻垢分支杆菌)； MsAcT (耻垢分支杆菌酰基转移酶)；S54V变体(耻垢分支杆菌酰基转移酶变体，其包 括 S54V 取代)；MS (质谱)；Dial (DialBrands，Inc., Scottsdale, AZ) ； Kemira(Kemira Industrial Chemicals, Helsingborg, Sweden) ； EM Science (EM Science, Gibbston, NJ)； HP (Hewlett-Packard, Palo Alto, CA) ； ICN(ICN Pharmaceuticals, Inc., Costa Mesa,CA) ； Dial (Dial, Corp., Scottsdale, AZ) ； Pierce (Pierce Biotechnology, Rockford, IL) ； Amicon (Amicon，Inc.，Beverly, MA) ； ATCC (American Type Culture Collection, Manassas, VA) ； Amersham(Amersham Biosciences, Inc., Piscataway, NJ) ； Becton Dickinson (Becton DickinsonLabware，Lincoln Park, NJ) ； BioRad (BioRad，Richmond， CA) ； Difco (DifcoLaboratories, Detroit, MI) ； GIBCO BRL 或 Gibco BRL (Life Technologies, Inc., Gaithersburg, MD) ； MIDI (MIDI Labs, Newark, DE) ； Sigma 或 Aldrich (Sigma-Aldrichlnc.，St.Louis，MO) ； Sorvall (Sorvall Instruments，DuPont Co.的 子公司，Biotechnology Systems, Wilmington, DE) ； Agilent (Agilent Technologies, Palo Alto, CA) ； Minolta (Konica Minolta, Ramsey, NJ)；禾口 Zeiss (Carl Zeiss, Inc., Thornwood, NY)。实施例1过乙酸(PAA)对枯草芽孢杆菌孢子的杀灭曲线
在本实施例中，进行试验以确定过乙酸和过乙酸连同洗涤剂(商业可得的 PUREX [Dial]用在本实施例中)对枯草芽孢杆菌孢子的杀灭曲线。在这些试验中， 如本领域已知制备枯草芽孢杆菌孢子(参见，例如，Siccardi等，J.Bacterid.，121 13-19[1975])。用过乙酸(32wt%，在乙酸中；Aldrich)在96孔圆底微量滴定板(Costar) 中重复二次进行试验。在pH7.1的50mMKP04缓冲液(“Buffer”)中，或总体积为 50 μ 1的相同缓冲液中的1 500Purex稀释液(原始配方；Dial) (〃 Buffer+Det")中， 连续稀释PAA。试验中加入的PAA量是O、0.4、4或40mM。随后将含有IO9-IOici个 孢子的体积为5μ 1的孢子悬浮液加入每孔，室温下温育试验15分钟。随后将冰冷的 LB (150 μ 1)(参见，例如，Sambrook 等，“MolecularCloning: ALaboratory Manual"， 第二版(Cold Spring Harbor)，[1989])加入每孔，混合，将100 μ 1转移到新的96孔板。 对每一溶液进行连续稀释(总体积100 μ 1/孔)。将每次稀释的5 μ 1体积点在LA平板上 (Sambrook等，如上)，于37°C温育17_24h。对菌落计数，确定相对于各自的对照(单 独的缓冲液或缓冲液+洗涤剂，没有过酸)的孢子杀灭百分数。结果表示在表1中，以 一个试验的两次重复的均值表示。然而，试验重复进行两次得到相似结果。基于这些结 果，确定大约4至大约40mM范围的PAA足以在15分钟内杀灭枯草芽孢杆菌孢子。
表1: PAA对枯草芽孢杆菌孢子的杀灭
权利要求
1.用于在水溶液中产生过酸的酶系统，其适用于去污。
2.权利要求1所述的酶系统，其中所述系统包括至少一种酯底物、至少一种过氧化 氢源和至少一种酰基转移酶。
3.权利要求1所述的酶系统，其中所述过酸选自过乙酸、过壬酸、过丙酸、过丁 酸、过戊酸、过己酸、由长链脂肪酸制成的过酸和由短链脂肪酸制成的过酸。
4.权利要求2所述的酶系统，还包括至少一种化学过氧化氢产生系统，其中所述化 学过氧化氢产生系统包括选自过碳酸钠、过硼酸盐和过氧化氢脲的至少一种化学品。
5.权利要求2所述的酶系统，还包括选自氧化酶及其相应底物的至少一种酶促过氧 化氢产生系统。
6.权利要求2所述的酶系统，还包括至少一种酶促过氧化氢产生系统，其中所述酶 促过氧化氢产生系统包括至少一种酶，选自葡萄糖氧化酶、山梨醇氧化酶、己糖氧化 酶、胆碱氧化酶、醇氧化酶、甘油氧化酶、胆固醇氧化酶、吡喃糖氧化酶、羧基醇氧化 酶、L-氨基酸氧化酶、甘氨酸氧化酶、丙酮酸氧化酶、谷氨酸氧化酶、肌氨酸氧化酶、 赖氨酸氧化酶、乳酸氧化酶、香草基氧化酶、乙醇酸氧化酶、半乳糖氧化酶、尿酸氧化 酶、草酸氧化酶、黄嘌呤氧化酶，并且其中所述酶促过氧化氢产生系统还包括所述至少 一种酶的至少一种合适的底物。
7.权利要求1所述的酶系统，还包括至少一种另外的酶。
8.权利要求7所述的酶系统，其中所述至少一种另外的酶选自蛋白酶、纤维素 酶、淀粉酶和微生物细胞壁降解酶。
9.权利要求1所述的酶系统，其中所述至少一种酯底物是醇酯。
10.权利要求1所述的酶系统，还包括至少一种表面活性剂。
11.权利要求1所述的酶系统，还包括至少一种洗涤剂。
12.权利要求1所述的酶系统，其中所述系统是选自液体、颗粒、泡沫和乳液的形式。
13.用于去污的方法，其包括以下步骤a)提供需要去污的物品，和至少一种在水溶液中产生过酸的适用于去污的系统；b)在使得所述物品被去污的条件下将所述物品暴露于所述系统。
14.权利要求13所述的方法，其中所述暴露包括在碱性或酸性pH条件下将所述物品 暴露于所述系统。
15.权利要求13所述的方法，其中所述暴露包括在中性pH条件下将所述物品暴露于 所述系统。
16.权利要求13所述的方法，其中所述暴露包括在高温下暴露所述物品。
17.权利要求13所述的方法，其中所述系统是选自液体、颗粒、泡沫和乳液的形式。
18.权利要求13所述的方法，其中所述系统包括至少一种酯底物、至少一种过氧化 氢源和至少一种酰基转移酶。
19.权利要求13所述的方法，其中所述过酸选自过乙酸、过壬酸、过丙酸、过丁 酸、过戊酸、过己酸、由长链脂肪酸制成的过酸和由短链脂肪酸制成的过酸。
20.权利要求18所述的方法，其进一步包括至少一种化学过氧化氢产生系统，所述化学过氧化氢产生系统选自过碳酸钠、过硼酸盐和过氧化氢脲。
21.权利要求18所述的方法，其中所述系统进一步包括选自氧化酶及其相应的底物 的至少一种酶促过氧化氢产生系统。
22.权利要求18所述的方法，其中所述系统进一步包括至少一种酶促过氧化氢产生 系统，所述酶促过氧化氢产生系统选自葡萄糖氧化酶、山梨醇氧化酶、己糖氧化酶、 胆碱氧化酶、醇氧化酶、甘油氧化酶、胆固醇氧化酶、吡喃糖氧化酶、羧基醇氧化酶、 L-氨基酸氧化酶、甘氨酸氧化酶、丙酮酸氧化酶、谷氨酸氧化酶、肌氨酸氧化酶、赖氨 酸氧化酶、乳酸氧化酶、香草基氧化酶、乙醇酸氧化酶、半乳糖氧化酶、尿酸氧化酶、 草酸氧化酶、黄嘌呤氧化酶，并且其中所述酶促过氧化氢产生系统还包括所述至少一种 酶的至少一种合适的底物。
23.权利要求13所述的方法，其进一步包括至少一种酶。
24.权利要求23所述的方法，其中所述至少一种酶选自蛋白酶、纤维素酶、淀粉 酶和微生物细胞壁降解酶。
25.权利要求13所述的方法，其中所述至少一种酯底物是醇酯。
26.权利要求13所述的方法，其还包括至少一种表面活性剂。
27.权利要求26所述的方法，其中所述去污包括对被至少一种毒素和/或至少一种病 原体污染的物品进行去污。
28.权利要求27所述的方法，其中所述毒素选自肉毒杆菌毒素、炭疽毒素、蓖麻毒 蛋白、鲭鱼毒素、鱼毒、河豚毒素和真菌毒素。
29.权利要求27所述的方法，其中所述病原体选自细菌、病毒、真菌、寄生虫和朊 病毒。
30.权利要求29所述的方法，其中所述至少一种病原体选自芽孢杆菌属各种 (Bacillus spp.)、炭疽芽孢杆菌(B.anthracis)、梭菌属各种(Clostridium spp.)、肉毒梭 菌(C.botulinum)、产气荚膜梭菌(C.perfringens)、李斯特氏菌属各种(Listeria spp.)、 葡萄球菌属各种(Staphylococcus spp.) >链球菌属各种(Streptococcus spp.)、沙门氏菌属 各种(Salmonella spp.)、志贺氏菌属各种(Shigellassp.)、大肠杆菌(E.coli)、耶尔森氏 菌属各种(Yersinia spp.)、鼠疫耶尔森氏菌(Y.pestis)、弗朗西斯氏菌属各种(Francisella spp.)、土拉热弗朗西斯菌(F.tularensis)、弯曲菌属各种(Camplyobacter ssp.)、弧菌属 各种(Vibrio spp.)、布鲁氏菌属各种(Brucella spp.)、隐孢子虫属各种(Cryptosporidium spp.)、贾第虫属各种(Giardia spp.)、环孢子虫属各种(Cyclospora spp.)和旋毛虫属各种 (Trichinella spp.)。
31.权利要求13所述的方法，其中所述需要去污的物品选自硬表面、织物、食品、 饲料、衣物、装饰物、垫子、毯子、织品、医疗器械和兽医用器械。
32.权利要求13所述的方法，其中所述食品选自水果、蔬菜、鱼、海产品和肉。
33.权利要求31所述的方法，其中所述硬表面选自家居表面和工业表面。
34.权利要求33所述的方法，其中所述家居表面选自厨房台面、水池、碗橱、菜 板、桌子、架子、食品准备储存区、浴室设备、地面、天花板、墙壁和卧室区。
35.权利要求33所述的方法，其中所述工业表面选自食品加工区、饲料加工区、桌 子、架子、地面、天花板、墙壁、水池、切板、飞机、汽车、火车和船。
36.用于去污的方法，其包括步骤a)提供需要去污的物品，和至少一种在水溶液中产生过酸的适用于去污的系统；b)在水溶液中产生所述过酸；和c)在使得所述物品被去污的条件下将所述物品暴露于水溶液中的所述过酸。
37.权利要求36所述的方法，其中所述暴露包括在碱性或酸性pH条件下将所述物品 暴露于所述过酸。
38.权利要求36所述的方法，其中所述暴露包括在中性pH条件下将所述物品暴露于 所述过酸。
39.权利要求36所述的方法，其中所述暴露包括在高温下将所述物品暴露于所述过酸。
40.权利要求36所述的方法，其中所述系统是选自液体、颗粒、泡沫和乳液的形式。
41.权利要求36所述的方法，其中所述系统包括至少一种酯底物、至少一种过氧化 氢源和至少一种酰基转移酶。
42.权利要求36所述的方法，其中所述过酸选自过乙酸、过壬酸、过丙酸、过丁 酸、过戊酸、过己酸、由长链脂肪酸制成的过酸和由短链脂肪酸制成的过酸。
43.权利要求41所述的方法，其中所述系统包括至少一种化学过氧化氢系统，所述 化学过氧化氢系统选自过碳酸钠、过硼酸盐和过氧化氢脲。
44.权利要求41所述的方法，其中所述系统包括选自氧化酶及其相应的底物的至少 一种酶促过氧化氢产生系统。
45.权利要求41所述的方法，其还包括至少一种酶促过氧化氢产生系统，所述酶促 过氧化氢产生系统选自葡萄糖氧化酶、山梨醇氧化酶、己糖氧化酶、胆碱氧化酶、醇 氧化酶、甘油氧化酶、胆固醇氧化酶、吡喃糖氧化酶、羧基醇氧化酶、L-氨基酸氧化 酶、甘氨酸氧化酶、丙酮酸氧化酶、谷氨酸氧化酶、肌氨酸氧化酶、赖氨酸氧化酶、乳 酸氧化酶、香草基氧化酶、乙醇酸氧化酶、半乳糖氧化酶、尿酸氧化酶、草酸氧化酶、 黄嘌呤氧化酶，并且其中所述酶促过氧化氢产生系统还包括所述至少一种酶的至少一种 合适的底物。
46.权利要求36所述的方法，其进一步包括至少一种酶。
47.权利要求46所述的方法，其中所述至少一种酶选自蛋白酶、纤维素酶、淀粉 酶和微生物细胞壁降解酶。
48.权利要求36所述的方法，其中所述至少一种酯底物是醇酯。
49.权利要求36所述的方法，其还包括至少一种表面活性剂。
50.权利要求36所述的方法，其中所述去污包括对被至少一种毒素和/或至少一种病 原体污染的物品进行去污。
51.权利要求50所述的方法，其中所述毒素选自肉毒杆菌毒素、炭疽毒素、蓖麻毒 蛋白、鲭鱼毒素、鱼毒、河豚毒素和真菌毒素。
52.权利要求50所述的方法，其中所述病原体选自细菌、病毒、真菌、寄生虫和朊 病毒。
53.权利要求52所述的方法，其中所述至少一种病原体选自芽孢杆菌属各种(Bacillus spp.)、炭疽芽孢杆菌(B.anthracis)、梭菌属各种(Clostridium spp.)、肉毒梭 菌(C.botulinum)、产气荚膜梭菌(C.perfringens)、李斯特氏菌属各种(Listeria spp.)、 葡萄球菌属各种(Staphylococcus spp.) >链球菌属各种(Streptococcus spp.)、沙门氏菌属 各种(Salmonella spp.)、志贺氏菌属各种(Shigellassp.)、大肠杆菌(E.coli)、耶尔森氏 菌属各种(Yersinia spp.)、鼠疫耶尔森氏菌(Y.pestis)、弗朗西斯氏菌属各种(Francisella spp.)、土拉热弗朗西斯菌(F.tularensis)、弯曲菌属各种(Camplyobacter ssp.)、弧菌属 各种(Vibrio spp.)、布鲁氏菌属各种(Brucella spp.)、隐孢子虫属各种(Cryptosporidium spp.) >贾第虫属各种(Giardia spp.)、环孢子虫属各种(Cyclospora spp.)和旋毛虫属各种 (Trichinella spp.)。
54.权利要求36所述的方法，其中所述需要去污的物品选自硬表面、织物、食品、 饲料、衣物、装饰物、垫子、毯子、织品、医疗器械和兽医用器械。
55.权利要求36所述的方法，其中所述食品选自水果、蔬菜、鱼、海产品和肉。
56.权利要求55所述的方法，其中所述硬表面选自家居表面和工业表面。
57.权利要求56所述的方法，其中所述家居表面选自厨房台面、水池、碗橱、菜 板、桌子、架子、食品准备储存区、浴室设备、地面、天花板、墙壁和卧室区。
58.权利要求56所述的方法，其中所述工业表面选自食品加工区、饲料加工区、桌 子、架子、地面、天花板、墙壁、水池、切板、飞机、汽车、火车和船。
全文摘要
本发明提供了有效产生过乙酸用于去污应用的酶系统。在优选的实施方式中，本发明提供了包括酯底物、过氧化氢和至少一种酰基转移酶的系统。在一些特别优选的实施方式中，该系统进一步包括至少一种表面活性剂。在可选的优选实施方式中，本发明提供了至少一种野生型和/或变异的酰基转移酶。本发明在涉及广泛的化学和生物战争材料的净化中以及对于普通表面清洁和去污特别有用。
文档编号C12P7/00GK102016050SQ200680045735
公开日2011年4月13日 申请日期2006年12月8日 优先权日2005年12月9日
发明者G·怀特德, M·A·卡文 申请人:金克克国际有限公司